肌肉特殊染色.doc
精品文档，仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除肌肉冰冻切片常用组织学及酶组织化学染色技术 （）苏木精和伊红染色（Hematoxylin and Eosin, HE） 1 苏木精溶液染色10分钟 2流水冲洗10分钟 2 伊红溶液染色3分钟 4流水冲洗1分钟 5梯度酒精脱水，透明树胶封固 骨骼肌HE染色（肌膜核蓝色，肌纤维粉红色，结缔组织淡红色） （二）改良Gomori三色染色方法（Modified Gomori Trichrome, MGT） 1 Harris苏木精10分钟 2 水冲洗 10分钟 3 Gomori氏溶液30分钟 60分钟 402%醋酸浸洗1分钟 5酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。 骨骼肌MGT染色（核紫红,肌纤维暗绿色,胶原亮绿色 ,线粒体红色） （三）PAS反应法(Periodic Acid Schiffs reaction, PAS) 1 固定于Carnoiy氏固定液10分钟 2流水冲洗2分钟 305%过碘酸5分钟 4蒸溜水洗12分钟 5Schiff氏溶液1530分钟 6流水洗510分钟 7Harris苏木精溶液2分钟 8流水洗5分钟 9脱水、透明、封固（合成树胶） 骨骼肌PAS染色结果：糖原红色，肌内肌原纤维用清晰可见A纤维染色反应强，B、C、型纤维呈中间型。 （四）苏丹黑B染色 1.苏丹黑溶液20分钟（加盖防气化） 2 流水洗 1 过滤的苏木精染1分钟 4 流水洗2分钟 5 甘油明胶封固 结果：脂类物质染成黑色，。（五）四氮唑还原酶(NADHtetrarolium redutase, NADHTR ) 1. 孵育于下列基质内30分钟，37 0.05M（或0.2M）Tric缓冲液（PH7.4） 30ml 硝基四氮唑（BNT）30mgNADH 24mg 2. 蒸馏水洗。 3. 甘油明胶封固。 骨骼肌NADHTR染色(型肌纤维紫兰色，型肌纤维淡灰色)。（六）琥铂酸脱氢酶（Succinate dehydrogenase，SDH） 染色步骤 1孵育于下列基质30分钟,37 （琥泊酸钠100 mg 硝基四氮唑兰 10 mg 吩嗪二甲脂硫酸盐0.3 mg 0.1M Tris缓冲液30ml 调PH7.2 ）2顺序在60%、90%、60%丙酮顺序脱水及蒸馏水清洗 3甘油明胶封固。 骨骼肌SDH染色（型纤维色深，A、C中间型，B染色浅）（七） 细胞色素氧化酶染色（COX）1 下述基质内孵育14小时 37 DAB（3， -3，-二氨基联苯二氨盐酸盐） 30mg 01M醋酸缓冲液 14.0ml 1%氯化锰 1.5ml 01%新鲜过氧化氢 0.15ml 2 蒸馏水冲洗 3 1%硫酸铜冲洗5分钟 4 蒸馏水冲洗 5 甘油封固 肌纤维呈褐红色，代表线粒体反应，细胞色素氧化酶缺陷时则无色。（八）腺苷三磷酸酶(Adenosine Triphosphatase, ATPase) 1.制备下述溶液：A）碱性溶液： 0.1M 巴比妥钠 1份体积 0.18M CaCl2 1份体积 蒸馏水 3份体积 调PH 9.7-11.0 B）主要孵育液及上清液： 0.1M 巴比妥钠 2份体积 0.18M CaCl2 1份体积 蒸馏水 7份体积 上述溶液分成二份即B（-）与B（+），B（-）为上清液，B（+）液为孵育液，即将B液20ml+ATP-Na:50mg调PH9.7。 C）酸性反应液： 0.2M-巴比妥醋酸缓冲液 0.2M-巴比妥醋酸盐溶液 5份体积 0.1M HCL 10份体积 蒸馏水 8份体积 调PH 4.2-4.62碱性PH染色片置于A液15分钟 310分钟后将酸性PH染色片置C液内5分钟 4取出 5全部切片置于B（+）溶液内45分钟 6制备下述溶液 1% CaCl2 2g/200ml 2%CoCl2 1g/50ml 0.01M- 巴比妥钠溶液 1000ml 7 1% Cacl2溶液内洗三次10分钟. 8 2% Cocl2 溶液内3分钟 9流水洗2分钟 100.01M-巴比妥钠溶液内洗8次 111%黄色硫化铵30秒 12流水洗15分钟 013脱水、50%100%酒精 14二甲苯透明两次 15封固 （九）AMP染色(单磷酸腺苷脱氢酶)adenosine monophosphate deaminase1） 反应液 蒸馏水 14ml AMP 6mgNBT 15mg 3MKCl 1ml(搅拌同时慢慢加入)0.1N NaOH 调整PH6.1DTT 8mg2)室温1小时反应3）150mKCl-1.5mM citrate(PH6.0) 2次洗净4）自然干燥5）甘油胶封片固定（十）Acid Phosphataso染色（酸性磷酸酶）1）反应液 萘酚AS-BI（naphtol AS-BI） 1ml巴比妥醋酸钠缓冲液(veronal acetate) 5ml蒸馏水 14ml4%NaNo2(sodium nitrite) 0.8ml 副品红碱液(pararosaniline) 0.8ml 室温放置2分加入中混合PH4.7-5.0用1N NaOH 调整 过滤2） 37孵化60分3） 水洗 4） 2%甲基绿(methyl green)（滤过） 数秒 酒精脱水，二甲苯透明。5） 加拿大胶封片固定【精品文档】第 5 页
