微生物检验实验室霍乱弧菌属标准操作规程.doc

微生物检验实验室霍乱弧菌属标准操作规程1. 概述霍乱弧菌可分为古典生物型和El-tor生物型；根据菌体抗原（即O抗原）可分为155个血清群，其中O1血清群和O139血清群能引起霍乱的发病和流行，是霍乱的病原体。2. 标本类型粪便等标本。3. 鉴定3.1 形态与染色 革兰阴性，菌体弯曲呈弧形或逗点状。3.2 培养特性 在TCBS琼脂平板上，可形成黄色的菌落；在双氢链霉素洗衣粉琼脂平板上形成心呈灰褐色的菌落；在血琼脂一板上形成较大的菌落，El Tor生物型可形成溶血。3.3 生化反应 氧化酶试验阳性；发酵葡萄糖、蔗糖、甘露醇、不发酵乳糖和阿拉伯糖；动力、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、霍乱红、硝酸盐还原和粘丝试验均阳性，精氨酸双水解酶试验阴性。3.4 鉴别要点3.4.1 本菌特征：运动活泼呈穿梭样运动，OX阳性，大多发酵甘露醇、精氨酸、鸟氨酸脱羧酶阳性，嗜盐性+，0/129敏感。3.4.2 与氧单胞菌属、邻单胞菌属的鉴别 见表5-46.表34 弧菌属与类似菌属的鉴别要点试验弧菌属气单胞菌属邻单胞菌属 0/129(150ug/片)S RS肌醇 -+氨苄西林（10 ug/片)SRR黏丝试验+-精氨酸双水解酶 -+赖氨酸脱羧酶 +注：“+”为90以上阳性，“-”为90以上阴性，“+-”为大多数阳性。3.4.3 确诊O1血清群霍乱弧菌必须具备的条件 涂片为革兰阴性，弧菌或杆菌。TCBS等选择性培养基上典型的菌落。动力试验阳性，符合生化特性。O1血清诊断血清凝集试验阳性。3.5 操作步骤3.5.1 在pH9.0的碱性蛋白胨水增菌6-8小时后转种TCBS琼脂平板。3.5.2 玻片凝集试验 从TCBS琼脂平板上或双氢链霉素洗衣粉琼脂平板上挑取可疑菌落，与霍乱弧菌多价血清作玻片凝集试验，以生理盐水做阴性对照，诊断血清发生凝集、生理盐水不发生凝集者为阳性。做初步鉴定试验后，将高度怀疑菌送疾病预防控制中心（CDC）做最后鉴定。4. 药敏参见 药物敏感性试验标准操作规程 及CLSI M100-S20最新版本文件。5. 质量控制参见 质量管理程序 。6. 检验结果解释与分析初次分离时采用pH9.0的碱性蛋白胨水增菌，孵育6-8小时，液体呈均匀混浊，表面形成菌膜。根据O1血清群其O抗原的ABC因子，又可进一步将其分为小川（AB）、稻叶(AC)和彦岛(ABC)等3个血清型；还可根据其产毒素基因的有无和对人的侵袭力，划分为流行株和非流行株。流行株才是霍乱真正的病原菌。部分菌株不被O1群霍乱弧菌多价血清所凝集，称之为非O1群霍乱弧菌，也称不凝集弧菌或不凝集霍乱弧菌。7. 临床意义霍乱弧菌是暴发流行性烈性肠道传染病霍乱的病原菌，该菌能产生霍乱肠毒素，作用于小肠粘膜，引起肠液大量分泌，表现为严重腹泻（米泔样便）、呕吐、脱水和酸中毒，病死率很高。粪便增菌培养（碱性胨水）玻片凝集阳性，生理盐水对照阴性初步报告TCBS或其他选择平板送CDC确诊快速诊断8. 鉴定流程参考文献1 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-GL23；2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南.20082 周庭银编著. 临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，20073 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，20064 MurrayPR.Manual O/F Clinical Mircrobilogy.9th ed.Washington:ASM Press,20075 ISO 15189:2007医学实验室-质量和能力认可准则.2007编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人：