实验-土壤中产淀粉酶菌株的筛选ppt课件.ppt

采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物生物制药学实验生物制药学实验实验实验1-5 产淀粉酶菌株的筛选及诱变系列实验产淀粉酶菌株的筛选及诱变系列实验采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物实验需知实验需知o 实验分组：实验分组：2个实验室，每个实验室分个实验室，每个实验室分6组（名组（名单上报）单上报），每次实验结束留，每次实验结束留1组同学值日组同学值日o 实验成绩：实验成绩：占期末总成绩的占期末总成绩的20%，包括，包括实验出实验出勤、实验操作、实验结果及实验报告撰写勤、实验操作、实验结果及实验报告撰写o 实验结束：实验结束：将实验用品收拾整齐，由将实验用品收拾整齐，由实验老师实验老师确认实验结束确认实验结束后方可离开后方可离开o 实验报告：实验报告：实验目的、实验原理、实验步骤实验目的、实验原理、实验步骤（注意事项）、实验结果、思考题（注意事项）、实验结果、思考题采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物系列实验内容系列实验内容o 实验实验1 土壤中产淀粉酶菌株的筛选土壤中产淀粉酶菌株的筛选 （1、2）o 实验实验2 产淀粉酶菌株的诱变剂量选择产淀粉酶菌株的诱变剂量选择 o 实验实验3 紫外诱变剂突变菌株的初筛紫外诱变剂突变菌株的初筛 o 实验实验4 紫外诱变剂突变菌株的复筛紫外诱变剂突变菌株的复筛 o 实验实验5 高产淀粉酶生产菌株的稳定性及淀粉酶高产淀粉酶生产菌株的稳定性及淀粉酶活力测定活力测定 采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物背景知识背景知识淀粉酶（淀粉酶（amylase, Amy, AMS ）：）：o 能水解淀粉、糖原和有关多糖中的能水解淀粉、糖原和有关多糖中的O-葡萄糖键葡萄糖键的酶的酶 o 药物：助消化药，治疗功能性消化不良药物：助消化药，治疗功能性消化不良采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物背景知识背景知识o 产淀粉酶微生物：产淀粉酶微生物：细菌、真菌细菌、真菌等等o 菌种分离与筛选步骤：菌种分离与筛选步骤： 采样采样培养培养分离分离筛选筛选o 诱变育种步骤：诱变育种步骤： 诱变诱变初筛初筛复筛复筛性能检测性能检测采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物背景知识背景知识采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物实验实验1 土壤中产淀粉酶菌株的筛选（土壤中产淀粉酶菌株的筛选（1）采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物实验目的实验目的o 掌握菌种分离与筛选的方法掌握菌种分离与筛选的方法o 从土壤中筛选出能够合成分泌淀粉酶的微生物从土壤中筛选出能够合成分泌淀粉酶的微生物采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物实验原理实验原理o 自然界微生物种类繁多，有些微生物能够以自然界微生物种类繁多，有些微生物能够以淀淀粉粉作为碳源进行生长繁殖，这是因为它们能够作为碳源进行生长繁殖，这是因为它们能够合成分泌合成分泌淀粉酶淀粉酶。o 当能合成淀粉酶的微生物在当能合成淀粉酶的微生物在含有淀粉的固体培含有淀粉的固体培养基养基中生长时，会将淀粉酶分泌到菌体周围，中生长时，会将淀粉酶分泌到菌体周围，使菌落周围的淀粉水解成为小分子量的糊精、使菌落周围的淀粉水解成为小分子量的糊精、聚糖和单糖。这些水解产物聚糖和单糖。这些水解产物不能与碘作用不能与碘作用，从，从而在菌体周围形成而在菌体周围形成透明圈透明圈。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物实验步骤实验步骤 1. 筛选培养基的配制（已完成）筛选培养基的配制（已完成）o 可溶性淀粉可溶性淀粉2 g，NaCl 5 g，牛肉膏，牛肉膏5 g，蛋白胨，蛋白胨10 g，琼脂，琼脂20 g，水，水1000 mL。 2. 倒平板（每组倒平板（每组6个，每个平板个，每个平板10mL左右）左右）采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物实验步骤实验步骤3. 土样的采集土样的采集o 各实验室分别取各实验室分别取三种三种不同环境的土样并记录当不同环境的土样并记录当时取样环境情况（时取样环境情况（1-2、3-4、5-6每两小组在同每两小组在同一个地方进行取样），通常取一个地方进行取样），通常取离地面离地面515cm处的土壤处的土壤。4. 稀释分离稀释分离o 取土样取土样1 g，加入，加入9 mL无菌水，逐步稀释至无菌水，逐步稀释至105、106、107 （单数组）或（单数组）或106、107、108（双数（双数组）组） ，每个梯度涂，每个梯度涂2个平板。个平板。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物10ml1g9ml9ml9ml9ml9ml9ml10-110-210-710-610-510-410-31ml1ml1ml1ml1ml稀 释1ml采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物分离分离采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物实验步骤实验步骤5.各组做好标记，置于各组做好标记，置于30 恒温培养恒温培养48 h（倒置培养？倒置培养？）6. 产淀粉酶菌株的鉴定产淀粉酶菌株的鉴定（下次课）（下次课） 采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物6. 产淀粉酶菌株的鉴定产淀粉酶菌株的鉴定p倒平皿（注意倒平皿（注意培养基状态、体积、表面平整培养基状态、体积、表面平整）：）：3个个p用接种环挑取单菌落到无菌瓶皿上（用接种环挑取单菌落到无菌瓶皿上（点植法点植法：用接：用接种环在固体培养基表面接触几点），同时用签字笔种环在固体培养基表面接触几点），同时用签字笔按对应顺序按对应顺序对各单菌落进行标号。对各单菌落进行标号。p在原培养皿表面喷洒稀碘液，记录在原培养皿表面喷洒稀碘液，记录有水解圈有水解圈的单菌的单菌落，与此对应找出合成淀粉酶的菌株落，与此对应找出合成淀粉酶的菌株1-2株株。p注意：未分离得到菌落的小组可与其他组合作，挑注意：未分离得到菌落的小组可与其他组合作，挑取其他组鉴定得到的菌落进行后续实验（取其他组鉴定得到的菌落进行后续实验（实验报告实验报告中注明使用哪一组的菌落中注明使用哪一组的菌落）。）。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物7. 产淀粉酶菌株的增殖培养产淀粉酶菌株的增殖培养o 液体培养基分装：液体培养基分装：10ml/瓶，每个菌株对应瓶，每个菌株对应1瓶（瓶（每组每组1-2瓶，参考鉴定结果瓶，参考鉴定结果）o 液体培养基接种：用接种环从固体培养基表面上液体培养基接种：用接种环从固体培养基表面上沾取少许菌苔沾取少许菌苔，将接种环在液体培养基内，将接种环在液体培养基内振摇几振摇几次次即可。即可。o 做好标记，放入摇床中振荡培养做好标记，放入摇床中振荡培养24h。采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物8. 产淀粉酶菌株的纯化产淀粉酶菌株的纯化平板划线法平板划线法o 灼烧接种环灼烧接种环，冷却后用接种环挑取少量菌苔，冷却后用接种环挑取少量菌苔o 左手持平皿，将皿盖打开一条缝隙，右手将接种左手持平皿，将皿盖打开一条缝隙，右手将接种环伸入皿中，划环伸入皿中，划3-4条条平行线平行线o 灼烧接种环灼烧接种环，60旋转平皿，划线（注意：旋转平皿，划线（注意：后一后一区要求与前一区首尾相连，但不得与其他区域搭区要求与前一区首尾相连，但不得与其他区域搭在一起在一起）o 灼烧接种环灼烧接种环，将划线平板倒置，于，将划线平板倒置，于30培养培养48h后观察。后观察。 采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物实验结果及分析实验结果及分析1. 取样环境情况取样环境情况2. 记录记录产淀粉酶菌株数量（比透明圈？）产淀粉酶菌株数量（比透明圈？）及对及对菌落的菌落的初步鉴定结果初步鉴定结果3. 分析：从不同地点获得的结果为什么会出现差分析：从不同地点获得的结果为什么会出现差异？可以初步得出什么样的结论？（异？可以初步得出什么样的结论？（未分离出未分离出菌株的原因？菌株的原因？）采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物细菌菌落特征细菌菌落特征o 较湿润、光滑、透明、易挑取较湿润、光滑、透明、易挑取o 菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致o 质地均匀、小而突起（或大而平坦）质地均匀、小而突起（或大而平坦）o 有臭味或酸败味有臭味或酸败味采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物酵母菌菌落特征（与细菌相似酵母菌菌落特征（与细菌相似) o 圆形或卵圆形圆形或卵圆形o 较湿润、较粘稠、光滑，易挑取较湿润、较粘稠、光滑，易挑取o 菌落质地均匀菌落质地均匀o 正反面、边缘和中心颜色一致正反面、边缘和中心颜色一致o 比细菌菌落大而厚，较不透明，颜色多呈乳白色比细菌菌落大而厚，较不透明，颜色多呈乳白色o 多带酒香味多带酒香味采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物霉菌菌落特点霉菌菌落特点o 大而疏松，呈绒毛状（曲霉）、絮状（毛霉）大而疏松，呈绒毛状（曲霉）、絮状（毛霉）、地毯状（青霉）或蜘蛛网状（根霉）、地毯状（青霉）或蜘蛛网状（根霉）o 有的无固定大小，延至整个培养基中有的无固定大小，延至整个培养基中o 产色素，使菌落显色产色素，使菌落显色采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物放线菌菌落特征放线菌菌落特征o 干燥、不透明，小而紧密，呈放射状干燥、不透明，小而紧密，呈放射状o 菌落初期表面光滑或呈致密的丝绒状，当产生菌落初期表面光滑或呈致密的丝绒状，当产生孢子之后，其菌落表面呈粉状、颗粒状孢子之后，其菌落表面呈粉状、颗粒状o 菌落和培养基连接紧密，难以挑取，或者整个菌落和培养基连接紧密，难以挑取，或者整个菌落被挑起而不致破碎菌落被挑起而不致破碎o 菌落颜色多样，菌落正反面颜色常不一致菌落颜色多样，菌落正反面颜色常不一致o 带有泥腥味带有泥腥味采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物思考题思考题1. 为什么要用淀粉作为碳源？为什么要用淀粉作为碳源？2. 为什么同一个土样要稀释不同梯度进行涂为什么同一个土样要稀释不同梯度进行涂平板？平板？采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物实验报告实验报告o 本次实验与上次实验合写一份实验报告即可本次实验与上次实验合写一份实验报告即可o 实验报告在实验报告在本周六本周六实验课时上交实验课时上交采用PP管及配件：根据给水设计图配置好PP管及配件，用管件在管材垂直角切断管材，边剪边旋转，以保证切口面的圆度，保持熔接部位干净无污物注意注意o 每次实验每次实验课前课前5 5分钟分钟由各实验室本次值日小组将实由各实验室本次值日小组将实验材料由准备室取出至各实验室中验材料由准备室取出至各实验室中o 实验结束后请各组同学务必与实验老师处实验结束后请各组同学务必与实验老师处签到签到后方后方可离开，否则记为缺勤可离开，否则记为缺勤o 最后一组同学使用完超净台后，需最后一组同学使用完超净台后，需将台内废液、使将台内废液、使用过的枪头等清理干净，移液枪调回最大量程，并用过的枪头等清理干净，移液枪调回最大量程，并用酒精棉球将台面擦拭干净后，打开紫外灯照射用酒精棉球将台面擦拭干净后，打开紫外灯照射。