最新ITS菌种鉴定方-法.doc

Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.-author-dateITS菌种鉴定方-法利 用 ITS 进 行 菌 种 鉴 定 是 目 前 较 多 采 用 的 方 法利 用 ITS 进 行 菌 种 鉴 定 是 目 前 较 多 采 用 的 方 法 。 ITS 是 内 源 转 录 间 隔 区 ( Internally Transcribed Spacer)的英文缩写, 位于rRNA 编码基因18S,5. 8S和28S之间的小基因片段。其优 点有: 具有高拷贝数,整个序列的长度在600800 bp，利用rDNA通用引物能够很容易被扩增出来； 同时包含保守与变异序列, 能根据保守序列中的变异位点设计特殊引物进行特异性扩增比较， rRNA基因(rDNA)在微生物的鉴定应用中，具有检测微生物种水平的多态性特征。这些rDNA高度保守地分布在染色体的不同位置，在每个单倍染色体基因组中的拷贝数超过200个,这使得保守区域 能够很容易被扩增出来。每个重复的rDNA 序列的存在方式为由一前一后的18S rDNA 小亚基单元 (SSU) , 5.8S rDNA, 28S rDNA大亚基单元(LSU)组成,已设计出通用引物来扩增ITS序列分析相关 真菌种水平之间的差异。 本研究通过丝状真菌ITS保守序列的扩增, 同源序列的对比分析 ,结合传统鉴定方法,对从土壤中分离筛选的一株丝状真菌进行了分析鉴定,并对鉴定结果和方法进行了比 较分析。 种内变异还显示在rDNA基因间内转录间隔区和（分别为ITS和ITS）的片段大小上。 ITS区在核糖DNA中进化较快，可在同一属间甚至群体间发生变化。其中ITS区在种间变异性较高（22），种内变异性较低（3） 。选择的两对引物均以ITS区的序列为靶目标，其中引物（ITS1和ITS4）扩增的是ITS区、5.8SrDNA和ITS区的基因序列，可以鉴别出念珠菌属的3个菌种； 引物（ITS4和ITS86）扩增的是5.8S rDNA和28S rDNA之间的ITS区的保守顺序，可以鉴别出念珠菌属的7个菌种。因而笔者更推荐采用引物，它不仅有很强的通用性，能识别更多菌种，而且具有更高的属种特异性。1、通用引物： ITS1 5'-TCCG TAGG TGAA CCTG CGG一3ITS4 5'-TCCT CCGC TTAT TGAT ATGC一3通用引物 ITS4 5'-TCCT CCGC TTAT TGAT ATGC一3ITS86 5'-GTGA ATCA TCGA ATCT TTGA AC一3 -