免疫球蛋白IgA测定.doc
免疫球蛋白IgA测定1检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果的准确。2原理 免疫透射比浊法 抗免疫球蛋白A抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物,出现凝集,进行透射比浊检测。通过加入PEG可促使反应迅速达到终点,可增加灵敏度,降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。3标本要求3.1使用新鲜血清,不使用血浆.3.2在采集血液后2h分离血清.3.3 8h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.4试剂4.1 试剂:上海罗氏诊断产品有限公司IgA试剂盒,国械注进20142405056 YZB/GER 5724-2014)4.1.1 试剂组成 R1:TRIS 缓冲液:20 mmol/l,pH 8.0;氯化钠:200 mmol/L;PEG:3.6%;防腐剂和稳定剂。 R2:抗人免疫球蛋白A抗体(羊):取决于滴度;TRIS缓冲液:20 mmol/l;氯化钠:150 mmol/L;防腐剂。4.1.2 试剂准备:试剂为即用式。4.1.3 试剂稳定性与贮存:2-8C下保存期限:见试剂标签上的有效期。 机上稳定期:90天。4.1.4变质指示:当试剂有浊度时,表明有细菌污染则试剂不能使用。4.2 校准品:使用罗氏多项生化校准品提供的IgA校准品对自动分析仪进行校准。4.3 质控品:使用正常值、病理值复合控制品。5 仪器 AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备:将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。6.2 试剂的检测:仪器开机后,检查各种试剂的位置,体积等确认无误后方可进行测定。6.3 项目基本参数:参见生化检验AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。6.4仪器操作步骤:参见生化检验AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪操作规程。7 质量控制 在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。8 计算方法 以IgA复合校准品校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以g/l报告。9 参考值成人0.7-4 g/L(70-400 mg/dL;4.38-25.0 umol/L)儿童及青少年0-1岁0.00-0.83 g/L(0-83 mg/dL;0.00-5.19 umol/L)1-3岁0.20-1.00 g/L(20-100 mg/dL;1.25-6.25 umol/L)4-6岁0.27-1.95 g/L(27-195 mg/dL;1.69-12.19 umol/L)7-9岁0.34-3.05 g/L(34-305 mg/dL;2.13-19.06 umol/L)10-11岁0.53-2.04 g/L(53-204 mg/dL;3.31-12.75 umol/L)12-13岁0.58-3.58 g/L(58-358 mg/dL;3.63-22.38 umol/L)14-15岁0.47-2.49 g/L(47-249 mg/dL;2.94-15.56 umol/L)16-19岁0.61-3.48 g/L(61-348 mg/dL;3.81-21.75 umol/L) 我室的参考值:0.6-4 g/l10 临床意义:IgA 约占血浆免疫球蛋白的13%,它的作用是保护皮肤及粘膜免受微生物的感染。它能结合毒素,与溶酶体一起具有抗病毒及细菌的功能。IgA 是体液分泌物,如:初乳、唾液和汗水内的主要免疫球蛋白。分泌IgA 可防止局部感染,在肠内和食物抗原结合有重要作用。在血清中,IgA 以单体、二聚体及三聚体等形式存在,而分泌型的IgA 全部为有添加链(分泌组分)的二聚体形式。 在慢性肝病、慢性感染、自身免疫性疾病(类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮)、结节病和威-奥综合症(Wiskott-Aldrich syndrome,X 连锁免疫缺陷综合症)时,会出现多克隆的IgA 水平升高。在IgA 骨髓瘤时单克隆IgA 升高。 IgA 的合成降低可见于获得性或先天性免疫缺陷疾病, 如布鲁顿丙球蛋白缺乏血症。另外,肠胃病蛋白流失和烧伤由皮肤的流失等,使IgA 合成下降。11 操作性能11.1 线性范围:0.5-8 g/l11.2精密度 采用内部协议重复检测人样本和质控品(n=21),结果如下: 标准应用(IGA-2)样本批内精密度批间精密度均值变异系数%均值变异系数%g/Lumol/Lg/Lumol/L低值质控1.9512.191.032.3414.631.65高值质控3.5222.000.675.9637.251.96人血清 0.553.442.540.523.254.09 敏感应用(IGAP2)样本批内精密度批间精密度均值变异系数%均值变异系数%g/Lumol/Lg/Lumol/L高值质控1.9412.130.671.9912.441.18低值质控0.090.561.090.090.560.84人血清 0.422.630.690.412.560.7112 超出范围结果处理 本法线性上限为8.0 g/l。如样品测定值超过上限时,应将样品用0.9氯化钠溶液作1:4稀释,重新测定,结果乘以5。13 病危报警值的处理 无警告/危急值14 方法局限性14.1标准应用(IGA-2):50-800 mg/dL(0.50-8.00 g/L;3.13-50.0 umol/L)通过使用复检功能对高浓度的样本以1:5.6的稀释比例进行检测。复检后的结果将由系统自动乘以5.6倍的稀释倍数得出原样本的结果。14.2敏感应用(IGAP2):10-400 mg/dL(0.10-4.00 g/L;0.63-25.0 umol/L)通过使用复检功能对高浓度的样本以1:3的稀释比例进行检测。复检后的结果将由系统自动乘以3倍的稀释倍数得出原样本的结果。检测下限:标准应用(IGA-2):4 mg/dL(0.04 g/L;0.25 umol/L);敏感应用(IGAP2):1 mg/dL(0.01 g/L;0.06 umol/L)。检出低限为分析物可区别于零的最低可检测量,计算公式为在最低标准上加上3个标准差(标准13 SD,重复率,n21)15 补救措施 当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修。16 参考文献:16.1叶应妩,王毓山,申子瑜主编全国临床检验操作规程中华人民共和国卫生部医政司编(第四版)16.2钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社,2012年第5版16.3府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版16.4试剂说明书。