2022年分子生物学复习资料总结 .pdf

学习必备欢迎下载分子生物学复习资料第一章DNA 与染色体的结构1、DNA 结构的多态性与动态性【重】1，二级结构的多肽性：除了B-DNA 外，人们还发现了其他的结构参数有一定差异的双螺旋DNA ，如： A-DNA, Z-DNA 等，这一现象称为DNA 结构的多态性（ploy-morphism ） 。2，动态性定义：不同DNA 结构形式相互转变的现象称为DNA 的动态性。B-DNA 的主要特点：两条反向平衡的多核苷酸链围绕同一中心轴盘绕成右手双螺旋。糖与磷酸在外侧形成螺旋的轨迹，核苷酸间彼此通过3,5 -磷酸二酯键相连。碱基伸向内部，其平面与螺旋轴垂直两条核苷酸链依靠彼此碱基之间形成的氢键相联系而结合在一起，且总是a 与 t ，g 与 c 配对 双螺旋平均直径为2nm ，每个螺旋圈上升10 个核苷酸，螺距为3。4nm 沿螺旋中心轴方向看去，双螺旋结构上有两个凹槽, 一个较为宽深，称大沟，一个较浅小，称小沟。2、DNA 变性、复性和分子杂交【重】变性：在某些物理、化学因子的作用下，DNA 双链间的氢键断裂，双链解离形成单链。复性：去除变性条件后，单链DNA 在适当条件下重新形成双链，回复到原有的物理和生物学特性。分子杂交：基于DNA 的变性与复性的特性，双链DNA 加热以后变成单链，在去除变性条件后，在一定的条件下，具有互补顺序的DNA 能再形成双链。3、DNA 双螺旋结构的主要特点P351）两条链反平行相互缠绕的右手螺旋，螺旋有大沟和小沟2）碱基在内侧，磷酸和核酸在外侧3）螺旋直径2nm，碱基距0.34nm 每圈 10（ 10.5）个核苷酸残基，螺距3.4（3.6） nm 4）A 与 T 形成 2 个氢键， G 与 C 形成 3 个氢键第二章基因与基因组结构1. 基因 (gene) ：是一段具有特定功能和结构的连续的脱氧核苷酸（DNA ）序列。（或者说是合成一种功能蛋白或RNA 分子所必须的全部DNA 序列） 基因是生物体传递和表达遗传信息的基本单位。一个典型的真核基因包括编码序列 - 外显子 (exon) 插入外显子之间的非编码序列- 内合子 (intron) 5 -端和 3 -端非翻译区 (UTR) 调控序列 (可位于上述三种序列中) 绝大多数真核基因是断裂基因(split-gene) ，外显子不连续顺反子理论：对经典的基因概念的第一次重要修正与发展a 一个顺反子编码一条多肽链b 顺反子：是一个为多肽链编码的DNA 片断，顺反子的内部可以发生突变或重组，即包含c 许多突变子（ muton)和重组子（ recon) d 顺反子学说否定Morgan 认为基因是功能单位（顺反子）、又是互换单位（重组子）、突变单位（突变子）的概念. 2. 基因家族：真核细胞中许多相关的基因常常按功能成套组合，一套基因就是所谓的一个基因家族（gene family ）基因簇：一个家族的基因成员可以在染色体上紧密地排列在一起，成为一族，称为基因簇（gene cluster）. 在人类基因组中有12 个大的基因簇。外显子（ exon） ：断裂基因中的表达序列，即转录后在成熟的RNA 中存在内含子（ intron） ：断裂基因中的非表达序列，即在mRNA 成熟加工过程中被除去1、一个典型的真核基因包括P237 编码序列 - 外显子 (exon)绝大多数真核基因是断裂基因(split-gene) ，外显子不连续插入外显子之间的非编码序列-内合子 (intron) 5-端和 3-端非翻译区 (UTR) 调控序列 (可位于上述三种序列中) 2、基因组的概念P237 生物体的整套（单倍体）遗传物质的总和。3、原核生物基因组的特点P238原核生物物的基因组都较小：如大肠杆菌，整个基因组由4.6106bp 组成，大约包含3000-4000 个基因；精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页，共 8 页学习必备欢迎下载基因组的序列大部分是用来编码蛋白质的，只有及少数部分不转录，而不转录部分通常是控制基因表达的序列；存在着基因重叠的现象，即同一段DNA 序列能携带2 种不同的蛋白质信息；原核生物的基因是连续的，基本不存在内含子成分，因此在转录后不需要剪接加工，并且，决大多数区域都无重复序列；在转录调控中存在操纵子结构（Operon)：即 DNA 序列中功能相关的RNA 或蛋白质基因往往前后排列在一起形成一个转录单位，从同一启动子开始转录形成一个多顺反子mRNA ，然后分别表达成不同的RNA 或蛋白质；4、真核生物基因组的特点P238真核基因组DNA 在细胞核内处于以核小体为基本单位的染色体结构中即真核生物基因分布在多个染色体上；真核基因组中，编码序列只占整个基因组的很小部分(23) ；真核生物在基因组转录后的绝大部分前体RNA(pre-mRNA) 必须经过剪接过程才能形成成熟的mRNA(mature RNA) ；真核生物的转录和翻译在时空上都是分离的；真核生物的基因是不连续的，中间存在不被翻译的内含子（intron)序列；真核生物基因组复制起点多，缺少明显的操纵子结构5、物种的C 值 P238一个物种单倍体基因组的DNA 含量称为该物种的C 值每个物种的C 值是相对恒定的，不同物种的C 值差异极大第三章DNA 的复制、突变、损伤修复1、DNA 复制共同特征【重】P39 半保留性 (Semi-Conservative) ；通常双向复制：复制起始点(origin)+ 两侧复制叉 =复制单位 (复制子 , Replicon) 半不连续性 (Semi-discontinuous) ：前导链 (leading strand)-连续合成；随从链(Lagging Strand)- 不连续 ,由岗崎片段(okazaki-Fragment) 连接而成；复制的起点具有特殊序列；需要 RNA 引物；复制具有高度的忠实性在合成时， 1 条链的合成方向和复制叉的前进方向相同，可以连续复制，这条链称前导链链。另一条链的合成方向和复制叉的前进方向相反，不能连续复制，只能分成几个片断合成，称为滞后链、后随链。DNA 的这种方式称不连续复制, 连接滞后链的片断称冈崎片断2、基因突变与DNA 的损伤修复【重】基因突变：突变是DNA 分子碱基序列水平上所发生的一种永久性、可遗传性的变化，它是与遗传保守性相对立而又相互统一的自然现象。DNA 损伤：指正常 DNA 分子的化学结构或物理结构在某些物理、化学因素以及细胞自发产生的基因毒素等干扰作用下发生改变的现象。DNA 修复：是指DNA 受到损伤后，细胞内发生的使DNA 的化学组成和核苷酸序列重新恢复或使细胞对DNA 损伤产生耐受的一系列反应。3、DNA 复制起点特征的共同点P41 共同特点：由多个独特的短重复序列组成；短重复序列被多亚基的复制起点结合蛋白所识别；复制起点附近一般有一个富含A-T 的序列，以利于双螺旋DNA 解链或解旋。4、DNA 复制的必需要素P45A、染色体DNA 复制必需三种核苷酸序列复制起点着丝粒端粒. B、RNA 引物 (RNA Primer) ：一般 8-14nt.带游离 3 -OH 末端 . C、参加 DNA 复制的主要酶和蛋白质：DNA 聚合酶 (DNA Polymerase) 真核 DNA 复制的主要酶DNA Pol a/ . 功能 :从 5 -3 方向延伸与模板互补的子代链. 引发酶 (Primase) ：与其他多种蛋白组成多蛋白复合体-引发体 (Primosome).催化 RNA 引物合成和复制起始. DNA 连接酶 (DNA Ligase) ： 催化一个双链DNA 的 5 磷酸与另一双链DNA 的 3 -OH 形成磷酸二酯键. DNA 解链酶 (DNA Helicase) ：打开 DNA 双链 . 精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页，共 8 页学习必备欢迎下载增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen.PCNA)：辅助催化前导链合成. 端粒酶 (Telomerase) ： 端粒酶负责染色体末端(端粒 )复制5、突变基因、突变体、移码突变的概念P47突变基因：碱基序列发生改变的基因称为突变基因（mutant gene）突变体：携带突变基因的生物个体或群体或株系通常称为突变体（mutant）移码突变：如果插入或缺失的核苷酸数码不等于3 的倍数，将会造成突变点后的全部密码子阅读框架移位，进而翻译产生的氨基酸序列与正常蛋白质完全不同，或使肽链提前终止或延长，产生无正常功能的异常蛋白质，这种突变称之。6、突变的类型突变的类型按照突变生成的过程可将突变分为自发突变和诱发突变（诱变）自发突变：由于自然界突变剂的作用或由于偶然的复制错误而产生的突变都属于自然突变诱变：利用突变剂处理生物体而产生的突变：A、碱基置换突变；B、缺失或插入突变7、DNA 修复的主要方式：直接修复： A 光复合， B 断裂链的重接，C 直接插入嘌呤，D 烷基转移修复；切除修复： A 碱基切除修复(Base excision repair、BER)；B 核苷酸切除修复(Nucleotide excision repair ，NER)；C 错配修复(Mismatch repair) 负责修复DNA 复制过程中由于错误掺入而产生的错配8、点突变类型与概念P47 最简单的碱基置换突变是点突变，即DNA 序列上单个碱基的改变。类型：（ 1）同义突变（沉默或沉寂突变）：ACU-ACC-ACA(苏） ； （2）错义突变；（3）无义突变； （4）终止密码子突变； （5）起始密码子突变：第四章转录与转录后加工1、转录的基本特征P64转录是 DNA 的信息流向RNA 的过程，是基因表达第一步；除了某些病毒RNA 基因组外，所有RNA 分子都是以DNA 为模板合成的转录过程中， 酶系统将 DNA 片断的遗传信息转移到与其中一条DNA 链有互补碱基顺序的RNA 链，转录大多数为对称转录；转录与复制的不同：复制过程是整条染色体复制，而转录是有选择的；细胞的转录机制都类似：需要RNA 聚合酶为工具， DNA 为模板， 4 种三磷酸核苷酸（ATP/CTP/GTP/UTP ）为原料，镁离子为辅助成分；转录的过程可以分为模板识别、起始、延伸和终止4 个过程（后加工可算第5 阶段）转录的初级产物通常不稳定：把作为转录模板的DNA 单链称模板链或反义链，非模板链称为编码链或有义链。mRNA 的合成延着5 3方向进行。2、原核生物与真核生物转录加工过程内容与异同？3、启动子、终止子的概念P71 启动子：启动子是基因转录起始所必须的一段DNA 序列，一般位于结构基因的上游，是DNA 分子上与 RNA 聚合酶特异结合而使转录起始的部位，启动子本身不被转录终止子：是指一个在基因编码区下游的可被RNA 聚合酶识别和停止合成RNA 的一段 DNA 序列4、 35 区、 10 区 P71 原核生物启动子模式：包括两个区域：转录起点的碱基上游约40bp 范围内，包含有同源性较强的两个保守区，一个是 10bp 区和 35bp 区10 区：由 6 8 个核苷酸组成，大多包含TATAA T 序列又称 Pribnow box 区35 区：由 10 个核苷酸组成，有TTGACA序列 ，是 RNA 聚合酶结合位点，决定启动子的强弱5、原核生物RNA 的转录后加工P78 A 原核生物 mRNA 前体的加工； B 原核生物tRNA 前体的加工：（1）由核酸内切酶在tRNA 两端切断；（2）由核酸内切酶从 3-端逐个切去附加的顺序，进行修剪；（3）在 tRNA3 -端加胞苷酸胞苷酸腺苷酸（CCAOH ）结构； （ 4）核苷酸的修饰和异构化；C 原核生物rRNA 前体的加工：主要是在rRNA 前体需先经甲基化修饰，再被核酸内切酶和核酸外切酶切割6、真核生物RNA 的转录后加工P82精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页，共 8 页学习必备欢迎下载A 真核生物 mRNA 前体的加工： 5加帽（多种帽子，但都含7甲基鸟苷酸）和3端加多聚 (A) 尾 （增加 mRNA的稳定性）；BtRNA 的转录后加工： （1）切除 tRNA 前体两端多余序列； （2）3末端添加CCA 序列；（3）加甲基等进行修饰；CrRNA 的转录后加工；DRNA 的拼接、编辑和再编码；第五章1、遗传密码子特征及概念P104 遗传密码子： mRNA 上决定一个特定氨基酸的三个连续核苷酸，称为密码，或三联子密码a密码子的通用性；b简并性； c摆动性； d密码子的不重叠性：密码子间无标点符号；e密码子的阅读方向与阅读框：5 3方向连续阅读2、tRNA 的种类 P111 （1）校正 tRNA:校正基因突变（2）起始 tRNA与延伸 tRNA （3）同工 tRNA （4）转移信使RNA （tmRNA ） ：兼具 tRNA分子和 mRNA 分子的双重功能tRNA 的特点：A、tRNA 的形态特征（1） 不同来源的tRNA 具有共同的特征， 组成 tRNA 的核苷酸一般为7493 个，大部分为 76 个；几乎所有的tRNA都具有三叶草式的二级结构（2）tRNA 一级结构特点：具有一定的恒定性，含有大量的修饰性碱基。B、tRNA 的高级结构tRNA 的单链通过碱基配对折叠成三叶草形二级结构，三叶草构型进一步通过氢键等作用，折叠成倒L 型的三级结构，其长度接近7nm， 呈扁平状。 不同种类的tRNA 具有类似的三维结构，所不同的仅是在倒L 形的角有轻度改变，这表明在拐角区可伸屈，以允许tRNA 在执行不同功能时能改变其生物学功能C、tRNA 的专一性tRNA 种类繁多，但一种tRNA 只携带一种氨基酸，这就是tRNA 的专一性3、蛋白质生物合成的主要步骤P122 （1）翻译的起始： 核糖体与 mRNA 结合并与氨基酰tRNA 生成起始复合物 （核糖体是蛋白质合成的场所，mRNA是蛋白质合成的模板，tRNA 是模板与氨基酸之间的接合体。此外，有20 种以上的AA-tRNA及合成酶、 10 多种起始因子、延伸因子及终止因子，30 多种 tRNA 及各种 rRNA 、mRNA 和 100 种以上翻译后加工酶参与蛋白质合成和加工过程。） ； （2）肽链的延伸：核糖体沿mRNA5 端向 3端移动，导致从N 端向 C 端的多肽合成； （3）肽链的终止以及肽链的释放：核糖体从mRNA 上解离，准备新一轮合成反应4、信号肽理论主要包括P135 A 胞内蛋白质的去向由其自身所含的信号肽指引，信号肽一般位于新生肽的N 端，但也有一些位于肽链的内部，长度一般为1030 个氨基酸残基，平均15 个残基B 胞内存在两套独立的、互不相关的机制，一套机制负责把新生肽转运到各种细胞器内，或分泌到细胞外，蛋白质的流向是单向的；另一套机制则负责把某些细胞质内的蛋白质转运到核内，或把某些核内的蛋白质转运到核外，这一过程是双向的。5、简并性的概念P105 由一种以上密码子编码同一个氨基酸的现象称为简并，对应于同一氨基酸的密码子称为同义密码子第六章1、原核生物基因表达调控的特点P196 （1）原核生物基因表达调控的表达控制存在于转录和翻译的起始、延伸和终止的每一步骤中（2）调控多以操纵子为单位进行，将功能相关的基因组织在一起，同时开启或关闭基因表达，既经济有效，又保证其生命活动的需要（3）调控主要发生在转录水平，有正调控（启动或增强基因表达活性）和负调控（关闭或降低基因表达活性）两种机制（4）转录水平上的调控决定于DNA 的结构、 RNA 聚合酶的功能、蛋白因子及其小分子配基的相互作用精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页，共 8 页学习必备欢迎下载（5）细菌的转录与翻译过程几乎在同一时间内相偶联2、原核生物基因表达调控的操纵子学说P197 内涵：即操纵子是原核生物在分子水平上基因表达调控的单位，由调节基因、启动子、操纵基因和结构基因等组成。 通过调节基因编码的调节蛋白或与诱导物、辅阻遏物协同作用，开启或关闭操纵基因，对操纵子结构基因的表达进行正调控或负调控第七章1、基因工程的概念P147 基因工程：将不同的基因在体外人工切割并与载体连接，导入到另一种微生物和细胞内，进行无性繁殖（克隆）和扩增，从而行使正常功能（表达蛋白质），甚至创造生物新品种或新物种的遗传学技术。（Gene Engineering， Gene Manipulation ）2、限制性核酸内切酶的概念、命名法则P148 限制性核酸内切酶（限制酶）-一类能识别并切割双链DNA 分子中特定核苷酸序列（如回文序列）的核酸水解酶。限制酶命名：限制性内切酶的命名遵循一定的原则，主要依据来源来定，涉及宿主的种名、菌株号或生物型。（1）宿主属名第一个字母（大写）（2） +种名前两个字母（小写）（3）+菌株名或型第一个字母（大小写） （4）+空格 +序号（罗马数字）影响酶活性的因素外因是可预见和控制的，如反应条件、底物的纯度（是否有杂质、是否有盐酚的污染）、何时加酶、操作是否恰当、反应体积的选择以及反应时间的长短等等。内因包括位点偏爱性、甲基化底物、底物的构象。构象的影响主要指切割线性DNA 和超螺旋DNA 时的活性3、II 型限制性核酸内切酶基本特点P148 （1）限制酶识别序列的长度：限制酶识别序列的长度一般为4-8 个碱基， 最常见的为6 个碱基。 当识别序列为4 个和 6 个碱基时， 它们可识别的序列在完全随机的情况下，平均每256 个和4096 个碱基中会出现一个识别位点（44=256，46=4096） 。（2）限制酶识别序列的结构：限制酶识别的序列大多数为回文对称结构，切割位点在DNA 两条链相对称的位置。（3）限制酶切割的位置：限制酶对DNA 的切割位置大多数在内部，但也有在外部的。在外部的，又有两端、两侧和单侧之别。（4）限制酶产生的末端4、基因工程技术的基本步骤或内容P149 基因工程技术的基本步骤或内容：1）目的基因制备和分离（获得）；2）DNA 重组体的构建（酶切、连接）；3）DNA 重组体的扩增（导入） ；4）重组体筛选和鉴定（筛选）；5）基因表达及产物的分离纯化和鉴定（表达）。5、同裂酶、同尾酶、位点偏爱、切口酶的概念P150 同裂酶（ isoschizomer） ：识别相同序列的限制酶称同裂酶，但它们的切割位点可能不同。同尾酶：许多不同的限制酶切割DNA 产生的末端是相同的，且是对称的，即它们可产生相同的粘性突出末端。这些酶统称为同尾酶。这些酶切割DNA 得到的产物可进行粘端连接。位点偏爱： 某些限制酶对同一介质中的有些位点表现出偏爱性切割，即对不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率的现象称作位点偏爱。切口酶：有些限制酶只切割双链DNA 中的一条链，产生单链缺口，即切口酶。6、酶切反应条件P150 1 个限制酶活力单位在规定的缓冲液及温度条件下，在20ul 反应液反应1小时，使1ug DNA 完全消化所需的酶量。（1）缓冲液：常规缓冲液一般包括提供稳定pH 值的缓冲剂、Mg+ 、 DTT（二硫苏糖醇）以及BSA（小牛血请白蛋白）。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页，共 8 页学习必备欢迎下载（2）反应温度：反应温度大多数为37 ，一部分为50-65 ，少数25-30 。销售商在产品说明中都会标明最佳反应温度。（3）反应时间：反应时间通常为1 小时或更多，许多酶延长反应时间可减少酶的用量。（4）终止酶切的方法：EDTA 、加热等方法。7、耐热 DNA 聚合酶、反转录酶、连接酶、标记基因、互补的概念及连接酶的主要来源和功能耐热 DNA 聚合酶在高温下有DNA 聚合活性，来自噬高温的细菌，主要用于PCR 反应，如Taq DNA 聚合酶、Vent DNA 聚合酶、Pfu DNA 聚合酶、Pwo DNA 聚合酶和Tth DNA 聚合酶等。反转录酶即依赖于RNA 的 DNA 聚合酶，它有5-3 合成DNA 活性，但是无3-5 外切活性。连接酶就是将两段核酸连接起来的酶，相当于基因工程中的“糨糊”。现已发现几种不同来源或作用于不同底物的连接酶。按其用途可将标记基因分为选择标记基因和筛选标记基因。选择标记用于鉴别目标DNA （载体）的存在，将成功转化了载体的宿主挑选出来。筛选标记可用于将特殊表型的重组子挑选出来。-互补是指lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的-半乳糖苷酶（-galactosidase ）阴性的突变体之间实现互补。-互补是基于在两个不同的缺陷-半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。大肠杆菌的乳糖lac 操纵子中的lacZ 基因编码-半乳糖苷酶，如果lacZ 基因发生突变，则不能合成有活性的-半乳糖苷酶。8、基因（分子）克隆、遗传工程、蛋白质工程的概念P157 基因（分子）克隆：将作为供体的重组DNA 分子置于与他毫无亲缘关系的受体（宿主）细胞内复制（扩增）的过程；或重组DNA 分子操作、复制过程。 （Gene Cloning, Molecular Cloning ）遗传工程： 包括基因工程在内的人工改造生物遗传性的全部技术，即以改变生物有机体性状的特征为目标的遗传信息量操作。（Genetic Engineering ）蛋白质工程：在基因工程技术的基础上通过对基因的定向突变改造，从而达到了对固有蛋白质的结构与功能修饰，并可以离体表达，这就是第二代基因工程，所谓的蛋白质工程。Protein Engineering 9、星星活性的概念P152 在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称星星活性。10、5 3DNA 聚合酶活性P152 只有具备了下述三种条件的情况下，DNA 聚合酶 I 才能够催化合成DNA 的互补链，这些条件包括：A、全部四种脱氧核苷5-三磷酸 dNTPs（dATP、dGTP、dCTP、dTTP）和 Mg 离子。无论是 5-磷酸和 5-二磷酸还是3-磷酸、 3-二磷酸和3-三磷酸都不能作为DNA 聚合酶 I 催化的聚合作用的底物，只有5-三磷酸 dNTPs 才是这种聚合作用的真正的底物。B、带有 3-OH 游离基团的引物链。如此 DNA 聚合酶 I 才能将脱氧核苷酸加到这段预先存在的DNA 引物链的3-OH 末端。C、DNA 模板，它可以是单链的，也可以是双链的。双链的 DNA 只有在其糖 -磷酸主链上有一至数个断裂的情况下，才能是有效的模板。DNA 聚合酶 I 催化的聚合作用，是在生长链的3-OH 基末端基团同参入进来的核苷酸分子之间发生的。当这个核苷酸加入之后，它又提供了另一个游离的3-OH 末端基团，因为每一条DNA 链都具有一个5-P 末端基团和一个 3-OH 末端基团。因此说，DNA 聚合酶 I 催化的 DNA 链的合成是按照5-3方向生长的。11、质粒、载体概念P155 质粒：细菌质粒是存在于细胞质中的一类独立于染色体的自主复制的遗传成分，绝大多少由环形双链的DNA 组成的复制子。除了酵母的杀伤质粒（killer plasmid ）是一种RNA 质粒之外。载体：将外源DNA 或基因携带入宿主细胞（host cell）的工具（ DNA 片段）称为载体。载体是基因操作的核心工具。来源于质粒或噬菌体等DNA 分子，可以供插入或克隆目的基因DNA ，并具有传递运载外源DNA 导入宿主细胞能力。12、质粒的基本特性P156 （1）质粒的复制； （2） 质粒的拷贝数：质粒拷贝数分为严谨型（stringent plasmid ）与松驰型（relaxed plasmid） 。严谨型质粒每个细胞中拷贝数有限，大约1 几个；松驰型质粒拷贝数较多，可达几百。； （3） 质粒的不相容性：两个亲缘关系密切的质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性。而不相容群（incompatibility group ）指精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页，共 8 页学习必备欢迎下载那些具有不相容性的质粒组成的一个群体，一般具有相同的复制子；（ 4） 迁移性；13、理想载体必须具备的条件P155 1）具有复制起点；2）具有抗菌素抗性基因；3）具有若干限制酶单一识别位点；4）具有较小的分子量和较高的拷贝数14、目的基因的分离手段及鉴定手段鸟枪法；机械切割法，或限制酶局部消化法处；15、基因文库、基因组文库概念基因文库：指某个生物的基因组DNA 或 cDNA 片段与适当的载体在体外通过重组后，转化宿主细胞，并通过一定的选择机制筛选后得到大量的阳性菌落（或噬菌体），所有菌落或噬菌体的集合。基因组文库：指将某生物体的全部基因组DNA 用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA 片段，与合适的载体体外重组并转化相应的宿主细胞获得的所有阳性菌落。16、基因文库的构建、过程基因组DNA 文库的构建程序包含5 个部分： 载体的制备； 高纯度大分子量基因组DNA （High molecular weight DNA, HMW DNA）的提取； HMW DNA 的部分酶切与脉冲电泳分级分离（PFGE size selection） ； 载体与外源片段的连接与转化或侵染宿主细胞； 重组克隆的挑取和保存。17、DNA 与 cDNA 文库的区别18、PCR 三个步骤（原理） 【重】 p164 变性（ denaturation） ：将模板DNA 置于 9的高温下，加热分钟，使dsDNA 在高温下解链成为ssDNA ，且热变性不改变其化学性质；退火（ annealing） ：将温度降低约50，致冷分钟，使专门设计的一对寡核苷酸引物与两条单链模板DNA 结合在靶 DNA 区段两端的互补序列位置上；延伸（ extension） ：将反应混合物的温度上升到72条件下，保温1.5 分钟，此时DNA 聚合酶将dNTP 连续加到引物的3-OH 端，合成新生的 DNA 互补链。19、PCR 反应体系P163 参加 PCR 反应的物质主要有五种，即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 标准的 PCR 反应体系：10扩增缓冲液10ul 4 种 dNTP 混合物各 200umol/L 引物各 10100pmol模板 DNA 0.12ugTaq DNA 聚合酶2.5uMg2+1.5mmol/L 加双或三蒸水至100ul 20、PCR 引物设计的11 条法则 P164 1.引物最好在模板cDNA 的保守区内设计；2.引物长度一般在1530 碱基之间；3.引物 GC 含量在 40% 60% 之间，Tm 值最好接近72； 4.引物 3端要避开密码子的第3 位； 5.引物 3端不能选择A，最好选择T；6. 碱基要随机分布； 7. 引物自身及引物之间不应存在互补序列；8. 引物 5 端和中间 G 值应该相对较高，而3 端 G 值较低； 9.引物的 5端可以修饰，而3端不可修饰；10. 扩增产物的单链不能形成二级结构；11. 引物应具有特异性21、重组体进入细胞中的方法DNA 分子进入受体菌过程：（1）吸附完整的双链DNA 分子吸附在受体菌的表面；（2）转入双链DNA 分子解链。单链DNA 进入受体菌，另一链降解；（3）自稳外源质粒DNA 分子在细胞内繁殖复制成双链DNA 分子；（4）表达供体基因随同复制子同时复制，并被转录、翻译。重组体分子导入受体细胞的途径：带有外源 DNA 片段的重组体分子在体外构成之后，需要导入适当的寄主细胞进行繁殖，才能获得大量的纯一的重精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页，共 8 页学习必备欢迎下载组体 DNA 分子，这样一种过程习惯上叫作基因的扩增。转化（ Transformation ）是指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达质粒载体DNA 分子的生命过程。转染（ Transfection）是指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体DNA 分子的生命过程。本质上，两者没有什么根本的差别。22、转化（染） 、包装转化（ Transformation ）是指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达质粒载体DNA 分子的生命过程。转染（ Transfection）是指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体DNA 分子的生命过程。本质上，两者没有什么根本的差别。23、目的基因表达的方法24、Cos 位点 P157 在噬菌体颗粒内，基因组DNA 呈线性，其两端的5 末端带有12 个碱基的互补单链（粘性末端）， 12 个碱基的序列为5-GGGCGGCGACCT-3 。这种由粘性末端结合形成的双链区段称为cos 位点（ cohesiveend site） 。25、与质粒载体相比，噬菌体载体特点P157（1）容量比质粒载体（10kb)大,达 10kb; （2）转染效率比质粒高2-3 个数量级；（3）DNA 分子较大，需切除非必要片段；（4）一般不适用于外源基因表达。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页，共 8 页