效价测定ppt课件.ppt

试验原理 试 剂 操作步骤 注意事项 临床应用一、试验原理待检待检血清血清2-me(巯基巯基乙醇乙醇)IgM抗体抗体分子裂解分子裂解IgG抗体分抗体分子不被灭活子不被灭活保持血清学保持血清学特性特性(致敏相致敏相应红细胞应红细胞)IgA抗体抗体分子部分分子部分灭活灭活失去与相应失去与相应红细胞凝集红细胞凝集的作用的作用 0.2mol/L 2-巯基乙醇应用液。 受检者血清。 5%A型和B型红细胞生理盐水悬液（标准红细胞）。 抗人球蛋白血清。三、操作步骤 1、吸取受检者血清0.4ml，加2-Me应用液0.4ml，混合，将试管口塞紧，置37水浴中2h（充分破坏IgM类抗体）。 2、排列小试管（10mm60mm）两排，每排10支，第一排每管各加生理盐水 0.4ml。 3、第1排第1管加2-Me处理血清0.4ml，混合，吸出0.6ml，移0.2ml至第2排第1管内，其余0.4ml移入第1排第2管内，混合。以此类推，作倍量稀释至第10管， 每管内留有 14, 1:2048等不同稀释度的血清各0.2ml。 4、第1排每管各加5%A型红细胞悬液0.2ml，第2排每管各加5%B型红细胞悬液0.2ml，置37水浴温育1h。 5、结果观察：如在前几管内发现有红细胞凝集者，是由于高效价IgG抗A(B)或IgA抗A(B)所引起，称为“盐水效价”。 6、其余红细胞未见凝集的试管，再以生理盐水洗涤3次，除去洗涤液，留取压实红细胞。 7、每管各加生理盐水 2滴，混合。 8、每管各取1滴，分别移至另一排小试管中，再各加抗人球蛋白血清1滴，混合。 9、1000rpm离心1min。 10、轻轻摇动试管，观察结果，红细胞凝集的最高稀释度的倒数即为IgG抗A或抗B效价。 加入2-Me后应塞紧盖子，防止其挥发，影响试验结果。置于37水浴箱水浴2小时，以充分破坏IgM抗体。 进行倍量稀释时应充分混匀，倍量稀释的加样量应准确。 也可使用二硫苏糖醇（dithiothreitol,DTT）灭活IgM抗体，以测定IgG抗体。DTT无恶臭味，反应快速，但对强抗体灭活效果较差。 O型孕妇孕期内抗体水平的动态监测，预测是否会发生ABO新生儿溶血病。