临床基因扩增检测实验室LightCycler型核酸扩增荧光检测仪使用维护和校准标准操作程序.doc

临床基因扩增检测实验室LightCycler型核酸扩增荧光检测仪使用维护和校准标准操作程序1目的保证LightCycler型核酸扩增荧光检测仪的正确和正常使用。2适用范围LightCycler型核酸扩增荧光检测仪。3操作人XXX4操作4.1 使用4.1.1开机1) 打开LightCycler电源开关。2) 打开LightCycler计算机，windowsNT将自动运行。3) 键入用户名和密码登陆windows NT和LightCyler，然后点击LightCycler图标进入主界面显示Run(运行)、Date Analysis(数据分析)、Edit Graphic Defaults（编缉数据显示图表中的线性图表和颜色）、Logon As Different User（以另一用户进行登录）。4.1.2运行1) 关闭LightCycler扩增仪盖子和除去样品旋转盘上的毛细管，点击Run，打开一个对话框，提示每天进行一次自我测试。2) 打开LightCycler扩增仪盖子，放入已加入模板和PCR反应液的样品旋转盘，然后盖紧盖子。3) 选择OpenExerimentFile,确定循环程序和循环次数，荧光获取模式，输入文件名。EditSample打开输入样品资料，点击Run按钮，输入文件名，DONE保存，仪器自动运行。4) 若扩增反应不完全或反应进行较慢可使用Add按钮增加循环次数。4.1.3数据分析1) 选F1或F1/F2通道，点击Quantification进入定量分析窗口。2) 设定Analysise方式，Ajustment方式，选定Noiseband项阈Noisebandcursor设定以刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，且Ct值不出现任何数值为准。4.1.4质控标准（以HBV DNA检测项目为例）1) 四个阳性参控品的ct值都应小于等于38.0，阴性对照的ct应无数值，强阳性对照的Ct值应小于等于30.0，临界阳性对照的Ct值应大于强阳性对照的Ct值并小于等于38.0，否则实验视为无效。2）标准曲线的拟和度应小于等于-0.980，否则定量结果视为无效。4.2维护4.2.1微软Windows NT工作站的维护硬盘驱动器每月运行一次碎片清除程序4.2.2 扩增仪的维护每半月进行一次常规清洁，如出现污染情况则随时清洁。操作方法：在样品槽中加入少量95乙醇，用棉签擦洗反应孔。用干棉签吸干乙醇。4.3 校准每三月邀请器械供应商技术人员配合校准一次。lightcycler核酸扩增荧光检测仪为复杂精密仪器，其校准工作需由专业工程师进行。除与仪器厂家达成协议定期校准以外，以实验判断仪器校准状态也可为何时进行仪器校准提供信息。通过对室内质控图的分析，我们可以及时发现系统误差的出现。经过分析排除了试剂和人员误差后，应怀疑是否仪器出现了检测偏差需要校准。此时进行仪器状态效验实验确定是否需要进行仪器校准。仪器状态效验试验：a）使用标准化试剂作为效验试剂。b）在仪器处于校准状态下，由固定人员用标准化试剂对104、105、106、107/ml标准品进行扩增实验。该实验在两个月内应进行20次。分别计算标准曲线的斜率、截距、相关性的控制限。c）每年1月、6月由固定人员进行上述实验，观察标准曲线的三个参数是否处在控制范围和104/ml标准品是否检出。d）当104/ml标准品未检出、标准曲线的三个参数超出控制范围或仅出现后者 时，先排除实验的人员、试剂因素，再重复实验。如结果依然，联系厂家立即进行仪器校准。e）当仅有104/ml标准品未检出时，检查实验全过程。再次上机检测104/ml标准品两次。如仍未检出，则联系厂家进行仪器校准。f）仪器经过校准后，重复该实验。结果归入仪器档案。5本SOP的变动程序本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人决定。如通过则公布实行。起草人批准人启用日期XXXXXX2003年2月10号附：注意事项a）仪器应放置在水平坚固的平台上，外界电源系统电压要匹配，并要求有良好的接地线。b）环境温度保持在235，湿度保持在6010%。c）仪器应配备功率3000W的稳压器。d）仪器应定期清洁维护。e）仪器使用时应严格遵守上述使用步骤。