细胞融合单克隆抗体ppt课件.ppt
动物组织块动物组织块原代培养（细胞贴壁；接触抑制）原代培养（细胞贴壁；接触抑制）传代培养传代培养胰蛋白酶处理分散成单个细胞胰蛋白酶处理分散成单个细胞幼龄动物的器官组织；动物胚胎幼龄动物的器官组织；动物胚胎加入培养液加入培养液用胰蛋白酶用胰蛋白酶等处理贴壁等处理贴壁细胞；细胞；分瓶分瓶继续培养。继续培养。适宜条件适宜条件1010代细胞代细胞5050代细胞代细胞传代传代培养培养细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系遗传物遗传物质已改质已改变变遗传物质遗传物质未改变未改变动物胚胎或幼龄动物的组织、器官动物胚胎或幼龄动物的组织、器官配置细胞悬液配置细胞悬液胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理转入培养瓶转入培养瓶单个细胞单个细胞加培养液稀释加培养液稀释分分 瓶瓶原代原代培养培养原代培养特点：原代培养特点：细细胞贴壁、接触抑制胞贴壁、接触抑制动物细胞动物细胞培养的原培养的原理：理：细胞细胞增殖增殖体体细细胞胞核核移移植植的的过过程程供体细胞供体细胞（供核）（供核）细胞细胞培养培养体细胞体细胞 卵巢卵巢卵母细卵母细胞胞（MM中期中期：供质）供质）去去核核去核卵去核卵母细胞母细胞注入注入细胞细胞融合融合重组重组细胞细胞构建构建重重组胚胎组胚胎胚胎胚胎移植移植代孕代孕母体母体生出与供体奶生出与供体奶牛牛遗传物质基遗传物质基本相同本相同的犊牛的犊牛体细胞核移植的过程体细胞核移植的过程共分成两大阶段：共分成两大阶段：核移植核移植和和胚胎移植胚胎移植体细胞核移植的原理：体细胞核移植的原理：动物细胞核具有全能性动物细胞核具有全能性学学 习习 目目 标标动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体单克隆抗体制备和应用制备和应用白菜白菜紫甘蓝紫甘蓝白菜白菜- -甘蓝甘蓝(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图植物体细胞杂交过程示意图A A细胞细胞B B细胞细胞人工诱导人工诱导1.1.概念：概念：杂交细胞杂交细胞 动物细胞动物细胞融合（也称融合（也称细胞杂细胞杂交交）：是指）：是指两个或多两个或多个动物细胞个动物细胞结合形成结合形成一个一个单核细胞单核细胞的过程。的过程。一、动物细胞融合一、动物细胞融合融合后形成的具有原来融合后形成的具有原来两两个或多个细胞遗传信息个或多个细胞遗传信息的的单核细胞单核细胞称为称为杂交细胞。杂交细胞。正在融合的正在融合的淋巴细胞与淋巴细胞与骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 正在融合正在融合鸡血细胞鸡血细胞2.2.动物细胞动物细胞融合过程融合过程灭活病毒灭活病毒（常用仙（常用仙台病毒）台病毒）、（聚乙、（聚乙二醇）二醇）PEGPEG、电激、电激等等诱导的手段？诱导的手段？思考讨论：思考讨论：为什么细胞融合过程中使为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？用的病毒需要灭活？不灭活行吗？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上因为灭活的病毒能使细胞膜上的的蛋白质分子和脂质分子重新排布，蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。细胞膜打开，细胞发生融合。 不灭活的话会不灭活的话会感染细胞，而不感染细胞，而不能诱导细胞融合。能诱导细胞融合。细胞膜的流动性细胞膜的流动性灭活病毒、灭活病毒、PEGPEG、电激、电激等等融合后的细胞进行融合后的细胞进行有有丝分裂，丝分裂，形成两个完形成两个完整的整的杂交细胞杂交细胞诱导的手段？诱导的手段？融合后细胞的类型？融合后细胞的类型？AB杂交杂交细胞遗传物细胞遗传物质有什么特点？质有什么特点？三种三种 AA、AB、BB含两种生物的遗传物质含两种生物的遗传物质原理？原理？3.3.动物动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用 细胞融合技术细胞融合技术突破了有性杂交的突破了有性杂交的局限，局限，使使远缘杂交成为可能。远缘杂交成为可能。 最主要用途：最主要用途：利用杂交瘤技术，利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。制备单克隆抗体。主要用于制备单克主要用于制备单克隆抗体隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振动、电激）动、电激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁去除细胞壁后诱后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞全能性细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较抗体：抗体：能够与抗原发生能够与抗原发生特特异性异性结合的结合的免疫球蛋白免疫球蛋白。二、单克隆抗体二、单克隆抗体B B淋巴细胞淋巴细胞效应效应B B淋巴细淋巴细胞胞（浆细胞）（浆细胞）记忆记忆B B淋淋巴细胞巴细胞分化分化能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆细浆细胞（即效应胞（即效应B B细胞）。细胞）。强调：强调：效应效应B B淋淋巴细胞是能够巴细胞是能够产生抗体的产生抗体的B B淋淋巴细胞，巴细胞，下文下文将其简称为将其简称为B B淋淋巴细胞巴细胞抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原 反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体该法制备抗体的缺点：的缺点：单克隆抗体！单克隆抗体！ 产量产量低、纯度低、低、纯度低、特异性差、特异性差、灵敏度低。灵敏度低。单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念单克隆单克隆抗体：抗体：单个单个B B淋巴细胞淋巴细胞增殖增殖形成的细胞群所产生的形成的细胞群所产生的化学性质单一、特异性强、化学性质单一、特异性强、灵敏度高灵敏度高的抗体。的抗体。2.2.哪种细胞是可以无限增殖的？哪种细胞是可以无限增殖的？3.3.有什么方法能使有什么方法能使B B淋巴细胞产生抗体淋巴细胞产生抗体的能力的能力和和肿瘤细胞无限增殖能力肿瘤细胞无限增殖能力同时具备同时具备呢？呢？1.B1.B淋巴细胞在淋巴细胞在体外培养液体外培养液中能否生长增殖？中能否生长增殖？（一）单克隆抗体的制备（一）单克隆抗体的制备B B淋巴细胞在体外不能无限增殖。淋巴细胞在体外不能无限增殖。肿瘤细胞肿瘤细胞B B淋巴细胞与肿瘤细胞融合淋巴细胞与肿瘤细胞融合科科勒勒米米尔尔斯斯坦坦荣获荣获19841984年诺贝尔生理学或医学奖年诺贝尔生理学或医学奖如果把一种如果把一种B B淋巴细胞淋巴细胞与能在体外与能在体外大量增殖的大量增殖的骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞进行融合，进行融合，所得到的所得到的融合细胞既能大量增殖，融合细胞既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体。又能产生足够数量的特定抗体。 单单克克隆隆抗抗体体的的制制备备过过程程骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞小鼠小鼠一筛选一筛选已免疫的已免疫的B淋巴细胞淋巴细胞（选择性培养基）（选择性培养基） 细胞融合细胞融合多种多种杂交细胞杂交细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞注射抗原注射抗原聚乙二醇、聚乙二醇、灭活的病毒、灭活的病毒、电激等电激等BBBB、B B瘤瘤、瘤瘤瘤瘤 （B B、瘤）、瘤）既能产生既能产生抗体又能抗体又能大量增殖大量增殖 二筛选二筛选二筛选：能产二筛选：能产特异性特异性抗体抗体的杂交瘤细胞的杂交瘤细胞（克隆化培养、（克隆化培养、抗体检测）抗体检测）阳性孔阳性孔方法方法抗原抗原- -抗体杂交法抗体杂交法在单克隆抗体制备过程中，在单克隆抗体制备过程中，两次筛选两次筛选的原理和方法是不相同的。的原理和方法是不相同的。骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞免疫小鼠免疫小鼠单克隆抗体单克隆抗体筛选筛选筛选筛选体内培养体内培养体外培养体外培养已免疫的已免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞（选择培养基）（选择培养基）（克隆化培养、抗体检测）（克隆化培养、抗体检测）细胞融合细胞融合杂交细胞杂交细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞注射抗原注射抗原能产特异性抗体能产特异性抗体的杂交瘤细胞的杂交瘤细胞单克隆抗体的特点：单克隆抗体的特点：特异性强、灵敏度高、特异性强、灵敏度高、产量大、纯度高产量大、纯度高腹腹水水培培养养液液体内优点：体内优点：不需特不需特定的培养基；不需定的培养基；不需严格外界环境条件严格外界环境条件骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞免疫小鼠免疫小鼠单克隆抗体单克隆抗体筛选筛选筛选筛选体内培养体内培养体外培养体外培养已免疫的已免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞（选择培养基）（选择培养基）（克隆化培养、抗体检测）（克隆化培养、抗体检测）细胞融合细胞融合杂交细胞杂交细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞注射抗原注射抗原能产特异性抗体能产特异性抗体的杂交瘤细胞的杂交瘤细胞动物细胞动物细胞融合技术融合技术动物细胞动物细胞培养技术培养技术制备单克隆抗体制备单克隆抗体 利用利用 产生特异性抗体的产生特异性抗体的功能。功能。 利用利用 无限增殖的特性。无限增殖的特性。 利用利用 技术将两种细胞融技术将两种细胞融合获得合获得杂交瘤细胞杂交瘤细胞。 利用利用 技术技术大量大量培养杂培养杂交瘤细胞。交瘤细胞。效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞动物细胞融合动物细胞融合动物细胞培养动物细胞培养杂交杂交细胞细胞灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞经免疫经免疫的小鼠的小鼠提取提取杂交瘤杂交瘤细胞细胞第一次筛选第一次筛选用特定的用特定的选选择性培养基择性培养基第二次筛选第二次筛选能产生能产生特定特定抗体、培养条件抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体提取单克隆抗体3.3.为何要进行两次筛选？为何要进行两次筛选？4.4.如何进行第如何进行第2 2次筛选？次筛选？培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。专一抗体检验呈阳性。细胞。专一抗体检验呈阳性。第第1 1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第第2 2次筛次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。1.1.本过程利用了哪些原理？本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2.2.为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅不仅具有具有B B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，的本领，因而可以获得大量单克隆抗体因而可以获得大量单克隆抗体（1 1）作为诊断试剂）作为诊断试剂最广泛用途最广泛用途 准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速（如（如同位素标记同位素标记单克隆抗体，可单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等疾病）诊断肿瘤、心血管畸形等疾病）（二）单克隆抗体的应用（二）单克隆抗体的应用 用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体技术用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体技术做成的做成的“早早孕诊断试剂盒早早孕诊断试剂盒”，灵敏度高，在妊娠第，灵敏度高，在妊娠第8 8天就可以做出诊断，比原来的诊断方法提前了天就可以做出诊断，比原来的诊断方法提前了1010天天左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90%90%以上。以上。（2 2）用于治疗疾病和运载药物）用于治疗疾病和运载药物 主要用于治疗主要用于治疗癌症治疗癌症治疗，单克隆，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形抗体作为载体，运载抗癌药物，形成成“生物导弹生物导弹”，准确杀伤癌变细，准确杀伤癌变细胞。这样胞。这样既不损伤正常细胞，又减既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。少了用药剂量。“生物导弹生物导弹”抗癌细胞的单克隆抗体抗癌细胞的单克隆抗体+ +放射性同位素放射性同位素+ +化学药物化学药物或细胞毒素或细胞毒素单克隆抗体单克隆抗体导向，导向，药物药物为弹头为弹头利用单克利用单克隆抗体的隆抗体的特异性特异性两个过程两个过程动物细胞融合过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个一个诱导诱导细胞融合的新方法细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个一个新细胞新细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个一个优势优势单克隆抗体单克隆抗体特异性强、特异性强、灵敏度高，并可大量制备的优势灵敏度高，并可大量制备的优势比较项比较项目目细胞融合细胞融合的原理的原理细胞融合的细胞融合的方法方法诱导手段诱导手段用途用途植物体植物体细胞杂细胞杂交交细胞膜的细胞膜的流动性流动性；细胞全能细胞全能性性纤维素酶、纤维素酶、果胶酶果胶酶去除去除细胞壁后诱细胞壁后诱导原生质体导原生质体融合融合离心、电刺离心、电刺激、振动、激、振动、聚乙二醇聚乙二醇克服远源克服远源杂交不亲杂交不亲和，获得和，获得杂种植株杂种植株动物细动物细胞融合胞融合细胞膜的细胞膜的流动性流动性用用胰蛋白酶胰蛋白酶使细胞分散使细胞分散后诱导细胞后诱导细胞融合融合除应用植物除应用植物细胞杂交手细胞杂交手段外，段外，还有还有灭活病毒灭活病毒获得杂种获得杂种细胞、细胞、制制备单克隆备单克隆抗体抗体比较动、植物细胞杂交技术比较动、植物细胞杂交技术 基因型为基因型为AaAa与基因型为与基因型为BbBb的动物的动物体细胞混合，用灭活的仙台病毒处理体细胞混合，用灭活的仙台病毒处理后，不可能获得下列哪种基因型的细后，不可能获得下列哪种基因型的细胞胞 ( ) ( )AAAaa BAaBb CAabb DBBbb【例例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 （ ）A.离心离心 B.灭活的病毒灭活的病毒 C.电刺激电刺激 D.振动振动【例例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（ ）A. 具有原来两个或多个细胞的遗传信息具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B.能无限增殖能无限增殖 C.可形成新个体可形成新个体 D.培养过程会贴壁培养过程会贴壁【例例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（动物细胞融合的作用中最重要的是（ ）A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新物种培育新物种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞 BBA【例例4 4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ）A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴淋巴细胞细胞B.B.不经过免疫的不经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.不经过免疫的不经过免疫的B B淋淋巴细胞巴细胞【例例5 5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （ ）A.A. B B淋巴细胞淋巴细胞 B BT T淋巴细胞淋巴细胞 C C骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D D杂交瘤细胞杂交瘤细胞AD【例例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中列实验步骤中错误错误的是（的是（ ）A A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B B淋淋巴细胞巴细胞B B用纤维素酶处理用纤维素酶处理B B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B B淋淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D D筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体细胞群，培养后提取单克隆抗体B(1)(1)若若A A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B B细胞是取自小鼠细胞是取自小鼠体内的体内的 细胞，细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射前，应给小鼠注射_类物质。类物质。（2）d过程过程是一个是一个_过程，该过程的过程，该过程的进行常用进行常用_或或_的诱导。的诱导。(3)(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 种种类型的类型的C C细胞，因此需用细胞，因此需用_培养基筛选出培养基筛选出D D细细胞用于培养，胞用于培养，D D细胞的名称是细胞的名称是 ，其特点，其特点是是_。效应效应B抗原抗原细胞融合细胞融合聚乙二醇聚乙二醇 灭活的病毒灭活的病毒选择性选择性 3既能无限增殖又能产生特异性抗体既能无限增殖又能产生特异性抗体杂交瘤细胞杂交瘤细胞(4)(4)在培养时通过在培养时通过_分裂方式大量繁殖。分裂方式大量繁殖。D D细细胞体外培养需要注意的条件是（要求答胞体外培养需要注意的条件是（要求答5 5项）项）_。（5 5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是，与常规抗体相比，其特点是_。特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pHpH；适宜的气体环境适宜的气体环境1515、（1）单克隆抗体是指）单克隆抗体是指 。（2 2）制备单克隆抗体的步骤：）制备单克隆抗体的步骤：将将_注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少胞，其中至少1 1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。将步骤获得的将步骤获得的B B淋巴细胞与步骤培养的骨髓瘤细胞淋巴细胞与步骤培养的骨髓瘤细胞在在_的诱导下融合。的诱导下融合。将诱导后产生的多种细胞，放在将诱导后产生的多种细胞，放在_培养基的多孔培养基的多孔培养板上培养，筛选。培养板上培养，筛选。这样获得的杂交瘤细胞既具有这样获得的杂交瘤细胞既具有B B淋巴细胞淋巴细胞_的能力，又具有的能力，又具有_的本领。的本领。检测和分离带有抗检测和分离带有抗X X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。一个细胞进行培养。将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克隆抗体。隆抗体。化学性质单一，特异性强的抗体化学性质单一，特异性强的抗体抗原抗原聚乙二醇聚乙二醇选择性选择性无限增殖无限增殖产生专一抗体产生专一抗体（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：体外培养法，可获得体外培养法，可获得10 g/mL的抗体；的抗体；动物体内动物体内诱生法可获得诱生法可获得520mmg/mL的抗体。你选择的方法及原的抗体。你选择的方法及原因是因是 。（4 4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是用小鼠的为它是用小鼠的_细胞制备的，其化学本质是细胞制备的，其化学本质是_，应用于人体，会作为，应用于人体，会作为 产产生生 ，解决这个问题的方法是，解决这个问题的方法是_。大量生产选，小规模生产选大量生产选，小规模生产选效应效应B蛋白质蛋白质异物异物免疫反应免疫反应采用人的效应采用人的效应B细胞制备细胞制备15、右图为某同学根据杂交瘤技术、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗）该方案能达到预期效果吗？。原因是。原因是_。（2）图中）图中为为 过程过程，常用，常用 作为诱导剂。该作为诱导剂。该细胞继承了细胞继承了_ ，因此不仅能分泌，因此不仅能分泌_，还有，还有 本领。本领。不能不能没有将抗原注入小鼠体内，无法获得没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生专一抗体的产生专一抗体的B淋巴细胞淋巴细胞细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞的遗传物质双亲细胞的遗传物质特异性抗体特异性抗体大量增殖大量增殖制备单克隆抗体制备单克隆抗体（3）该方案的目的是）该方案的目的是_。B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌单克隆抗体的实验方案风杆菌单克隆抗体的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_5、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体B细胞细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50例例3 3：下列过程与细胞培养无关的是下列过程与细胞培养无关的是 （ ） A. A.检测有毒物质检测有毒物质 B. B.生产单克隆抗体生产单克隆抗体 C. C.筛选抗癌药物筛选抗癌药物 D. D.杂交育种杂交育种D 2002年年12月月30日，日， 两场筹备了两场筹备了10年的年的“太空婚礼太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，首次在神舟四号飞船上举行，植物植物细胞细胞“新人新人”黄花烟草黄花烟草和和革新一号烟草革新一号烟草叶肉细叶肉细胞胞原生质体原生质体，动物细胞动物细胞“新人新人”是小鼠是小鼠B淋巴细淋巴细胞胞和和骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞，两批新人同时在，两批新人同时在 “产房产房”电融合仪内孕育新生命。电融合仪内孕育新生命。“太空婚礼太空婚礼”植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术细胞融合是正常的生命活动细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合两个细胞正在融合 受精作用受精作用2、诱导融合的因素诱导融合的因素 生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒诱导融诱导融合合.(.(利用灭活仙台病毒是动物细胞利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。融合所特有的。 这是由于病毒的磷这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。能还有促进细胞融合的功能。) ) 化学法：化学法：聚乙二醇聚乙二醇PEGPEG诱导融诱导融合合. . 物理法：物理法：电激电激融合融合病毒颗粒黏病毒颗粒黏 附细胞表面附细胞表面细胞膜连接细胞膜连接细胞膜被细胞膜被 病毒颗粒穿通病毒颗粒穿通细胞融合、形成杂种细胞细胞融合、形成杂种细胞BBBB 、B B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （B B、瘤）、瘤）（一选）：（一选）：杂交瘤细胞杂交瘤细胞获得已免疫的获得已免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞（二选）：选（二选）：选能产生所需特能产生所需特异性异性抗体的杂抗体的杂交瘤细胞交瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞免疫小鼠免疫小鼠单克隆抗体单克隆抗体筛选筛选筛选筛选体内培养体内培养体外培养体外培养已免疫的已免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞（选择培养基）（选择培养基）（克隆化培养、（克隆化培养、抗体检测抗体检测）细胞融合细胞融合杂交细胞杂交细胞特点：特异性、强灵特点：特异性、强灵敏度高，可大量制备敏度高，可大量制备杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞动物细胞融合技术融合技术动物细胞动物细胞培养技术培养技术特点：既能产生抗特点：既能产生抗体又能大量增殖体又能大量增殖注射抗原注射抗原能产特异性抗体能产特异性抗体的杂交瘤细胞的杂交瘤细胞1.动物特异性免疫动物特异性免疫2.分离分离B淋巴细胞（淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意）。注意B淋巴细淋巴细胞是一个系列。（胞是一个系列。（B1,B2,B3,-Bn）3.细胞融合细胞融合三种融合方式三种融合方式:（BB;BG;GG）4.第一次筛选：在第一次筛选：在“选择培养基培养选择培养基培养”上培养筛选上培养筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞（只有（只有BG杂交瘤细胞存活。但杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：杂交瘤细胞也是一个系列：如如B1G,B2G-BnG。而。而BB,GG在此培养基上不能存活。）在此培养基上不能存活。）5.第二次筛选：在第二次筛选：在“多孔培养板上多孔培养板上”培养培养杂交瘤细胞系列杂交瘤细胞系列每孔每孔只放一个杂交瘤细胞。只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进每个杂交瘤细胞，并进行行“单一抗体检测单一抗体检测”，“检测阳性检测阳性”的孔内即是所需要的杂交的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。瘤细胞。6.选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养体外培养或注射到或注射到小鼠腹腔小鼠腹腔内增殖内增殖。7.提取单克隆抗体。提取单克隆抗体。单抗的制备过程要点：单抗的制备过程要点：
