肠杆菌科纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程.doc

肠杆菌科纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程1目的规范肠杆菌科细菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。2适用范围 本操作规程适用于肠杆菌科细菌。3选药原则在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。3.1现行版本的CLSI M02和M100对肠杆菌科细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。3.2细菌耐药监控网每年发布的监控要求。3.3本单位上一年度假单胞菌属细菌耐药监控数据。4质控用大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌ATCC35218（用于-内酰胺/-内酰胺抑制剂合剂）进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。质控频率参见药物敏感性试验标准操作规程。5材料和仪器M-H培养基，无菌生理盐水，药敏纸片，无菌棉签，35孵育箱，测量尺，标准比浊管或比浊仪。6操作步骤参见药物敏感性试验标准操作规程。7判断标准见表5-45.表5-45 肠杆菌科细菌纸片扩散试验判断标准 判断标准（mm） 药敏纸片 备注敏感 中介 耐药氨苄西林（10g） 17 1416 13 参见结果解释哌拉西林（100g） 21 1820 17氨苄西林/舒巴坦（10/10g） 15 1214 11哌拉西林/他唑巴坦（100/10g） 21 1820 17 头孢唑林（30g） 18 1517 14头孢克洛（30g） 18 1517 14头孢呋辛（30g） 18 1517 14头孢噻肟（30g） 23 1522 14 参见结果解释头孢他啶（30g） 18 1517 14 参见结果解释头孢吡肟（30g） 18 1517 14头孢他啶/克拉维酸（30/10g） 参见结果解释头孢噻肟/克拉维酸（30/10g） 参见结果解释亚胺培南（10g） 16 1415 13 参见结果解释美罗培南（10g） 16 1415 13 参见结果解释阿米卡星（30g） 17 1516 14 参见结果解释庆大霉素（10g） 15 1314 12 参见结果解释环丙沙星（5g） 21 1620 15 参见结果解释左氧氟沙星（5g） 17 1416 13 参见结果解释复方新诺明（1.25/23.75g） 16 1115 10 参见结果解释呋喃妥因（300g） 17 1516 14头孢哌酮/舒巴坦（75/75g） 21 1620 158注意事项8.1抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。变形杆菌属细菌可蔓延生长到某些抗菌药物的抑菌圈中，在量取抑菌圈直径时可忽略抑菌圈中薄的蔓延生长区域。测量复方磺胺药敏纸片的抑菌圈时，可忽略微弱的生长区域，而从细菌明显生长处量取抑菌圈直径。8.2沙门菌属和志贺菌属的细菌对一代、二代头孢菌素及头霉素体外试验敏感，但临床治疗无效，因此不应报告敏感。8.3肠杆菌属，枸橼酸杆菌属和沙雷菌属的细菌在使用三代头孢菌素治疗的过程中会产生耐药性，因此原本敏感的菌株可能会在使用抗菌药物治疗34日时产生耐药性，因此重复进行药物敏感试验是必要的。9结果分析9.1 分离自粪便标本的志贺菌属和沙门菌属的细菌仅需进行氨苄西林、一种氟喹诺酮类药物及复方新诺明的药物敏感试验，如从肠道外标本中分离到这些菌株，还需增加氯霉素和1种三代头孢菌素的药物敏感试验。9.2 对于脑脊液中分离到的肠杆菌科细菌，必须进行头孢他啶和头孢噻肟的药物敏感试验，以代替头孢噻肟和头孢唑林的药物敏感试验。9.3 对于沙门菌属和志贺菌属的细菌而言，氨基糖苷类抗菌药物可能在体外表现有抗菌活性，但在临床上无抗感染作用，所以这些细菌不能报告对氨基糖苷类抗菌药物敏感。9.4 肠道外沙门菌感染的病人所分离的沙门菌属细菌如对萘啶酸耐药，而对氟喹诺酮类敏感，在临床使用氟喹诺酮类时可能会治疗失败或对抗感染治疗反应迟缓。因此对肠道外感染的沙门菌属细菌需要其对萘啶酸的耐药性。如在临床上分离到这种细菌，应通知临床医师避免使用氟喹诺酮类药物。9.5 有关产ESBL大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和奇异变形杆菌的筛选和确证试验参见CLSI-M100-S19中的附件A。9.6 有关碳青霉稀酶肠杆菌科细菌的筛选和确证试验参见CLSI M100-S19中的附件G。参考文献 1CLSI.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing;Nineteenth Informational Supplement. CLSI document M100-S19.Wayne,PA:Clinical and Laboratory Standards Institute,20092 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，2006 编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人：