河南农大植物生理学试验四选一.pdf

一、叶绿素的提取、分离与含量测定一、实验原理根据叶绿体提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其消光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯 - 比尔定律， 某有色溶液的消光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L 成正比， 即：A=aCL 式中： a 为比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度1cm时， a 为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸收系数可通过测定已知浓度的纯净物在不同波长下的吸光的而求得。 如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b 的含量，只需测定该提取液在两个特定波长下的吸光度A， 饼根据叶绿素a、 b 在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b 时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。二、实验步骤1、取新鲜植物叶片（或其他绿色组织），擦净组织表面污物，剪掉（去掉叶脉），混匀。2、称取剪碎的新鲜样品0.2g 一份，放入研钵中，加入23ml95% 乙醇研成匀浆，再加乙醇 10ml，继续研磨至组织变白。静置3-5min 。3、取 25ml 容量瓶 1 支， 沿玻璃棒把提取液通过漏斗倒入容量瓶内，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中，定容，为待测液。4、取洁净的试管1 支，将待测液过滤于试管中。5、把叶绿体色素提取液倒入光径1cm比色杯中。 以 95% 乙醇为空白， 在波长 665nm 、 649nm下测定吸光度。二、根系活力的测定甲烯蓝法一、实验目的植物根系是活跃的吸收器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部分的生长、营养状况及产量水平。本实验联系测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。二、实验原理根据沙比宁等人理论，植物对溶质的最初吸收具有吸附性的特性，并假定这时在根系表面均匀地覆盖了一层被吸附物质的单分子层，而后在根系表面产生吸附饱和，继之根系的活跃部分讲原来吸附着的物质解吸附到细胞中去，继续产生吸附作用。常用甲烯蓝作为被吸附物质，它的被吸附量可以根据吸附前后甲烯蓝浓度的改变算出，甲烯蓝浓度可用比色测定。已知 1mg甲烯蓝成单分子层时占有的面积为1.1 。据此可算出根系的活跃吸收表面积，可作为根系活力的指标。三、实验步骤 1 、甲烯蓝溶液标准曲线的制作（每班选两组做标准曲线）取试管 7 支编号，按下表次序加入各溶液，即成甲烯蓝标准溶液。表 各试剂加入顺序试管号1 2 3 4 5 6 7 0.01mg/ml 甲烯蓝溶液（ ml）0 1 2 4 6 8 10 蒸馏水（ ml）10 9 8 6 4 2 0 甲烯蓝浓度（ mg/ml）0 0.001 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 光密度值以第一管（水）为对照在波长为660nm下比色，读出光密度值，以甲烯蓝浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘成标准曲线。2、样品测定：取烧杯两只，每只加入0.0002mol/L甲烯蓝溶液20ml，编号分别为1号杯和 2 号杯。将冲洗干净的待测根系，用吸水纸小心吸干（切勿伤根），然后依次浸入盛有甲烯蓝溶液的烧杯中，在1 号杯中浸3min，时间到后取出在放入2 号杯，时间为1.5min ，注意：每次取出时都要使甲烯蓝溶液能从根上刘流回到原杯中去。3、测定根系体积：用排水法测定4、查标准曲线：从两个烧杯中各吸取甲烯蓝溶液1ml 于两支试管中，各管加水9ml，即稀释10 倍。然后在波长 660nm以水为对照进行比色，测定光密度值OD ，查标准曲线或代入回归方程可计算出溶液浓度（记为C1 、C2）。三、植物水势的测定（小液流法）一、 实验原理将植物组织分别放在一系列浓度递增的溶液中。当找到某一浓度的溶液与植物组织之间水分保持动态平衡时，则可认为此植物组织的水势等于该溶液的水势。因溶液的浓度是已知的，可以根据公式计算出溶液的渗透势，即代表植物相应的水势（w）。w= =-P=-icRT 二、实验步骤1、按下表配置一系列浓度的蔗糖溶液溶液配置一览表试管编号1 2 3 4 5 1.0mol/L蔗糖（ ml）0.5 1 2 3 4 H? O （ ml）9.5 9 8 7 6 蔗糖最终浓度 （mol/L ）0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 2、另取 5 个青霉素小瓶与试管对应编号，并在试管中各取2ml 溶液放入相应的青霉素小瓶中。3、将叶片表面浮土擦干净，用打孔器打50 个小圆片， 然后在每个小瓶内10 片，使叶原片全部浸没于溶液中。放置30 分钟，中间摇动数次。4、在每个小瓶中加入稍许甲烯蓝粉末，振荡。5、用毛细管分别从小瓶中依次吸取小瓶中的蓝色溶液少许，插入相对应编号的试管液层中部，小心挤出一滴，并迅速将吸管拔出，观察蓝色小液流的升降情况，并记录。观察记录表青霉素小瓶编号1 2 3 4 5 蓝色液滴运动方式对应蔗糖溶液浓度四、植物体内硝酸还原酶活力测定一、实验原理硝酸还原酶是植物氮素通话的关键酶，它催化植物体内硝酸盐作为亚硝酸盐：反应产生的亚硝酸盐与对- 氨基苯磺酸及萘胺在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般以每克鲜重含氮量表示，即以g/g/h为单位。二、实验步骤1、标准曲线制作：取7支洁净烘干的15ml 刻度试管按下表顺序加试剂，即配成0-2.0 g 的系列标准亚硝态氮溶液。摇匀后在30保温箱或恒温水浴中保温30 分钟，然后，在540nm 波长下比色。以亚硝态氮（g）为横坐标，光密度值为纵坐标回执标准曲线或建立回归方程。表：各试剂加入顺序试剂1 2 3 4 5 6 7 亚硝酸钠标准液（ml）0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 蒸馏水（ ml）2.0 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 0 1% 对氨基苯磺酸（ml）4 4 4 4 4 4 4 0.2%萘胺（ ml）4 4 4 4 4 4 4 每管含二氧化氮（g）0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 光密度值2、实验步骤 、取样：准确称取植物叶片1g 左右，共两份，剪成小块，分别置于2 支试管中， 1号试管作为对照，2 号试管为酶活性测定。 、 反应：先向 1 号对照试管中加1ml 三氯乙酸混匀， 然后分别向2 支试管中加入KNO 3 异丙醇磷酸缓冲混合液9ml。然后将两只试管置于干燥器中接真空泵抽气5 分钟，到叶片沉至管底，再置于30暗中存放 25 分钟，然后向2 号非对照管加1ml 三氯乙酸，终止酶的活性。 、比色：将试管摇匀静止，各取2ml 反应液于另一组试管中，在每支试管中分别加入对氨基苯磺酸4ml 和萘胺 4ml 摇匀， 30显色 15 分钟，取上清液。 以对照管凋零与540nm处测光密度，查标准曲线或代入回归方程，得出反应液中亚硝态氮的含量（g）。