2022年2022年金葡菌操作程序 .pdf

食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 1 设备与 材料恒温水浴箱、恒温培养箱、电动振荡器、显微镜、均质器，天平。灭菌吸管（ 1ml、10ml） 、灭菌试管、灭菌平皿、灭菌广口瓶和三角烧瓶、灭菌华试管、载玻片、酒精灯、接种环。2 试剂与培养基灭菌生理盐水、胰酪胨大豆肉汤、7.5%NaCl 肉汤、血琼脂、巴尔德- 帕克（Baird-Parker ）琼脂、新鲜血浆、革兰染液、液体石蜡、吐温-80。3 检测依据GB/T4789.10-2008 食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验。4 检验程序检样25g(ml)+ 225ml 生理盐水增菌培养 7.5% 氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤 36 1 24h 血平板、 Baird-Parker平板 361 24h 涂片染色观察溶血血浆凝固酶试验报告5 操作步骤对每种产品应检验其三个批号的检样。5.1 检样处理5.1.1 以无菌操作从每一批号检品中称取检样25g（或 ml） ，并放于含有225ml 灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振荡或研磨，制成1:10 的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以800010000r/min 的速度处理 1min，制成 1:10 的均匀混悬液。5.1.2 疏水性检样的处理：无菌打开检样包装，取取检样25g（或 ml） ，加入乳钵中，先加20 ml 灭菌液体石蜡，研磨混匀，再加入25 ml 灭菌吐温 -80 充名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 1 页，共 3 页 - - - - - - - - - 分研磨乳化，在4044水浴中震荡混匀10min，再加入 185 ml 预温的灭菌生理盐水（在 4044水浴中预温），混匀，在 4044水浴中充分乳化制作成 1:10 的均匀混悬液。5.2 增菌培养吸取 5 ml 上述混悬液，接种于50ml 7.5% 氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤内，置 361培养 24 h。在肉汤中呈混浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有时液体澄清，菌量多时呈混浊生长。5.3 分离培养取增菌培养物， 划线转种血平板和Baird-Parker琼脂平板，361培养24 h ，挑取金黄色葡萄球菌可疑菌落进行鉴定。革兰氏染色和血浆凝固酶试验。血平板上菌落特征：呈金黄色，有时为白色，大而凸起、圆形、不透明、表面光滑，周围有透明溶血环。在 Baird-Parker琼脂平板上菌落特征：为圆形、光滑凸起、湿润、直径为23mm ，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。 用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明圈。 长期保存的冻干或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色要淡些，外观可能粗糙并干燥。5.4 鉴定5.4.1 形态染色取可疑菌落进行革兰染色，本菌为革兰阳性球菌，葡萄球状排列，无芽胞，无荚膜。5.4.2 血浆凝固酶试验金黄色葡萄球菌可产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白，产生凝固。凝固酶可分为两种， 一种是在细胞壁表面的结合凝固酶，使纤维蛋白附着于细菌的表面，产生凝固， 可用玻片法测定； 另一种是释放于培养基中的游离凝固酶，可用试管法测定。实际工作中通常采用试管法。吸取新配制兔血浆（或人血浆）0.5ml ，放入小试管中，再加入已培养24h的金黄色葡萄球菌肉汤培养物0.2ml 0.3ml ，振荡摇匀，放 361温箱或水浴中，每 30min 观察一次，观察6h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者） ，被认为阳性结果。 同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。6 结果报告综合菌落形态、菌体形态染色特点和血浆凝固酶试验结果判定菌种并作出报告。 注意事项 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 2 页，共 3 页 - - - - - - - - - 1 长期保存的冻干或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色要淡些，外观可能粗糙2 多数情况下血浆凝固酶试验的玻片法和试管法结果平行，偶有玻片法为阴性而试管法却为阳性，因此通常采用试管法证实。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 3 页，共 3 页 - - - - - - - - -