PEI转染试剂的Protocol.doc

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PEI转染试剂的Protocol.doc

PEI转染Protocol1. 转染前一天（24h左右）胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染时汇合度为7090%。2. 转染前1h，将细胞培养基更换为Opti-MEM或者DMEM基础培养基（若使用Opti-MEM，PEI转染效果更佳）。3. 用一定体积的Opti-MEM稀释质粒，小心混匀，记为A液；用相等体积的Opti-MEM稀释PEI，小心混匀，记为B液（质粒：PEI=1：2，W/W)，室温静止5min。4. 将B液缓慢加到A液中并混匀，最好使用旋涡振荡器边加边震荡。然后室温放置20min。5. 将DNA-PEI混合液缓慢加入到细胞培养基中，轻轻混匀。6. 转染4h后更换为完全培养基。培养皿面积(cm2)转染DNA量（ug）稀释DNA/PEI的培养基体积（ul）96孔板0.320.22548孔板1.10.53524孔板1.90.85012孔板3.51.61006孔板9.642506cm平板21.5850010cm平板56.716100015cm平板1473220001 0 平平 0 .平 0.平 .孔0.孔 .孔 .孔 . 孔（基的（面基养为更匀匀中养细慢缓置放。边加涡使好匀液加缓静温/ 质记心，积等，心，稀的）佳效转（础基者换培胞 % 合染其，细计胞消右（

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