血清天门冬氨酸氨基转移酶测定.doc
血清天门冬氨酸氨基转移酶测定1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。2 实验原理 本试剂以国际临床化学联合会(IFCC)推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。 样本中的天门冬氨酸氨基转移酶催化L-天冬氨酸和-氧代戊二酸氨基转移，生成草酰乙酸和L谷氨酸； 在还原型辅酶I（NADH+H+）和苹果酸脱氢酶（MDH）的存在下，草酰乙酸被还原为L-苹果酸，还原型辅酶I（NADH+H+）被氧化为辅酶I（NAD），从而使波长340 nm处的吸光度值下降。通过对波长340 nm处吸光度值的下降速率进行监测，即可测得样本中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的活性L-天门冬氨酸+a-酮戊二酸AST 草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+ NADH +H+ MDH苹果酸脱氢酶 L-苹果酸+NAD+3 标本 3.1 病人准备：12小时禁食。3.2 类型：血清。3.3 标本存放：3天内的活性损失：28保存：<8%；1525保存：<10%；标本稳定性：-20保存至少可稳定3个月。3.4 标本运输：常温条件下保存运输。3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司AST试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成 试剂1（R1）： 乳酸脱氢酶 1365 U/L NADH 0.26mmol/L L-天冬氨酸300mmol/L Tris缓冲液 88mmol/L试剂2（R2）： 苹果酸脱氢酶 1635 U/L 氧代戊二酸 36mmol/L Tris缓冲液 88mmol/L EDTA 5.0mmol/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。4.1.3 试剂稳定性与贮存：在28避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用和毒性，请勿直接接触皮肤及眼睛。一旦接触，即用大量清水冲洗。请勿吞服。4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的AST校准品对自动分析仪进行校准。4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。5 仪器 AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪，西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪，西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定。6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪，西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。7 质量控制 在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。8 计算方法 以AST复合校准品校准仪器后,在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。9 参考值范围 37：534 U/L（0.10.6kat/L） 我室的参考值:13-40 U/L10 临床意义丙氨酸氨基转移酶（ALT）旧称谷丙转氨酶（GPT），天门冬氨酸氨基转移酶（AST）旧称谷草转氨酶（GOT）。它们是氨基转移酶类的典型代表。氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给a-酮酸的反应。ALT是肝脏的特异性酶，仅在肝胆疾病时显著升高。而AST水平的升高和心肌或骨骼肌损伤，以及肝组织损害等都有关。因此同时进行ALT和AST的检测用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。AST/ALT比率可用于肝病的鉴别诊断。比率<1预示中度的肝损伤；比率>1和严重肝病有关，常见慢性肝病。病毒性肝炎，急性风湿性心肌炎、中毒性肝炎等此酶活性显毒增高。 11 操作性能11.1分析灵敏度：10.0U/L样本的吸光度变化率（A/min）应不小于0.003。 11.2线性范围：试剂（盒）线性范围应覆盖5450U/L。a) 线性相关系数（r）应不小于0.990；b) 550U/L 范围内，线性偏差应不超过3.0U/L；51450 U/L 范围内，线性偏差应不超过10。 11.3准确度：相对偏差（B）应不大于10%。 11.4精密度：(1)重复性：变异系数（CV）应不大于5%；(2)批间差：相对极差（R）应不大于5%。12 超出范围结果处理 试剂的线性范围为5450U/L。当测定样本中天冬氨酸氨基转移酶活性高于450U/L时，应对样本进行稀释后再进行测。应将样品用0.9g/L氯化钠溶液作1：9稀释，重新测定，结果乘以10。13 病危报警值的处理 无警告/危急值。14 方法局限性14.1 测定结果的准确性依赖于对所使用分析仪器校准、测定温度和测定时间的控制。 14.2 试剂中含有的乳酸脱氢酶（LDH）可以在测定延迟孵育时间内消除样本中内源性丙酮酸的干扰达1mmol/L，血清丙酮酸的正常水平为0.0340.102mmol/L。 14.3 高脂血或黄疸样本在波长340nm处有较高的吸光度。这类样本如含有高活性的天冬氨酸氨基转移酶，在测定过程中可能导致底物耗尽但在340nm仍维持有较高吸光度的现象，此时应对样进行稀释后再进行测定。 14.4试剂启用后，在210避光的条件下可稳定30天。若试剂混浊，或以水为空白在波长340nm处的吸光度值低于1.0A，则不能使用。15 补救措施 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。16 参考文献：16.1 叶应妩，王毓山，申子瑜主编全国临床检验操作规程中华人民共和国卫生部医政司编(第四版)16.2 钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社，2012年第5版16.3 府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版16.4 试剂说明书
