2022年血球计数板使用方法 .pdf

血球计数板介绍用优质厚玻璃制成。每块计数板由H 形凹槽分为 2 个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片 覆盖其上，形成高0.10mm的计数名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 1 页，共 3 页 - - - - - - - - - 池。 计数池画有长、宽各 3.0mm 的方格， 分为 9个大方格，每个大格面积为 1.0mm.容积为 0.1mm（ul），其中，中央大方格用双线分成25 个中方格， 位于正中及四角 5 个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16 个小方格。 四角的 4 个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16 个中方格。根椐国际标准局（NBS）规定，大方格每边长度允许误差为 1%。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16 个大方格 （大方格用三线隔开） ，而每个大方格又分成25 个小方格；另一种是一个计数区分成25 个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16 个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由 400 个小方格组成。计数区边长为 1mm ，则计数区的面积为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm ，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。使用方法1视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。2取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。3将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴 （不宜过多） ，让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生， 并用吸水纸 吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。4静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳， 先在低倍镜下找到计数区后， 再转换高倍镜观察并计数。 由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。5 计数时若计数区是由16个大方格组成， 按对角线方位， 数左上、左下、右上、右下的 4 个大方格（即 100 小格）的菌数。 如果是 25 个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外， 还需数中央 1 个大方格的菌数（即 80个小格）；名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 2 页，共 3 页 - - - - - - - - - （或斜对角线的五个方格-见图用红色框标记的中方格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记， 在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上， 计数时则 数上线不数下线， 数左线不数右线 ，以减少误差。 即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见右图：即本格中计数细胞为3 个。6对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3 次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每 mL （g）菌悬液所含细胞数量。7测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。计数公式1、16 格25 格的血球计数板计算 公式：细胞数 /ml=100 小格内细胞个数 /100 40010000稀释倍数1、25 格16 格的血球计数板计算公式：细胞数 /ml=80 小格内细胞个数 /80 40010000稀释倍数（即 1:50000）名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 3 页，共 3 页 - - - - - - - - -