第五章DNA操作技术ppt课件.ppt

能识别专一的核苷酸顺序，并在识能识别专一的核苷酸顺序，并在识别点附近的一些核苷酸上切割别点附近的一些核苷酸上切割DNA分子中的双链，但是切割的分子中的双链，但是切割的核苷酸顺序没有专一性，是随机的。核苷酸顺序没有专一性，是随机的。代表代表EcoB、EcoK(II型)限制性内切酶 能识别专一的核苷酸顺序，并在该能识别专一的核苷酸顺序，并在该顺序内的固定位置上切割双链。顺序内的固定位置上切割双链。 II 型限制性内切酶的识别顺序是一型限制性内切酶的识别顺序是一个回文对称顺序个回文对称顺序(palindrome)，即，即有一个中心对称轴，从这个轴朝二有一个中心对称轴，从这个轴朝二个方向个方向“读读”都完全相同。都完全相同。III型限制性内切酶型限制性内切酶 有专一的识别顺序，但不是对称的有专一的识别顺序，但不是对称的回文顺序回文顺序,在识别顺序旁边几个核在识别顺序旁边几个核苷酸对的固定位置上切割双链。苷酸对的固定位置上切割双链。粘性末端；是交错切割，结果形成两条单链末端，粘性末端；是交错切割，结果形成两条单链末端，这种末端的核苷酸顺序是互补的，可形成氢键，这种末端的核苷酸顺序是互补的，可形成氢键，所以称为粘性末端。所以称为粘性末端。垂直线表示中心对称轴，从两侧垂直线表示中心对称轴，从两侧“读读”核苷酸顺核苷酸顺序都是序都是GAATTC或或CTTAAG，这就是回文顺序，这就是回文顺序（palindrome）。）。_和和表示在双链上交错切割表示在双链上交错切割的位置，切割后生成的位置，切割后生成5G和和AATTC3、3CTTAA和和G5二个二个DNA片段，各有一片段，各有一个单链末端，二条单链是互补的，其断裂的磷酸个单链末端，二条单链是互补的，其断裂的磷酸二酯键以及氢键可通过二酯键以及氢键可通过DNA连接酶的作用而连接酶的作用而“粘粘合合”。II型酶切割方式的另一种是在同一位置上切型酶切割方式的另一种是在同一位置上切割双链，产生平头末端。例如割双链，产生平头末端。例如EcoRV 的识的识别位置是：别位置是： 5 GAT|ATC 33 CTA|TAG 5 切割后形成切割后形成5 GAT和和ATC 3、 3 CTA和和TAG 5。这种末端同样。这种末端同样可以通过可以通过DNA连接酶连接起来。连接酶连接起来。（同切酶或异源同工酶）（同切酶或异源同工酶）其差其差别只在于当识别顺序中有甲基化的别只在于当识别顺序中有甲基化的核苷酸时，一种限制性内切酶可以核苷酸时，一种限制性内切酶可以切割，另一种则不能。切割，另一种则不能。HpaHpa和和MspMsp的识别顺序都是的识别顺序都是5GCG_G35GCG_G3，如果其中，如果其中有有5-5-甲基胞嘧啶，则只有甲基胞嘧啶，则只有HpaHpa能能够切割。够切割。0.5 g的的1kb DNA Ladder 0.8%TAE琼脂糖凝胶，琼脂糖凝胶，EB染色染色 Figure4.16Estimation of the sizes of DNA fragments in an agarose gel.绘制酶切图谱绘制酶切图谱绘制酶切图谱Figure4.19Ligation: the final step in construction of a recombinant DNA molecule.Next Chap