最新多维色谱分析在蛋白质检测中的应用教学课件.ppt

目标蛋白质其它特征等电点分子大小带电状况疏水性目标蛋白的特征相对分子质量?1. 多维高效液相色谱(HPLC)3. 多维高效液相色谱-毛细管电泳(HPLC-CE)2. 多维毛细管电泳(CE)常见的多维色谱分析法多维高效液相色谱(HPLC) 即是将分离机理不同而又相互独立的两支色谱柱串联起来构成的分离系统。 样品经过第一维的色谱柱进入接口中,通过浓缩、捕集或切割后被切换进入第二维色谱柱及检测器中。 在一维分离系统中不能完全分离的组分,可能在二维系统中得到更好的分离,分离能力、分辨率得到极大的提高。 以二维液相色谱为例：多维高效液相色谱技术在实际蛋白质检测中又分为：整体蛋白质混合物的多维色谱分离技术。多肽混合物的分离技术。例在研究白血病细胞系蛋白质组时待检测蛋白质混合物二维液相色谱分离-多维色谱预分离色谱聚焦根据不同蛋白质的等电点不同进行分离非多孔填料的反相柱收集馏分浓缩和酶解基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOFMS)预处理后的馏分蛋白质鉴定系统数据库 另外,色谱分离还可与其他分离手段相结合,用于蛋白质翻译后修饰的研究中。离子交换色谱-反相液相色谱与质谱联用技术计算机检索(鉴定混合物中的蛋白质) 。样品(细胞、组织等)Trypsin 酶解多肽混合物阳离子色谱柱(第一维色谱:强阳离子交换色谱分离,阶梯梯度洗脱)进样强阳离子交换色谱馏分进样RP-HPLC(第二维色谱: RP-HPLC 分离,线性梯度洗脱)RP-HPLC 分离馏分进样MS ,MS/ MS (多肽序列分析)色谱聚焦-反相液相色谱与质谱联用技术。亲和色谱-反相液相色谱与质谱联用技术。 毛细管电泳的缓冲液通常是高离子强度、低挥发性,与质谱的兼容性较差; 与LC-MS 联用相比, CE-MS 联用技术在生命科学领域的应用尚处于起步阶段, 其关键问题在于CE 与MS 的接口尚不能满足需要。主要原因是:(2) 二者的工作速度不匹配。多维毛细管电泳(CE)实际操作中二维液相色谱与质谱联用多维高效液相色谱装置图多维高效液相色谱装置图1999 年年Link 等提出了一种新型的多维蛋白质识别技术等提出了一种新型的多维蛋白质识别技术谢谢观看！Column HPLC 色谱柱色谱柱 MOS制作 2005.12.27