PCR(聚合酶链式反应)实验报告ppt课件.pptx

实验报告2019.7.292019.9.1PCR（聚合酶链式反应） 1.目的：在物质中提取的DNA量较少，之后大量扩增，获得大量目的片段 2.原理及过程： 热变性 温度：95度（计算方法：每对AT为2度，CG为4度） 过程：DNA双链断裂形成单链 复性 温度：55度 过程：引物配对上DNA单链 延伸 温度：72度 过程：DNA酶催化DNA互补链的延伸 循环（大约循环2030次） 3.反应成分 模板DNA、引物、dNTP、Mix 缓冲液（DNA聚合酶、镁离子）、去离子水 4.方向：53 5.产生数量 反应初期以指数形式增加，之后进入平台期聚丙烯酰胺凝胶电泳 1.配胶、制胶 用量：25ml 大小的胶需要2.0 g的琼脂糖凝胶固体。若目的DNA片段量过小可增加琼脂糖凝胶的浓度；相反，若DNA片段过大，可降低琼脂糖凝胶的浓度 方法：配胶用单蒸水溶解，在微波炉中加热，放置微烫手，再加入核酸染液约20微升，可倒入胶板中等待凝固 加样 在一次性手套上将Loading Buffer 与样液混匀（6Loading Buffer为Loading Buffer：样液=1：5）保种 保种液： 25%甘油：将菌液低转速（5000rpm）大约离心2600ml 的菌液（2管离心管） 50%甘油：将菌液和保重液同体积混合 保种贮藏 加入600700微升的保种液，放置在-80度中（保种管、离心管）保存生物膜的抑膜与解膜 抑膜与解膜的定义：抑膜是在细菌生长的同时加入化合物是细菌不成膜；解膜是利用化合物降解已存在的细胞膜。 对致病菌的认识： 枯草芽孢杆菌：阳性菌，形成的细胞膜在液体与气体表面，褶皱 铜绿假单胞菌：阴性菌，形成的细胞膜在液体底部 金黄色葡萄球菌：阳性菌，形成的细胞膜在液体底部 对成膜条件的尝试 将涂平板的细菌接入液体培养基（LB）中，摇床24小时左右 在酶标仪中测量LB 中的细菌数，将细菌稀释到5105 ，放入24孔板中培养，总体积约11.5ml 实验设计： 对照：Msgg培养基+菌液 阴性对照：Msgg培养基+菌液+DMSO 实验组：Msgg培养基+菌液+不同浓度梯度的化合物 实验结果 初步了解EKA对枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌均有抑制作用，且浓度越高抑制作用越强