新生儿溶血病血清学检查ppt课件.ppt

ABO新生儿溶血病血（新生儿溶血病血（HDN）是由于母婴）是由于母婴ABO血型不合，母体的血型不合，母体的IgG抗抗A 或抗或抗B经过胎盘经过胎盘进入胎儿血循环破坏胎儿红细胞所引起。此病进入胎儿血循环破坏胎儿红细胞所引起。此病多见于多见于O型母亲所生型母亲所生A型或型或B型婴儿，与型婴儿，与O型母型母亲血清中所含亲血清中所含IgG抗抗A（B）抗体有关。新生儿）抗体有关。新生儿溶血病血清学检查主要是进行三项试验：溶血病血清学检查主要是进行三项试验：直抗直抗试验、游离试验和释放试验试验、游离试验和释放试验。 抗人球蛋白血清 患儿5%红细胞悬液 患儿血清 A型、B型、O型红细胞悬液 酶处理A型、B型、O型试剂红细胞悬液本试验用于检测受检者红细胞上是否存在不完全本试验用于检测受检者红细胞上是否存在不完全抗体抗体。 1. 1.取小试管取小试管2 2支，按下表标记及加样支，按下表标记及加样 试剂试剂 被检管被检管 阴性对照管阴性对照管 患儿患儿5%5%红细胞悬液红细胞悬液 1 1滴滴 1 1滴滴 0.9%0.9%生理盐水生理盐水 1 1滴滴 抗球蛋白血清抗球蛋白血清 1 1滴滴 2. 混匀，混匀，3400 rpm3400 rpm，离心，离心15s15s，轻轻摇动，观察结果。，轻轻摇动，观察结果。 本试验用于检查新生儿血清中是否有游离的本试验用于检查新生儿血清中是否有游离的IgGIgG型抗体型抗体 1.取小试管取小试管3 3支支 ，按下表标记及加样，按下表标记及加样 试剂试剂 Ac管管 Bc管管 Oc管管 患儿血清 1滴 1滴 1滴 A型试剂红细胞悬液 1滴 B型试剂红细胞悬液 1滴 O型试剂红细胞悬液 1滴 2.混匀后混匀后37水浴水浴30min，用生理盐水洗涤，用生理盐水洗涤3次，最后一次，最后一次吸尽盐水，然后向各管中加次吸尽盐水，然后向各管中加1滴抗球蛋白试剂，滴抗球蛋白试剂，3400 rpm/ 分，离心分，离心15s，轻轻摇动，观察结果。，轻轻摇动，观察结果。 本试验和直抗试验相同，也是检测新生儿红细胞本试验和直抗试验相同，也是检测新生儿红细胞上的致敏的血型抗体，只是方法有所不同。释放试验上的致敏的血型抗体，只是方法有所不同。释放试验首先利用特殊的方法将致敏在新生儿红细胞上的抗体首先利用特殊的方法将致敏在新生儿红细胞上的抗体放散下来，然后再检测放散液中的抗体。放散下来，然后再检测放散液中的抗体。1、取洗涤后的压积红细胞，加等量盐水。、取洗涤后的压积红细胞，加等量盐水。2、混匀后，置于、混匀后，置于56水浴中不停摇动水浴中不停摇动7-10min。3、取出后立即高速离心，、取出后立即高速离心，3000 rpm/ 分分2-3min，如果，如果 有可能，则使用预先加热过的离心杯。有可能，则使用预先加热过的离心杯。4、离心后、离心后马上马上吸出上清液置于小试管中再次离心吸出上清液置于小试管中再次离心3000 rpm/ 分分 1min。取上清液分成。取上清液分成3等份于等份于 3个小试管中，个小试管中，分别标记上分别标记上“A”、“B”、“O”。按下表标记及。按下表标记及加样加样 试剂 A管 B管 O管酶处理A型红细胞悬液 1滴酶处理B型红细胞悬液 1滴酶处理O型红细胞悬液 1滴 5、混匀后、混匀后37水浴水浴30min，用生理盐水洗涤，用生理盐水洗涤3次，次，最后最后 一次吸尽盐水，然后向各管中加一次吸尽盐水，然后向各管中加1滴抗人球滴抗人球蛋白试剂，蛋白试剂，3400 rpm/ 分，离心分，离心15s，轻轻摇动，轻轻摇动，观察结果。观察结果。 11、离心后要轻摇观察结果，摇动时不要使劲地甩试管，离心后要轻摇观察结果，摇动时不要使劲地甩试管， 要轻摇或用手指轻弹。要轻摇或用手指轻弹。 22、加抗球蛋白之前要加抗球蛋白之前要3 3次洗涤，最后一次在倒掉上清后次洗涤，最后一次在倒掉上清后 不要再倒转试管，而是直接置于吸水纸上吸尽盐水。不要再倒转试管，而是直接置于吸水纸上吸尽盐水。 33、热放散时应严格注意温度和时间，温度过高，细胞易热放散时应严格注意温度和时间，温度过高，细胞易 溶解，过低抗体放散不完全。在释放抗体时要不时地溶解，过低抗体放散不完全。在释放抗体时要不时地 摇动，以促进抗体从细胞上游离。摇动，以促进抗体从细胞上游离。 44、抗体释放后应立即分离，以免其重新结合到细胞上去。抗体释放后应立即分离，以免其重新结合到细胞上去。