微生物检验实验室肠球菌属标准操作规程.doc

微生物检验实验室肠球菌属标准操作规程1.概述肠球菌属于1984年从链球菌属划出，单独成为一个菌属，包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、坚韧肠球菌、铅黄肠球菌、蒙氏肠球菌、海氏肠球菌、鹑鸡肠球菌和病臭肠球菌等18个种和1个变异株。临床上常见的菌株为粪肠球菌。2.标本类型血液、尿液、痰、穿刺液、脓液等标本。3.鉴定3.1 形态与染色 革兰阳性球菌，单个、成双或短链状排列。3.2 培养特性 在血琼脂平板上形成较小、灰白色，有a溶血或溶血环的菌落。在麦康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。3.3 生化反应 触酶试验阴性，分解甘露醇、山梨醇、胆汁七叶苷试验阳性、在含6.5%氯化钠的肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。3.4 鉴别要点3.4.1 本菌特征革兰阳性球菌，触酶试验阴性，在65g/L氯化钠中生长，胆汁、七叶苷试验阳性，45中生长。3.4.2与屎肠球菌的鉴别：粪肠球菌不分解阿拉伯糖，而屎肠球菌能分解阿拉伯糖3.4.3 与链球菌属和乳球菌属的鉴别：见表5-353.4.4 粪肠球菌与其他各主要菌种间的鉴别：见表5-36操作步骤3.5.1 触酶试验 阳性参见触酶试验标准操作规程3.5.2 鉴定 从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。4.药敏 参见药物敏感性试验标准操作规程及CLSI M100-S20最新版本文件.5.质量控制参见质量控制程序6.检验结果解释与分析在-内酰胺酶阴性球菌肠球菌中，氨苄西林药敏试验结果可预测阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等敏感性。青霉素药敏试验可预测氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等药敏结果。粪肠球菌中氨苄西林药敏结果可以预测亚胺培南的药敏结果。对于血培养和脑脊液中分离到的肠球菌，需做-内酰胺酶检测，-内酰胺酶阳性，则对青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素均耐药。为耐万古霉素肠球菌做氯霉素、红霉素、四环素和利福平药敏试验，根据结果进行治疗。氨基糖苷类高水平耐药株HLRA可用庆大霉素120ug/片和链霉素300ug/片筛选，无抑菌环为耐药，抑菌环10mm为非HLAR，对于抑菌环在79mm之间的菌株需用稀释法确认。对于肠球菌属，头孢菌素类、氨基糖苷类（仅筛选高水平耐药性）、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶和克林霉素在体外可能有活性（敏感），但在临床上耐药，所以不能报告肠球菌对这些药物敏感。表5-35属常见菌种的生物学特性菌种 甘露 山梨 山梨 精氨 阿拉 棉子 蔗 核 动 色 丙酮醇 醇 糖 酸 伯糖 糖 糖 糖 力 素 酸盐组1鸟肠球菌 + + + - + - + + - - +假鸟肠球菌 + + + - - + + + - - +棉子糖肠球菌 + + + - + + + + - - +病臭肠球菌 + + + - - - + + - - +组2粪肠球菌 + + - + - - + + - - +屎肠球菌 + - - + + - + + - - -卡氏黄色肠球菌 + - - + + + + + + + -蒙氏肠球菌 + - - + + + + + - + -铅黄肠球菌 + - - + + + + - + + -鹑肠球菌 + - - + + + + + + - - 组4坚韧肠球菌 - - - + - - - ND - - -海氏肠球菌 - - - + - + + ND - - -不称肠球菌 - - - + - + + ND - - +粪肠球菌变异株 - - - + - - - ND - - + 硫磺色肠球菌 - - - - - + + + - + -表5- 肠球菌属、链球菌属和乳球菌属细菌的生物学特性试验 肠球菌属 链球菌属 乳球菌属胆汁七叶苷 + - +65g/L氯化钠中生长 + - VPYR + - +45生长 + - -注：“+”为90%以上菌株阳性，“-”为90%以上菌株阴性，“V”为11%89%菌株阳性。7. 临床意义粪肠球主要引起感染，最常见为尿道感染，其中大部分与尿道器械操作、导尿等有关；其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。近年来，肠球菌属氨苄青霉素耐药株和庆大霉素高耐药株逐渐增多，耐万古霉素的肠球道菌国外也有较多报道，已使肠球菌所致重症感染的治疗成为临床棘手问题。8. 鉴定流程菌落观察：较小、灰白色、a溶血或溶血触酶试验-+棉子糖-+精氨酸-+阿拉伯糖-+蔗糖-涂片染色：G+球菌，单个、成双或短链排列+丙酮酸-+甘露醇-孤立肠球菌棉子糖肠球菌鸟肠球菌异味肠球菌+丙酮酸-粪变种+阿拉伯糖-屎肠球菌+动力-+色素-曼特肠球菌坚韧肠球菌肠道肠球菌铅黄肠球菌+动力-母鸡肠球菌参考文献1 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-GL23；2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南.20082 周庭银编著. 临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，20073 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，20064 MurrayPR.Manual O/F Clinical Mircrobilogy.9th ed.Washington:ASM Press,20075 ISO 15189:2007医学实验室-质量和能力认可准则.2007编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人：