血清肌酸激酶MB同工酶测定.doc
血清肌酸激酶MB同工酶测定1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。2 实验原理 使用CK-M 多克隆抗体对肌酸激酶（CK）中CK-M同工酶的活性进行抑制后，采用德国临床化学会（DGKC）和国际临床化学会（IFCC）推荐的连续监测法测定余下的肌酸激酶（CK）活性。其反应原理如下： CK-MM 型同工酶 + CK-M抗体 CK-MM型同工酶的活性被抑制；CK-MB 型同工酶+ CK-M 抗体 50%的CK-MB 型同工酶的活性被抑制； 剩余的50%无活性的CK-MB型同工酶 + N-乙酰半胱氨酸 有活性的CK-B型同工酶CK同工酶 磷酸肌酸 + ADP 肌酸 + ATP己糖激酶(HK)(G6P-DH) ATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖-6-磷酸 葡萄糖-6-磷酸+NADP+ 6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+ 式中：ADP为二磷酸腺苷；ATP为三磷酸腺苷；NADP+为氧化型辅酶II；NADPH+H+为还原型辅酶II。 在上述反应中，NADPH+H+ 的生成速率与样本中肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）的活性成正比。通过在波长340nm 处监测吸光度值的上升速率，即可测得样本中肌 酸激酶B 型同工酶（CK-B）的活性。肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）活性相当于1/2肌酸激酶MB型同工酶的活性，将所测得的肌酸激酶B型同工酶（CK-B）的活性乘以2，即为肌酸激酶MB 型同工酶（CK-MB）的活性。3 标本：3.1 病人准备：无特殊。3.2 类型：血清或肝素血浆。3.3 标本存放：稳定性：-20保存稳定4周（避光保存）。活性损失：28保存24小时或1822保存1小时至少损失10%。3.4 标本运输：常温条件下保存运输。血标本应尽快送往化验室,室温下放置3045分钟,后离心,放置时间不得超过3h.血清必须吸出,转移至有盖的试管中.3.5 标本拒收标准：细菌污染的标本。4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司CK-MB试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成 试剂1（R1）： D-葡萄糖 27mmol/L 咪唑缓冲液 60mmol/L 乙酸镁 14mmol/L NADP 2.7mmol/L N-乙酰半胱氨酸 27mmol/L AMP 7mmol/L 试剂2（R2）： 磷酸肌酸 160mmol/L 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 20KU/L ADP 11mmol/L 糖激酶 20KU/L CK-M 抗体4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。4.1.3 试剂稳定性与贮存：28避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。试剂1 与试剂2 启用后，在210避光的条件下可稳定20天。4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。4.1.5 注意事项：试剂中含稳定剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。4.2 校准品：4.2.1采用以检测用水为空白的方式进行校准。4.2.2校准及校准频次的要求：正常情况下，应每周至少对测定进行一次校准。当发生下列情况时（如：使用的试剂批号发生改变时、使用的仪器进行维修、保养或关键部件进行更换后、质控品的测定结果发生漂移或超出规定的范围等），应重新对测定进行校准后再对患者的样本进行检测。4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。5 仪器 AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪。6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。7 质量控制 在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。8 计算方法 在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。9 参考值范围：0-24U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。我室参考值0-25 u/L10 临床意义肌酸激酶主要由存在于肌肉中的同工酶（CK-M）和存在于脑中的同工酶（CK-B）组成。在血清中CK形式为CK-MM，CK-MB，CK-BB和巨酶等的二聚物。在检测心肌损伤时CK-MB特异性很高。因此，CK-MB常用于心肌梗死的诊断和监视。11 操作性能11.1试剂空白：a)试剂空白吸光度应不大于0.500；b)试剂空白吸光度变化率(A/min)应不大于0.001。11.2分析灵敏度：20U/L样本的吸光度变化率（A/min）应不小于0.002。线性范围：试剂（盒）线性范围应覆盖01000U/L。a) 线性相关系数（r）应不小于0.990；b) 50U/L 范围内线性偏差应不超过10U/L，50U/L 范围内线性偏差应不超过10.0%。准确度：回收率（R）应在10015%范围内。11.3精密度：（1）重复性：变异系数（CV）应不大于5%；（2）批间差：相对极差（R）应不大于10%。11.4稳定性：试剂（盒）在28贮存至12 个月末，试剂性能应符合试剂空白、分析灵敏度、线性范围、精密度（重复性）和准确度的要求。12 超出范围结果处理 本法对CK-Mb活力的线性上限为1000U/L，当测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液1:4稀释，重新测定。结果乘以5。13 病危报警值的处理 无警告/危急值。14 方法局限性14.1测定结果的准确性依赖于对所使用分析仪器校准、测定温度和测定时间的控制。14.2样本中甘油三酯浓度1500mg/dL、胆红素浓度20 mg/dL、血红蛋白浓度50mg/dL时，对测定结果无干扰。14.3试剂启用后，在210避光的条件下可稳定20 天。若试剂混浊，或以水为空白在波长340nm处的吸光度值大于0.5，则不能使用。15 补救措施 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。16 参考文献16.1叶应妩，王毓山，申子瑜主编全国临床检验操作规程中华人民共和国卫生部医政司编(第四版)16.2钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社，2012年第5版16.3府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版16.4试剂说明书
