2022年硒检测方法验证 .pdf

page 1 of 17 硒检测方法验证方案方案起草签名起草日期检测中心起草人验证领导小组会签方案审核签名审核日期检测中心验证人检测中心技术负责人检测中心经理方案批准签名审核日期验证总负责人验证方案实施实施部门实施负责人职责检测中心技术负责人验证方案的审核及各指标的检测检测中心设备管理员负责设备的校准验证总负责人验证方案的批准名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 1 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 2 of 17 目录1 概述03 2 验证目的03 3 验证内容3.1 测定所用仪器设备及化学试剂一览表03 3.2 仪器参数03 3.3 上机溶液配制 03 3.4 选择确定某方法性能的技术方法04 3.5 方法验证04 3.5.1 方法的精密度05 3.5.1.1 系统精密度（重复性）05 3.5.1.2 方法精密度06 3.5.1.3 中间精密度07 3.5.2 最小检测限08 3.5.3 线性范围09 3.5.4 方法的回收率11 3.5.5 方法的准确性12 3.5.6 方法的耐用性13 3.6 结论 14 4 附录4.1 回收率 14 4.2 校准曲线15 4.3 精密度 15 4.4 测定低线16 4.5 准确度 16 4.6 提取效率16 4.7 特异性 17 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 2 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 3 of 17 1 概述：通过对准确性，精密度，专属性，检出限以及线行范围等的确认，来验证此方法检测时符合分析要求。2 验证目的： 对硒的检测方法进行验证，实验首先对系统进行确认，确认系统符合作为检测方法的要求，然后对方法进行验证，包括方法的准确性、精密度、专署性、定量限、线性以及范围，依照该方法进行检测时是否符合分析的要求。3 验证内容3.1 测定所用仪器设备及化学试剂一览表编号类型名称1 仪器原子荧光分光光度计2 衡器分析天平3 量具25ml 容量瓶， 100ml 锥形瓶4 移液管2ml， 5ml 刻度管5 进样器自动进样6 试剂盐酸（优级纯） ，硝酸（优级纯） ，高氯酸（优级纯）3.2 仪器条件仪器原子荧光分光光度计仪器分析条件负 高 压300V 灯 电 流 80mA 原子化器高度8cm 载气流量400ml/min 屏蔽气流量1000ml/min 3.3 上机溶液的制备：3.3.1 标准贮备液：将硒的标准溶液稀释为浓度10ug/mL的标准贮备液3.3.2 标准工作液：将硒的标准贮备液稀释为浓度100ng/mL的标准使用液，取 4 支 25mL洁净的容量瓶，分别向其中准确加入0.0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL的浓度为 100ng/mL 的硒标准使用液。再向容量瓶中各加入6mL浓盐酸。加 2.5mL 2%的铁名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 3 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 4 of 17 氰化钾，用去离子水定容至刻度，此标准系列的浓度为0，2，4，6，8 ng/mL。混匀，制成标准工作曲线。3.3.3 样品溶液制备：称 0.5g 奶粉于锥形瓶中，加 5mL硝酸， 5mL高氯酸，刚在电热板 250左右上消解，若变棕黑色，再加混合酸，直至冒白烟，消化液呈无色透明或略带黄色，加水20mL赶酸，当溶液变为无色并有白烟冒出时，继续加热至剩余体积2mL左右，切不可蒸干。冷却，再加5mL （1：1）的盐酸，继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟出现，以完全将六价硒还原成四价硒。冷却，转移至25mL容量瓶中，加2.5mL2% 的铁氰化钾，用去离子水定容。摇匀待测。同样处理一个空白样品。3.4 选择确定某方法性能的技术方法：用于确定某方法性能的技术应当是下表之一，或是其组合：序号确证用技术方法所选用的技术方法1 使用参考标准或标准物质（参考物质）进行校准2 与其他方法所得的结果进行比较3 实验室间比对4 对影响结果的因素作系统性评审5 根据对比方法的理论原理和实践经验的科学理解，对所得的结果不确定度进行评定3.5 方法验证：标准品的批号及供应商，规格等名称规格批号供 应 商水中硒标准溶液100ug/mL GBW （E ）080215 国家标准物质研究中心验证可接受标准：项目指标精密度测定系统精密度 (相对标准偏差) 符合附录1 要求名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 4 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 5 of 17 方法精密度 (相对标准偏差) 符合附录1 要求中间精密度 (相对标准偏差) 符合附录1 要求最小检测限测定要求S/N=36 线性范围相关系数符合附录1 要求准确度 ( 加样回收率 ) 符合附录1 要求方法耐用性符合系统适应性结果: 符合附录 1 要求3.5.1. 精密度3.5.1.1 系统精密度（重复性）3.5.1.1.1将标准溶液重复进样11次，计算峰面积的RSD ，相对标准偏差符合附录1 要求。名称10ug/L 荧光强度1 483.950 2 481.642 3 488.626 4 485.020 5 477.076 6 489.782 7 484.898 8 486.673 9 191.246 10 491.994 11 490.209 RSD 0.9 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 5 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 6 of 17 3.5.1.1.2 结论：经验证在被测含量是10ug/L，系统精密度RSD是0.9%，符合精密度要求。3.5.1.2 方法精密度3.5.1.2.1 供试品溶液制备：按照样品处理方法，平行制备6 份样品，每样测定2 次。样品称重如下表溶液编号1 2 3 4 5 6 样品重量（ g）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 3.5.1.2.2 测定和计算：以线性溶液得出线性回归方程，以外标线性法测定某一批号的样品溶液中待测物的含量，并计算 RSD%。含量计算公式：MVCtC其中：C 样品中待测物含量（g/ml ）；M 样品称样量 (g) ；V 样品溶液体积（ ml）Ct 供试品溶液中对应的待测物质的浓度(g/ml) 。RSD%应符合附录 1 要求。结果：浓度和样品溶液中待测物的含量名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 6 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 7 of 17 实验编号标准 1 标准 2 样 1 样 2 样 3 样 4 样 5 样 6 荧光强度193.990 380.047 82.245 79.184 79.412 76.790 76.020. 81.264 浓度（ ug/L ）4 8 1.6878 1.6231 1.6279 1.5726 1.5563 1.6671 含量（ug/kg）84 81 81 79 78 83 RSD% 2.8 3.5.1.2.3 结论: 经验证被测含量是81ug/kg 时，方法精密度RSD%=2.8 ，该 RSD 满足方法精密度要求3.5.1.3 中间精密度选择一个批号的 3 份样品，每份测定2 次，由不同分析人员不同时间测定，比较测定结果，判断中间精密度。判定方法： RSD% 应符合附录 1 要求。实验日期2009 年 8 月 13 日2009年 8 月 6 日实验人第一人第二人标准品标样光强度浓度 ug/L 含量ug/kg 光强度浓度 ug/L 含量ug/kg 标样 1 187.275 4 193.990 4 标样 2 387.087 8 380.047 8 样品 1 79.749 1.6777 83.9 82.245 1.6878 84.3 样品 2 81.725 1.7187 85.9 86.212 1.7716 88.6 样品 3 83.639 1.7583 87.9 85.852 1.7639 88.2 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 7 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 8 of 17 RSD% 样品 1 0.3 样品 2 2.2 样品 3 0.2 结论：不同分析人员测定样品的RSD 均符合附录 1 要求3.5.2 检出限（ CL）以去离子水为空白，在仪器最灵敏的状态下，连续进样11 次, 记录仪器的吸光度，按CL=3（SA/S）的要求，测定出检出限。C/（ug/mL）荧光强度平均荧光SA空白溶液（11 次）2.848 2.607 1.793 2.023 2.214 2.145 0.3515 1.578 2.020 2.016 2.029 2.230 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 8 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 9 of 17 2.239 检出限（ ug/L ）0.022 结论：经验证检出限0.022ug/mL，符合附录 1 要求3.5.3 线性范围3.5.3.1 线性溶液制备：制备四份不同浓度的待测溶液。 （配制要求见附录1）线性溶液 1 2ug/L 线性溶液 2 4ug/L线性溶液 3 6ug/L名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 9 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 10 of 17 线性溶液4 8ug/L 3.5.3.2 测定: 将线性溶液分别进样，每个浓度点测定 1 次，绘制标准曲线，计算其线性范围和线性方程，一般线性回归系数必须符合附录 1 要求。溶液编号1 号2 号3 号4 号浓度 (ug/mL) 2 4 6 8 荧光强度124.583 244.658 366.658 495.592 方程If=61.250*C+0.918 线性系数1.0000 3.5.3.3 结论：经验证线性范围回归系数1.0000，符合附录 1 要求名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 10 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 11 of 17 3.5.4 方法的回收率按照附录 1 要求加入一定量的标，按样品处理方法进行处理，上机分析，结果应符合附录 1 要求。3.5.6.1测定结果空白样品对照加标 1 号溶液加标 2 号溶液称样量（ g）0.5 0.5 0.5 加标量（ ug/L ）2 4 样品浓度（ ug/L）2.4144 4.4494 6.6143 荧光强度114.206 207.559 306.872 含量结果 (ug/kg) 120.7214 222.4725 330.7194 回收率101.75 104.99 平均回收率103.37 3.5.4.1 对应图谱3.5.4.2 回收率的计算公式：21VCrmCkVCpCh其中： Ch 回收率；V1 加标样溶液体积（ ml）V2 加入的标准溶液体积（ ml）m 称样量（ g）Cp 加标样品中的待测物的浓度； （ g/ml ）CK由空白对照液计算出的样品中待测物的含量（g/g ） ；Cr 加入的标准溶液的浓度 ( g/ml). 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 11 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 12 of 17 3.5.5 方法的准确性重复分析标准物质（实物标样）或水平测试样品，测定含量（经回收率校正后）平均值与真值的偏差符合附录1 要求。测量次数1 2 3 4 5 6 7 8 称样量（ g）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 荧光强度100.888 113.876 96.647 96.204 108.379 98.391 104.976 101.984 样品浓度（ ug/L）2.1305 2.4065 2.0404 2.0310 2.2897 2.0774 2.2174 2.1538 含量 (ug/kg) 107 120 102 102 114 104 111 108 平均含量(ug/kg) 108.5 标准物质含量(ug/kg) 11030（ug/kg ）收率校正后含量(ug/kg) 105 偏差（ % ）-4.7 RSD% 3.3 3.5.5.1 测定结果3.5.5.2 结论: 经检测标准物质的含量108.5ug/kg ， 回收率在 80%-110% 之间， 测定含量（经名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 12 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 13 of 17 回收率校正后）平均值与真值的偏差为-4.7% ，符合附录 1 要求。3.5.6 方法耐用性3.5.6.1 目的：确认在测定条件有微小变动时，测定结果不受影响的程度。3.5.6.2 操作步骤：3.5.6.2.1 调整负高压（ 30010）V，按验证实验条件测试标准溶液, 记录平行样之间的相对平行样之间的相对误差见下表：系统参数样 1 样 2 平行样之间的相对误差（ % ）负高压（V）300 112 108 3.6 负高压（V）290 105 102 2.9 负高压（V）310 107 104 2.8 0名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 13 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 14 of 17 3.5.6.2.3 结论：经验证在条件有微小波动时，对检测结果没有影响，符合要求3.6 总结: 通过此方法验证，证明方法符合要求，依照该方法进行检测时符合分析的要求4. 附录 1 4.1 回收率对于食品中的禁用物质，回收率应在方法测定低限、两倍方法测定低限、十倍方法测定低限进行三水平试验；对于已制定最高残留限量（MRL ）的，回收率应在方法测定低限、MRL 选一合适点进行三水平试验；对于未制定最高残留限量（MRL ）的，回收率应在方法测定低限、常见限量指标选一合适点进行三水平试验。表 1 回收率范围被测组分含量 /(mg/kg) 回收率范围 /% 100 95105 1100 90110 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 14 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 15 of 17 0.1 1 80110 0.1 60120 4.2 校准曲线应描述校准曲线的数学方程以及校准曲线的工作范围，浓度范围尽可能覆盖一个数量级， 至少做 5 个点 （不包括空白）。 对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不应低于0.98 ，对于确证方法， 相关系数不应低于0.99 。测试溶液中被测组分浓度应在校准曲线的线性范围内。4.3 精密度对于食品中的禁用物质，精密度试验应在方法测定低限、两倍方法测定低限、十倍方法测定低限进行三水平试验；对于已制定最高残留限量（MRL ）的，精密度试验应在方法测定低限、 MRL 选一合适点进行三水平试验；对于未制定最高残留限量（MRL ）的，精密度试验应在方法测定低限、常见限量指标选一合适点进行三水平试验；重复测定次数至少为6 次。实验室内部的变异系数参考范围见下表。表 2 实验室内部变异系数被测组分含量实验室内部变异系数（ CV ）% 0.1 g/kg 43 1g/kg 30 10g/kg 21 100g/kg 15 1mg/kg 11 10mg/kg 7.5 100mg/kg 5.3 1000mg/kg 3.8 1% 2.7 10% 2.0 100% 1.3 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 15 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 16 of 17 4.4 测定低限方法的测定低限按下式计算：bSCbL3式中：CL 方法的测定低限；Sb 空白值标准偏差（一般平行测定20次得到） ；b 方法校准曲线的斜率。对于已制定 MRL 的物质，方法测定低限加上样品在MRL 处的标准偏差的 3 倍，不应超过 MRL 值，对于禁用物质，方法测定低限应尽可能低。4.5 准确度重复分析标准物质（实物标样）或水平测试样品，测定含量（经回收率校正后）平均值与真值的偏差指导范围见下表。表 3 测定值与真值的偏差指导范围真值含量 / （mg/kg）偏差范围 /% 0.001 -50+20 0.0010.01 -30+10 0.01010 -20+10 101000 15 100010000 10000 5 8.6 提取效率提取效率可用以下方法进行试验：a）用阳性的标准物质或水平测试的阳性样品进行试验；b）阳性样品用同一溶解反复提取，观察被分析物的浓度变化；c）用不同提取技术或不同提取溶剂进行比较。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 16 页，共 17 页 - - - - - - - - - page 17 of 17 4.7 特异性对于检测筛选方法和确证方法特异性必应予以规定，尤其对于确证方法必应尽可能清楚地提供待测物的化学结构信息，仅基于色谱分析而没有使用分子光谱测定的方法，不能用于确证方法。确证方法可采用：a） 气相色谱 - 质谱；b） 液相色谱 - 质谱；c） 免疫亲和色谱或气相色谱 - 质谱；d） 气相色谱 - 红外光谱；e） 液相色谱 - 免疫层析。4.8 耐用性方法应具有对可变试验因素的抗干扰能力，当测定条件发生细小变动时，方法应具有一定的保持测定结果不受影响的承受程度。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 17 页，共 17 页 - - - - - - - - -