SDS-PAGE所有详细试剂配方.doc
SDS-PAGE30%聚丙烯酰胺溶液-30%（w/v）Acrylamide 【组分浓度】各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)30%Acr-Bis(29:1)1000ml100ml29%Acrylamide(丙烯酰胺)290g29g1%BIS(N,N-亚甲丙烯酰胺)10g1g【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克N,N-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。0.45µm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4避光（用铝箔纸包扎起来）保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。【保存条件】4避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。称量丙烯酰胺和N,N-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。1MTris-HCL（pH6.8）(浓缩胶buffer)【组分浓度】1MTris-HCL名称用量备注Tris12.1g去离子水80ml浓盐酸9ml(36%的浓盐酸)预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方法】称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。【保存条件】室温保存。【注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护。1.5MTris-HCL（pH8.8）(分离胶buffer)【组分浓度】1.5MTris-HCL名称用量备注Tris18.17g去离子水80ml浓盐酸3ml(36%的浓盐酸)预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方法】1L称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。（1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。）【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 10%十二烷基硫酸钠SDS溶液-10%(w/v)SDS 【组分浓度】10%(w/v)SDS名称用量备注SDS10g去离子水80ml加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方法】称取2g高纯度的SDS置于100200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68加热溶解，滴加浓盐酸调节PH至7.2，定容至20ml后，室温保存【保存条件】室温保存【注意事项】保存条件： 4保存。注意事项： 易燃，有腐蚀性，请注意防护。 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。保存条件： 4保存。注意事项： 易燃，有腐蚀性，请注意防护。 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套对人体有害，请注意防护。10%过硫酸铵溶液-10%(w/v)AP 【组分浓度】10%(w/v) 过硫酸铵名称用量备注过硫酸铵0.1g去离子水1ml现配现用【配制方法】称取0.1g过硫酸铵置于1.5ml离心管，加1mL去离子水吹打溶解，4保存【保存条件】4保存【注意事项】10%过硫酸铵溶液在4保存时，可使用2周左右，超过期限会失去催化作用5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液- 5×Tris-Glycine buffer （SDS-PAGE电泳缓冲液）【组分浓度】各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)1000ml500ml0.125M Tris15.1g1.25M glycine(甘氨酸)94.0g0.5%(W/V)SDS5.0g【配制方法】称取15.1gTris，94.0g甘氨酸（glycine），5.0gSDS，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存。得0.125mol/L Tris-1.25mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释5倍。【保存条件】室温保存，两年有效。【注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。 电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液。 5×SDS-PAGE加样缓冲液- 5×SDS-PAGE Loading Buffer 【组分浓度】0.25MTris-HCL(pH6.8)；10%(W/V)SDS；0.5%(W/V) BPB(溴酚蓝)；50%(V/V) 甘油；5%(W/V)-巯基乙醇(2-ME)各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)5ml3ml1MTris-HCL(pH6.8)1.25mlSDS0.5gBPB(溴酚蓝)25mg甘油2.5ml（0.5mL/份）分装，室温保存，使用前加25L 2-ME/小份，保存一个月左右。-巯基乙醇(2-ME) 0.25ml【配制方法】量取1.25mL 1MTris-HCL（pH6.8），0.5g SDS，25mg BPB，2.5mL甘油，置于10mL塑料离心管中，加去离子水溶解后，定容至5mL，小份（0.5mL/份）分装，于室温保存。使用前将25L的2-ME加入到每小份中。加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。【保存条件】-20保存，至少一年有效。 【注意事项】SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT和巯基乙醇，有轻微刺激性气味，必须完全溶解后再使用。 摘自Takara 商品目录-实验室常规试剂配制方法 TEMED原液直接使用考马斯亮蓝R-250染色液 【组分浓度】0.1%(w/v)考马斯亮蓝R-250，25%(v/v)异丙醇，10%(v/v)冰醋酸各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)1000ml400ml备注考马斯亮蓝R-2501.0g0.4g异丙醇250ml100ml搅拌溶解，可用甲醇替代冰醋酸100ml40ml搅拌均匀去离子水650ml260ml搅拌均匀，滤纸除去颗粒物，室温保存考马斯亮蓝染色脱色液【组分浓度】10%(v/v)醋酸，5%(v/v)乙醇名称用量备注冰醋酸100ml乙醇50ml去离子水850ml充分混匀后使用4使匀 子 乙 醋备用名乙 /%) % 色色蓝保温物除滤 子均 醋替替用 丙 0 蓝备 0 (或(的分积名分醋醋 0醇异 %， 亮考/(.浓液染 蓝亮使接 法方试常-目 用后溶必味刺有醇基 量 (样蛋 -项项。有少存件条右右个下可 入份到 将用存室，份 （， 至解子去管料塑 油甘 0 法方 )(基右左一份 - 用保室分 甘 蓝蓝 ( 量质(的成所名分组 醇乙) 油甘/)酚 /( (). - 0浓 × -液加 - 泳新应泳最了， 用可，回冲 过不用使的项项效年存件件存倍倍用液冲氨/ . .保，0 容溶拌解溶或水0用 0， 甘. 法法0 0酸酸 0 量或 的各所同名分度浓液冲电 - -缓酸- 作化会期右周可时保溶硫项项保件件保保解打子 加 .置硫 法方制现 子 酸备用名酸过 (0浓 ) 0-溶硫护意注有套次并实，健安为 盖请，发 意，腐匀燃 项乙意保醋 件存乙操性一%验请 健安的 色 盖保请使挥除 防请子性有易 ：替事。 保件0条保室 备 至.至 调浓加(热 水离名的 ，醋烧 0醇 的度， 法方保/室后0浓 水 子0 使备用名 方) 0-度 )%用-液 酸刺烷有 量 (个 降 约 液高。度，异存化度 右的 下值 再却液 项事意保份件件存。保0过存。 ， 稀，（混 子 . . 油 . 存温菌 高， 液将 要需 加 溶搅)水去基 碱一 】方保室室 容定子甘确验预蓝浓 盐 子 . 备 用 名 质 所 分 醇- 护防油注性/刺项酚项存件件(存位 个00)大的溶 每温差0的温 溶 为， 后却液 应温后灭高- 至 将 新约- 最 约， 约 回（ 要 节 不 .>的，分项，离 件碱 倍法用法保温，/0容水 离子 确已)盐保% 盐 容子溶 备溶用名 -用 度 浓） - 料材量含 还因0作谨酸也毒丙 为具面戴 酰烯亚 0胺量性或累作的收皮可毒名的有度项意液）扎包用发为健实次护- 浓(酸酸 制硫置子保件项保周会作缓 滤过 淀如制新燃月， 过得使保的或光是脱操发性可 得请不格存的）包铝（使瓶挥储质和防过微 有. 0：积水，溶 搅水保离）保热 0 体溶丙亚调 胺热克法水方制 0胺胺 亚 ( 0胺法烯 保 0 0 :( 名量)(体0各所 体名分度浓- 液 烷）/0 -液 酰聚 约 液 化 度 再 事 意 液0）存 分所(过 ( 0 ，胺 亚 方 胺亚体水.，0 和储 铝）.4
