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分子生物学复习题1、 染色体：是指在细胞分裂期出现的一种能被碱性染料猛烈染色，并具有确定形态, 构造特征的物体。 携带许多基因的别离单位。只有在细胞分裂中才可见的形态单位。2, 染色质：是指细胞周期间期细胞核内由DNA, 组蛋白, 非组蛋白和少量RNA组成的复合构造，因其易被碱性染料染色而得名。3, 核小体：染色质的根本构造亚基，由约200 bp的DNA和组蛋白八聚体所组成4, C值谬误：一个有机体的C值及它的编码实力缺乏相关性称为 C值冲突5, 半保存复制：由亲代DNA生成子代DNA时，每个新形成的子代DNA中，一条链来自6, 亲代DNA，而另一条链那么是新合成的，这种复制方式称半保存复制6, DNA重组技术又称基因工程，目的是将不同的DNA片段如某个基因或基因的一局部依据人们的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中及载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。7, 半不连续复制：DNA复制时其中一条子链的合成是连续的，而另一条子链的合成是不连续的，故称半不连续复制。8, 引发酶：此酶以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物Primer)。 实质是以DNA为模板的RNA聚合酶。9, 转坐子：存在及染色体DNA上可自主复制和位移的根本单位。10, 多顺反子：一种能作为两种或多种多肽链翻译模板的信使RNA，由DNA链上的邻近顺反子所界定。11, 基因：产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核甘酸序列。12, 启动子：指能被RNA聚合酶识别, 结合并启动基因转录的一段DNA序列。 13, 增加子：能强化转录起始的序列14, 全酶：含有表达其根底酶活力所必需的5个亚基的酶蛋白复合物，拥有因子。 即核心酶+因子15, 核心酶：仅含有表达其根底酶活力所必需亚基的酶蛋白复合物，没有因子。16, 核酶：是一类具有催化功能的RNA分子17, 三元复合物：开放复合物及最初的两个NTP相结合，并在这两个核苷酸之间形成磷酸二酯键后，转变成包括RNA聚合酶，DNA和新生的RNA的三元复合物。18, SD序列：mRNA中用于结合原核生物核糖体的序列。30S亚基通过其16SrRNADE 3'端及mRNA5端起始密码子上游碱基配对结合。这个富嘌呤区被命名为SD序列。19, 同工tRNA：代表同一种氨基酸的tRNA称为同工tRNA。20, 分子伴侣：它是细胞中一类能够识别并结合到不完全折叠或搭配的蛋白质上以扶植这些多肽正确折叠, 转运或防止它们聚集的蛋白质，其本身不参及终产物的形成。21, 信号肽：常指新合成多肽链中用于指导蛋白质跨膜转移的N-末端氨基酸序列有时不愿定在N端。22, 核定位序列：蛋白质中的一种常见的构造域，通常为一短的氨基酸序列，它能及入核载体相互作用，将蛋白质运进细胞核内。23, 操纵子：是基因表达的协调单位，由启动子, 操纵基因及其所限制的一组功能上相关的构造基因所组成。操纵基因受调整基因产物的限制。24, 弱化子：当操纵子被阻遏，RNA合成被终止时，起终止转录信号作用的那一段核苷酸被称为弱化子。25, 抚慰诱导物：假如某种物质能够促使细菌产生酶而本身又不被分解，这种物质被称为抚慰诱导物，如IPTG异丙基- D-硫代半乳糖苷。26, 葡萄糖效应代谢物阻遏效应：有葡萄糖存在时，不管诱导物存在及否，操纵子都没有转录活性，构造基因都不表达。27, 顺式作用元件：影响自身基因表达活性的非编码DNA序列。 28, 反式作用因子：能干脆或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上，参及调控靶基因转录效率的蛋白质。29, 基因家族：在基因组进化中，一个基因通过基因重复产生了两个或更多的拷贝，这些基因即构成一个基因家族，是具有显著相像性的一组基因，编码相像的蛋白质产物。30, 断裂基因：在一个构造基因中，编码某一蛋白质不同区域的各个外显子并不连续排列在一起，而是常常被长度不等的内含子所隔离，形成镶嵌排列的断裂方式。所以真核基因被称为断裂基因。1, 乳糖操纵子的调控模型。主要内容： Z, Y, A基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码 这个mRNA分子的启动子紧接着O区，而位于I及O之间的启动子区P，不能单独起动合成-半乳糖苷酶和透过酶的生理过程。 操纵基因是DNA上的一小段序列仅为26bp，是阻遏物的结合位点。当阻遏物及操纵基因结合时，lac mRNA的转录起始受到抑制。诱导物通过及阻遏物结合，变更它的三维构象，使之不能及操纵基因结合，从而激发lac mRNA的合成。当有诱导物存在时，操纵基因区没有被阻遏物占据，所以启动子能够顺当起始mRNA的合成。2, 比拟PCR扩增和细胞内DNA复制的异同。 PCR技术                                     DNA生物复制环境   体外复制， 加热，90摄氏度左右      体内，温顺的环境模板   DNA单链                             DNA单链原料   4种脱氧核糖核苷酸                 4种脱氧核糖核苷酸酶    主要是DNA聚合酶                    DNA解旋酶，DNA聚合酶， DNA连接酶等各种酶 引物   须要人工合成的引物                  自己合成引物成分步骤  变性-退火-延长                    解旋-起始-延长-完毕原那么   碱基互补配对原那么                   碱基互补配对原那么3, 细胞通过哪几种修复系统对DNA损伤进展修复？简述DNA错配修复的过程。DNA修复系统功能错配修复复原错配切除修复(碱基, 核甘酸切除突变的碱基和核甘酸片断重组修复复制后的修复，重新启动停滞的复制叉DNA干脆修复SOS系统修复嘧啶二体或甲基化DNADNA的修复，导致变异错配修复的过程：a, 发觉碱基错配；在水解ATP的作用下，b, MutS,MutL 及碱基错配位点的DNA双链结合；c, Muts-MutL在DNA双链上移动，发觉甲基化DNA后由MutH切开非甲基化的子链；d, 当错配碱基位于切口3'下游端时，在MutL-MutS, 解链酶, DNA外切酶或RecJ核酸酶的作用下，从错配碱基3'下游端开场切除单链DNA直到原切口，并在Pol 和SSB的作用下合成新的子链片段。假设错配碱基位于切口的5'上游端，那么在DNA外切酶或的作用下，从错配碱基5'上游端开场切除单链DNA直到原切口，再合成新的子链片段。4.图示简要说明真核生物启动子的构造。5.说明DNA甲基化对基因转录活性的影响机理。为什么说甲基化密度及启动子强度之间的平衡确定了该启动子是否具有转录活性可用图示说明？DNA甲基化导致某些区域DNA构象变更，从而影响了蛋白质及DNA的相互作用，抑制了转录因子及启动区DNA的结合效率。甲基的引入不利于模板及RNA聚合酶的结合，降低了转录活性。甲基化密度及启动子强度之间的平衡确定了该启动子是否具有转录活性。6, 举例说明蛋白质磷酸化如何影响基因表达。 以络氨酸受体蛋白激酶磷酸化导致细胞癌变为例说明： 络氨酸受体蛋白激酶及表皮生长因子(EGF)相结合后，刺激了该受体蛋白的激酶活性，引发一系列生理反响。原癌蛋白ErbB虽然没有正常络氨酸受体蛋白激酶的胞外构造域，其胞内构造域却具有蛋白激酶活性，刺激细胞许久分裂，诱发癌变。以cAMP介导的蛋白质磷酸化为例说明许多转录因子都可以通过cAMP介导的蛋白质磷酸化过程而被激活这类基因5区有一个或数个cAMP应答元件，根本序列为TGACGTCA膜上受体及配体结合引起受体构象变更，并及G结合，激活及膜相关的腺苷酸环化酶，导致胞内cAMP水平上升，活化A激酶，释放催化亚基入核内，实施底物磷酸化。被磷酸化的底物可作为转录激活因子诱发基因转录。7.如何克隆一个新基因cDNA的中间片段？在cDNA序列根底上克隆5或3端缺失序列的技术。依据序列设计基因片段内部特异引物，由该片段向外侧进展PCR扩增得到目的序列。此技术为RACE技术。步骤：1. 在反转录酶的作用下，以基因片段内部特异性引物GSP1启始cDNA第一条链合成。2. RNase降解模板链mRNA，纯化第一链。3. 用末端转移酶在cDNA链3端参加连续的dCTP，形成oligodc尾巴。4. 以连有oligo dC 的锚定引物和基因片段内部特异引物GSP2进展nest PCR扩增，得到目的基因5'端片段并检测。8.肽链延长由许多循环组成，每加一个氨基酸就是一个循环，每个循环包括哪些步骤？每个循环包括：AA-tRNA及核糖体结合, 肽键的生成 和 移位。1.AA-tRNA及核糖体结合须要消耗GTP，并需EF-Tu, EF-Ts两种延长因子2.肽键的生成是由转肽酶/肽基转移酶催化3.移位，核糖体向mRNA3端方向移动一个密码子。4.须要消耗GTP，并需EF-G延长因子9, 比拟原核生物和真核生物mRNA的特点。原核生物mRNA的特征：1半衰期短 2多以多顺反子的形式存在 35 端无“帽子构造， 3 端没有或只有较短的polyA 构造。4原核生物常以AUG有时GUG，甚至UUG作为起始密码子，而真核生物几乎恒久以AUG作为起始密码子。真核生物mRNA的特征：1, 5 端存在“帽子构造2, 多数mRNA 3 端具有polyA 尾巴组蛋白除外3, 以单顺反子的形式存在10, 真核生物的原始转录产物须要经过哪些加工才能成为成熟的mRNA？真核生物的原始转录产物须要经过的加工过程有：1, 在5端加帽。5端的一个核苷酸总是7-甲基鸟嘌呤核苷三磷酸m7Gppp。mRNA5端的这种构造称为帽子构造cap。2, 3端加尾，多聚腺苷酸尾巴提高了mRNA在细胞质中的稳定性，由polyA聚合酶催化。3, RNA的剪接。参及RNA剪接的物质有snRNA核内小分子RNA, snRNP及snRNA结合的核蛋白4, RNA的编辑11, 真核生物和原核生物在翻译的起始过程有哪些区分？真核生物：起始密码子AUG 所编码的氨基酸是Met，起始AA-tRNA为Met-tRNAMet。原核生物：起始密码子AUG 所编码的氨基酸并不是 甲硫氨酸本身, 而是甲酰甲硫氨酸fMet，起始AA-tRNA为fMet-tRNAfMet12.SNP技术是指？SNP技术：是单核苷酸多态性，指基因组DNA序列中由于单个核苷酸A，T，C和G的突变而引起的多态性。一个SNP表示在基因组某个位点上一个核苷酸的变更，这种变更可能是转换，也可能是颠换。SNP技术即SNP检测技术，因为只有进展了DNA序列分析才能确认所发觉的SNP，所以目前国际上最常见的照旧是通过DNA测序法获得新的SNP。基因分型是其中最常见的，它是指利用数据库中已有的SNP进展特定人群的序列和发生频率的探讨，主要包括基因芯片技术, Taqman技术, 分子信标技术和焦磷酸测序法等。13, 基因敲除技术的根本原理。根本原理：基因敲除又称基因打靶，该技术通过外源DNA及染色体DNA之间的同源重组，进展精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强, 染色体DNA可及目的片段共同稳定遗传等特点。14.RNAi技术的根本原理。根本原理：RNAi技术利用双链小RNA高效, 特异性降解细胞内同源mRNA从而阻断靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。15、 cDNA的合成答：cDNA 的合成包括第一链和第二链的合成v 第一链的合成是以mRNA为模板，反转录成cDNA，由反转录酶催化，该酶合成是须要引物引导，常用的引物是Oligo dT。 Oligo dT 引物一般包含1220个脱氧胸腺嘧啶核苷酸，后面加一个连接引物以便于克隆构建。v 第二链的合成是以第一链为模板，由DNA聚合酶催化。常用RNaseH 切割mRNACDNA杂合链中的mRNA序列所产生的小片段为引物合成第二条cDNA的片段，再通过DNA连接酶的作用连成完整的DNA链。 复习提纲CHAP 11、 证明DNA是遗传物质的两个关键性试验是什么？肺炎双球菌试验和噬菌体侵染大肠杆菌试验。2、 什么是DNA重组技术？DNA重组技术又称基因工程，目的是将不同的DNA片段如某个基因或基因的一局部依据人们的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中及载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。CHAP 21.染色体, 染色质, 核小体, C值谬误, 半保存复制, 半不连续复制, 引发酶, 转坐子, 多顺反子染色体是细胞在有丝分裂时遗传物质存在的特定形式，是间期细胞染色质构造严密包装的结果。染色质是一种纤维状构造，叫做染色质丝，它是由最根本的单位核小体成串排列而成的。核小体：用于包装染色质的构造单位，是由DNA链缠绕一个组蛋白核构成的。C值反常现象: C值是一种生物的单倍体基因组DNA的总量。 真核细胞基因组的最大特点是它含有大量的重复序列，而且功能DNA序列大多被不编码蛋白质的非功能DNA所隔开，这就是著名的“C值反常现象。 半保存复制：由亲代DNA生成子代DNA时，每个新形成的子代DNA中，一条链来自亲代DNA，而另一条链那么是新合成的，这种复制方式称半保存复制。半不连续复制：DNA复制时其中一条子链的合成是连续的，而另一条子链的合成是不连续的，故称半不连续复制转座子：存在及染色体DNA上可自主复制和位移的根本单位。引发酶：是依靠于DNA的RNA聚合酶，其功能是在DNA复制过程中合成RNA引物。多顺反子mRNA: 一种能作为两种或者多种多肽链翻译模板的信使RNA，由DNA链上的邻近顺反子所界定。1、 比拟原核生物和真核生物基因组DNA的特点。原核生物基因组构造特点：基因组很小，大多只有一条染色体 构造简炼存在转录单元(trnascriptional operon) 多顺反子(polycistron)真核生物基因组构造特点：真核基因组构造浩大 3×109bp, 染色质, 核膜单顺反子基因不连续性 断裂基因interrupted gene, 内含子(intron), 外显子(exon)非编码区较多 多于编码序列(9:1) 含有大量重复序列2.原核, 真核生物DNA聚合酶的特性。原核生物中的DNA聚合酶(大肠杆菌性质 聚合酶聚合酶聚合酶3' 5 '外切活性+5' 3 '外切活性+-5' 3 '聚合活性+ 中+ 很低+ 很高新生链合成-+功能主要是对DNA损伤的修复；以及在DNA复制时切除RNA引物并填补其留下的空隙。修复紫外光引起的DNA损伤DNA 复制的主要聚合酶，还具有3-5外切酶的校对功能，提高DNA复制的保真性 真核生物中的DNA聚合酶 定位 细胞核 细胞核线粒体细胞核细胞核3-5外切酶活性 -+功能引物合成修复作用线粒体DNA的复制核DNA的复制RNA引物去掉后把缺口补全2.细胞通过哪几种修复系统对DNA损伤进展修复？简述DNA错配修复的过程。DNA修复系统功能错配修复复原错配碱基切除修复切除突变的碱基核苷酸切除修复修复被破坏的DNADNA干脆修复修复嘧啶二体或甲基化DNADNA错配修复的过程Dam甲基化酶使母链位于5GATC序列中腺甘酸甲基化甲基化紧随在DNA复制之后进展依据复制叉上DNA甲基化程度，切除尚未甲基化的子链上的错配碱基CHAP 31、 基因, 启动子, 增加子, 全酶, 核心酶, 核酶, 三元复合物, SD序列基因，分子生物学定义：产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核甘酸序列。启动子：指能被RNA聚合酶识别, 结合并启动基因转录的一段DNA序列。 核心酶：大肠杆菌RNA聚合酶由2个亚基, 一个亚基, 一个亚基和一个w亚基组成核心酶全酶=核心酶+ 因子增加子：能提高转录起始效率的序列被称为增加子或者强化子三元复合物：开放复合物及最初的两个NTP相结合，并在这两个核苷酸之间形成磷酸二酯键后，转变成包括RNA聚合酶，DNA和新生的RNA的三元复合物SD序列：mRNA中用于结合原核生物核糖体的序列2. 比拟原核生物和真核生物mRNA的特点。大肠杆菌RNA聚合酶的组成分析亚基基因相对分子量亚基数组分功能rpoA365002核心酶核心酶组装，启动子识别rpoB1510001核心酶和'共同形成RNA合成的活性中心'rpoC1550001核心酶 ？110001核心酶？rpoD700001因子存在多种因子，用于识别不同的启动子真核生物RNA聚合酶酶位置转录产物相对活性对-鹅膏蕈碱的敏感性RNA聚合酶核仁rRNA50-70%不敏感RNA聚合酶核质hnRNA20-40%敏感RNA聚合酶核质tRNA约10%存在物种特异性2.真核生物的原始转录产物须要经过哪些加工才能成为成熟的mRNA？真核生物的原始转录产物须要经过的加工过程有：1, 在5端加帽。5端的一个核苷酸总是7-甲基鸟核苷三磷酸m7Gppp。mRNA5端的这种构造称为帽子cap。2, 3端加尾，多聚腺苷酸尾巴提高了mRNA在细胞质中的稳定性3, RNA的剪接。参及RNA剪接的物质有snRNA核内小分子RNA , snRNP及snRNA结合的核蛋白4, RNA的编辑2.原核启动子和真核启动子的构成一, 原核生物启动子构造有TATA区：酶的严密结合位点富含AT碱基，利于双链翻开 TTGACA区：供应了RNA聚合酶全酶识别的信号 二, 真核生物启动子的构造核心启动子 TATA 常在-25bp左右，相当于原核的-10序列T85A97T93A85A63A83A50核心启动子定义：指保证RNA聚合酶转录正常起始所必需的, 最少的DNA序列，包括转录起始位点及转录起始位点上游TATA区作用：选择正确的转录起始位点，保证精确起始 上游启动子元件，包括CAAT盒CCAAT和GC盒GGGCGG等作用：限制转录起始频率。CHAP41、 遗传密码有哪些特性？理解驾驭其摇摆性特性：连续性，简并性，通用性及特殊性，摇摆性摇摆性：转运氨基酸的tRNA上的反密码子须要通过碱基互补及mRNA上的遗传密码子反向配对结合，在密码子及反密码子的配对中，前两对严格遵守碱基配对原那么，第三对碱基有确定的自由度，可以“摇摆，这种现象称为密码子的摇摆性。 2. tRNA中起作用的重要两个臂是什么臂？受体臂和密码子臂。tRNA有两个关键部位： 3端CCA：承受氨基酸，形成氨酰-tRNA。 及mRNA结合部位反密码子部位2.肽链延长由许多循环组成，每加一个氨基酸就是一个循环，每个循环包括哪些步骤？£每个循环包括：AA-tRNA及核糖体结合, 肽键的生成 和 移位。«AA-tRNA及核糖体结合须要消耗GTP，并需EF-Tu, EF-Ts两种延长因子«肽键的生成是由转肽酶/肽基转移酶催化«移位，核糖体向mRNA3端方向移动一个密码子。须要消耗GTP，并需EF-G延长因子2.真核生物和原核生物在翻译的起始过程有哪些区分？真核生物：起始密码子AUG 所编码的氨基酸是Met，起始AA-tRNA为Met-tRNAMet。原核生物：起始密码子AUG 所编码的氨基酸并不是 甲硫氨酸本身, 而是甲酰甲硫氨酸fMet，起始AA-tRNA为fMet-tRNAfMettRNA, 分子伴侣, 信号肽, 核定位序列同工tRNA：代表同一种氨基酸的tRNA称为同工tRNA。分子伴侣：它是细胞中一类能够识别并结合到不完全折叠或搭配的蛋白质上以扶植这些多肽正确折叠, 转运或防止它们聚集的蛋白质，其本身不参及终产物的形成。信号肽：常指新合成多肽链中用于指导蛋白质跨膜转移的N-末端氨基酸序列有时不愿定在N端。核定位序列：蛋白质中的一种常见的构造域，通常为一短的氨基酸序列，它能及入核载体相互作用，将蛋白质运进细胞核内。CHAP 51、 比拟PCR扩增和细胞内DNA复制的异同。 PCR技术                                     DNA生物复制环境   体外复制， 加热，90摄氏度左右      体内，温顺的环境模板   DNA单链                             DNA单链原料   4种脱氧核糖核苷酸                 4种脱氧核糖核苷酸酶    主要是DNA聚合酶                    DNA解旋酶，DNA聚合酶， DNA连接酶等各种酶 引物   须要人工合成的引物                  自己合成引物成分步骤  变性-退火-延长                    解旋-起始-延长-完毕原那么   碱基互补配对原那么                   碱基互补配对原那么2.设计一个典型的PCR扩增程序和PCR反响体系。在一个典型的PCR反响体系中需参加：适宜的缓冲液, 微量的模板DNA, 4×dNTPs, 耐热性多聚酶, Mg2+和两个合成的DNA引物。PCR扩增，模板DNa 94变性1min，引物及模板4060退火1min，72延长2min。在首次循环前模板预变性35min；在末次循环后，样品仍需接着延长35min以上，确保扩增的DNA为双链DNA。其程序步骤为：94预变性3min； 94变性30s； 58退火30s； 72延长1min30s 进展30cycle； 72接着延长4min； 4pause2、 在基因操作实践中检测核酸相对分子量的最常用方法是什么？其原理是什么？检测核酸相对分子量的最常用方法：核酸凝胶电泳, 分光广度法其原理是：DNA或RNA链上碱基的苯环构造在紫光区具有较强吸取，其吸取峰在260nm处。波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅及总含量有关，也随构型而有差异。3.如何克隆一个新基因cDNA的中间片段？在cDNA序列根底上克隆5或3端缺失序列的技术。依据序列设计基因片段内部特异引物，由该片段向外侧进展PCR扩增得到目的序列。此技术为RACE技术。步骤：5. 在反转录酶的作用下，以基因片段内部特异性引物GSP1启始cDNA第一条链合成。6. RNase降解模板链mRNA，纯化第一链。7. 用末端转移酶在cDNA链3端参加连续的dCTP，形成oligodc尾巴。8. 以连有oligo dC 的锚定引物和基因片段内部特异引物GSP2进展nest PCR扩增，得到目的基因5'端片段并检测。3.SNP技术SNP技术：是单核苷酸多态性，指基因组DNA序列中由于单个核苷酸A，T，C和G的突变而引起的多态性。CHAP 61、 基因敲除技术的根本原理。根本原理：基因敲除又称基因打靶，该技术通过外源DNA及染色体DNA之间的同源重组，进展精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强, 染色体DNA可及目的片段共同稳定遗传等特点。2.RNAi技术的根本原理。根本原理：RNAi技术利用双链小RNA高效, 特异性降解细胞内同源mRNA从而阻断靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。CHAP 71、 操纵子, 弱化子, 葡萄糖效应代谢物阻遏效应, 抚慰性诱导物操纵子：是基因表达的协调单位，由启动子, 操纵基因及其所限制的一组功能上相关的构造基因所组成。操纵基因受调整基因产物的限制。弱化子：当操纵子被阻遏，RNA合成被终止时，起终止转录信号作用的那一段核苷酸被称为弱化子。抚慰诱导物：假如某种物质能够促使细菌产生酶而本身又不被分解，这种物质被称为抚慰诱导物，如IPTG异丙基- D-硫代半乳糖苷。葡萄糖效应代谢物阻遏效应：有葡萄糖存在时，不管诱导物存在及否，操纵子都没有转录活性，构造基因都不表达。2.乳糖操纵子的调控模型。主要内容： Z, Y, A基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码 这个mRNA分子的启动子紧接着O区，而位于I及O之间的启动子区P，不能单独起动合成-半乳糖苷酶和透过酶的生理过程。 操纵基因是DNA上的一小段序列仅为26bp，是阻遏物的结合位点。当阻遏物及操纵基因结合时，lac mRNA的转录起始受到抑制。诱导物通过及阻遏物结合，变更它的三维构象，使之不能及操纵基因结合，从而激发lac mRNA的合成。当有诱导物存在时，操纵基因区没有被阻遏物占据，所以启动子能够顺当起始mRNA的合成。2.色氨酸操纵子的负控阻遏系统和弱化调控机制。负控阻遏系统:色氨酸操纵子负责色氨酸的生物合成，当培育基中有足够的色氨酸时，这个操纵子自动关闭，缺乏色氨酸时操纵子被翻开，trp基因表达，色氨酸或及其代谢有关的某种物质在阻遏过程而不是诱导过程中起作用。弱化调控机制: 细菌通过弱化作用弥补阻遏作用的缺乏，因为阻遏作用只能使转录不起始，对于已经起始的转录，只能通过弱化作用使之中途停下来。阻遏作用的信号是细胞内色氨酸的多少；弱化作用的信号那么是细胞内载有色氨酸的tRNA的多少。它通过前导肽的翻译来限制转录的进展，在细菌细胞内这两种作用相辅相成，表达着生物体内周密的调控作用。2.为什么半乳糖操纵子须要双启动子？双启动子的生理功能：这及半乳糖在细胞代谢中的双重功能有关。半乳糖不仅作为唯一碳源供细胞生长，而且及之相关的物质尿苷二磷酸半乳糖是大肠杆菌细胞壁合成的前体。生长过程中细胞必需随时合成差向异构酶，以保证尿苷二磷酸的供应。在没有外源半乳糖的状况下，细胞通过半乳糖差向异构酶的作用由UDP-葡萄糖合成UDPgal。因为合成细胞壁过程中对异构酶的须要量很小，本底水平的永久型合成就能够满足生理须要。CHAP 81、 顺式作用元件, 反式作用因子, 基因家簇, 断裂基因顺式作用元件：影响自身基因表达活性的非编码DNA序列。 反式作用因子：能干脆或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上，参及调控靶基因转录效率的蛋白质。基因家族：在基因组进化中，一个基因通过基因重复产生了两个或更多的拷贝，这些基因即构成一个基因家族，是具有显著相像性的一组基因，编码相像的蛋白质产物。断裂基因：在一个构造基因中，编码某一蛋白质不同区域的各个外显子并不连续排列在一起，而是常常被长度不等的内含子所隔离，形成镶嵌排列的断裂方式。所以真核基因被称为断裂基因。2.图示简要说明真核生物启动子的构造。DNA甲基化对基因转录活性的影响机理。为什么说甲基化密度及启动子强度之间的平衡确定了该启动子是否具有转录活性可用图示说明？DNA甲基化导致某些区域DNA构象变更，从而影响了蛋白质及DNA的相互作用，抑制了转录因子及启动区DNA的结合效率。甲基的引入不利于模板及RNA聚合酶的结合，降低了转录活性 2、 举例说明蛋白质磷酸化如何影响基因表达。络氨酸受体蛋白激酶磷酸化导致细胞癌变：络氨酸受体蛋白激酶及表皮生长因子(EGF)相结合后，刺激了该受体蛋白的激酶活性，引发一系列生理反响。原癌蛋白ErbB虽然没有正常络氨酸受体蛋白激酶的胞外构造域，其胞内构造域却具有蛋白激酶活性，刺激细胞许久分裂，诱发癌变。3.cDNA的合成包括第一链和第二链的合成：第一链cDNA的合成是以mRNA为模板，反转录成cDNA，由反转录酶催化，该酶合成DNA时须要引物引导，常用的引物是oligo dT 。oligo dT引物一般包含1220个脱氧胸腺嘧啶核苷酸，后面加一个连接引物以便于克隆构建。第二链的合成是以第一链为模板，由DNA聚合酶催化。常用RNaseH 切割mRNACDNA杂合链中的mRNA序列所产生的小片段为引物合成第二条cDNA的片段，再通过DNA连接酶的作用连成完整的DNA链。