分子生物学试题及答案[2].docx

分子生物学试题及答案一, 名词说明1及：是由通过反转录酶合成的双链；是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形。2标准折叠单位：蛋白质二级构造单元螺旋及折叠通过各种连接多肽可以组成特别几何排列的构造块，此种确定的折叠类型通常称为超二级构造。几乎全部的三级构造都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。3：环腺苷酸受体蛋白 ，及结合后所形成的复合物称激活蛋白 4回文序列：片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。5：互补干扰或称反义，及序列互补，可抑制的翻译。6核酶：具有催化活性的，在的剪接加工过程中起到自我催化的作用。7模体：蛋白质分子空间构造中存在着某些立体形态和拓扑构造颇为类似的局部区域8信号肽：在蛋白质合成过程中N端有1536个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。9弱化子：在操纵区及构造基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。10魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反响，停顿全部基因的表达。产生这一应急反响的信号是鸟苷四磷酸()和鸟苷五磷酸。及的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑。11上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调整作用的序列，-10区的, -35区的及增加子，弱化子等。12探针：是带有标记的一段序列，用以检测未知序列, 筛选目的基因等方面广泛应用。13序列：是核糖体及结合序列，对翻译起到调控作用。14单克隆抗体：只针对单一抗原确定簇起作用的抗体。15考斯质粒：是经过人工构建的一种外源载体，保存噬菌体两端的区，及质粒连接构成。16蓝-白斑筛选：含基因编码半乳糖苷酶该酶能分解生色底物(5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源插入后，基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。17顺式作用元件：在中一段特别的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。18酶：聚合酶I大片段，只是从聚合酶I全酶中去除了5 3外切酶活性19锚定：用于扩增一端序列的目的。在未知序列一端加上一段多聚的尾巴，然后分别用多聚和的序列作为引物进展扩增。20融合蛋白：真核蛋白的基因及外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白及外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。二, 填 空1 的物理图谱是分子的限制性内切酶酶解 片段的排列依次。2 酶的剪切分为自体催化 , 异体催化 两种类型。3原核生物中有三种起始因子分别是1, 2 和3 。4蛋白质的跨膜须要 信号肽 的引导，蛋白伴侣的作用是协助肽链折叠成自然构象的蛋白质。5启动子中的元件通常可以分为两种：核心启动子元件 和上游启动子元件 。6分子生物学的探讨内容主要包含构造分子生物学 , 基因表达及调控 , 重组技术 三局部。7证明是遗传物质的两个关键性试验是肺炎球菌感染小鼠 , T2噬菌体感染大肠杆菌 这两个试验中主要的论点证据是：生物体汲取的外源变更了其遗传潜能 。8及之间的差异主要有两点： 在转变为的过程中经过剪接，, 的5末端被加上一个m7帽子，在3末端多了一个多聚腺苷酸()尾巴。9蛋白质多亚基形式的优点是亚基对的利用来说是一种经济的方法 , 可以削减蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响, 活性能够特别有效和快速地被翻开和被关闭 。10蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括成核 , 构造充溢, 最终重排。 11半乳糖对细菌有双重作用；一方面可以作为碳源供细胞生长 ；另一方面它又是细胞壁的成分 。所以须要一个不依靠于的启动子S2进展本底水平的永久型合成；同时须要一个依靠于的启动子S1对高水平合成进展调整。有G时转录从 S2 开场，无G时转录从 S1 开场。12重组技术也称为基因克隆或分子克隆 。最终目的是把一个生物体中的遗传信息转入另一个生物体。典型的重组试验通常包含以下几个步骤：提取供体生物的目的基因或称外源基因，酶接连接到另一分子上克隆载体，形成一个新的重组分子。将这个重组分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。对那些汲取了重组的受体细胞进展筛选和鉴定。对含有重组的细胞进展大量培育，检测外援基因是否表达。13, 质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格限制的称为严紧型质粒 ，不受宿主细胞蛋白质合成的严格限制称为 松弛型质粒 。14的反响体系要具有以下条件：a, 被别离的目的基因两条链各一端序列相互补的 引物约20个碱基左右。b, 具有热稳定性的酶如：聚合酶。c, d, 作为模板的目的序列15的根本反响过程包括：变性, 退火, 延长 三个阶段。16, 转基因动物的根本过程通常包括：将克隆的外源基因导入到一个受精卵或胚胎干细胞的细胞核中；接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性的子宫；完成胚胎发育，生长为后代并带有外源基因；利用这些能产生外源蛋白的动物作为种畜，培育新的纯合系。17杂交瘤细胞系的产生是由脾B细胞及骨髓瘤 细胞杂交产生的，由于脾细胞可以利用次黄嘌呤， 骨细胞 供应细胞分裂功能，所以能在培育基中生长。18随着探讨的深化第一代抗体称为多克隆抗体, 第二代单克隆抗体, 第三代基因工程抗体 。19目前对昆虫病毒的基因工程改造主要集中于杆状病毒，表现在引入外源毒蛋白基因 ； 扰乱昆虫正常生活周期的基因 ； 对病毒基因进展修饰 。20哺乳类聚合酶启动子中常见的元件, , 所对应的反式作用蛋白因子分别是 , 1 和 1 。21聚合酶的根本转录因子有, , , , 他们的结合依次是： D, A, B, E 。其中的功能是及盒结合 。22及结合的转录因子大多以二聚体形式起作用，转录因子及结合的功能域常见有以下几种 螺旋-转角-螺旋 , 锌指模体 , 碱性-亮氨酸拉链模体 。23限制性内切酶的切割方式有三种类型分别是在对称轴5' 侧切割产生5' 粘端 , 在对称轴3' 侧切割产生3' 粘端在对称轴处切割产生平段。24质粒具有三种不同的构型分别是： 构型 , 构型 , L构型 。在电泳中最前面的是 构型 。25外源基因表达系统，主要有大肠杆菌 , 酵母, 昆虫 和 哺乳类细胞表 。26转基因动物常用的方法有：逆转录病毒感染法, 显微注射法, 胚胎干细胞法 。三, 简 答1 分别说出5种以上的功能？转运 转运氨基酸 核蛋白体 核蛋白体组成成 信使 蛋白质合成模板 不均一核 成熟的前体 小核 参及的剪接小胞浆 7 蛋白质内质网定位合成的信号识别体的组成成分反义 对基因的表达起调整作用核 酶 有酶活性的2原核生物及真核生物启动子的主要差异？原核生物 起始位点-35 -10真核生物增加子 5起始位点 -110 -70 -253对自然质粒的人工构建主要表现在哪些方面？自然质粒往往存在着缺陷，因而不适合用作基因工程的载体，必需对之进展改造构建：a, 参与相宜的选择标记基因，如两个以上，易于用作选择,通常是抗生素基因。b, 增加或削减相宜的酶切位点，便于重组。 c, 缩短长度，切去不必要的片段，提高导入效率，增加装载量。d, 变更复制子，变严紧为松弛，变少拷贝为多拷贝。e, 依据基因工程的特别要求加装特别的基因元件 4举例说明差示筛选组织特异的方法？制备两种细胞群体，目的基因在其中一种细胞中表达或高表达，在另一种细胞中不表达或低表达，然后通过杂交比照找到目的基因。 例如：在肿瘤发生和开展过程中，肿瘤细胞会呈现及正常细胞表达水平不同的，因此，可以通过差示杂交筛选出及肿瘤相关的基因。也可利用诱导的方法，筛选出诱导表达的基因。 5杂交瘤细胞系的产生及筛选？脾B细胞+骨髓瘤细胞，加聚乙二醇促进细胞融合，培育基中培育内含次黄嘌呤, 氨基蝶呤, T生长出来的脾骨髓瘤融合细胞接着扩大培育。 细胞融合物中包含：脾-脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培育。骨-骨融合细胞：不能利用次黄嘌呤，但可通过第二途 径利用叶酸复原酶合成嘌呤。氨基蝶呤对叶酸复原酶有抑制作用，因此不能生长。骨-脾融合细胞：在中能生长，脾细胞可以利用次黄嘌呤，骨细胞供应细胞分裂功能。 6, 利用双脱氧末端终止法法测定一级构造的原理及方法？原理是采纳核苷酸链终止剂2，3，-双脱氧核苷酸终止的延长。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂键所须要的3，一旦参入到链中，此链就不能进一步延长。依据碱基配对原那么，每当聚合酶须要参入到正常延长的链中时，就有两种可能性，一是参入,结果导致脱氧核苷酸链延长的终止；二是参入,使链仍可接着延长，直至参入下一个。依据这一方法，就可得到一组以结尾的长短不一的片段。 方法是分成四组分别为, , , 反响后，聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出序列。 7, 激活蛋白对转录的正调控作用？环腺苷酸受体蛋白 ，及结合后所形成的复合物称激活蛋白 。当大肠杆菌生长在缺乏葡萄糖的培育基中时，合成量增加，具有激活乳糖等启动子的功能。一些依靠于的启动子缺乏一般启动子所具有的典型的-35区序列特征。因此聚合酶难以及其结合。 的存在功能：能显著提高酶及启动子结合常数。主要表现以下二方面：通过变更启动子的构象以及及酶的相互作用扶植酶分子正确定向,以便及-10区结合，起到取代-35区功能的作用。还能抑制聚合酶及中其它位点的结合，从而提高及其特定启动子结合的概率。8, 典型的重组试验通常包括哪些步骤？a, 提取供体生物的目的基因或称外源基因，酶接连接到另一分子上克隆载体，形成一个新的重组分子。 b, 将这个重组分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。 c, 对那些汲取了重组的受体细胞进展筛选和鉴定。 d, 对含有重组的细胞进展大量培育，检测外援基因是否表达。 9, 基因文库的构建对重组子的筛选举出3种方法并简述过程。抗生素抗性筛选, 抗性的插入失活, 兰-白斑筛选 或筛选, 差式筛选, 探针 多数克隆载体均带有抗生素抗性基因抗氨苄青霉素, 四环素。当质粒转入大肠杆菌中后，该菌便获得抗性，没有转入的不具有抗性。但不能区分是否已重组。 在含有两个抗性基因的载体中，假如外源片段插入其中一个基因并导致该基因失活，就可用两个分别含不同药物的平板比照筛选阳性重组子。 如质粒含基因编码半乳糖苷酶该酶能分解生色底物(5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源插入后，基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。 10, 说明通过胚胎干细胞获得转基因动物的根本过程？胚胎干细胞 ：是胚胎发育期的胚细胞，可以人工培育增殖并具有分化成其它类型细胞的功能。细胞的培育：别离胚泡的内层细胞团进展培育。在无饲养层中培育时会分化为肌细胞, N细胞等多种功能细胞，在含有成纤维细胞中培育时将保持分化功能。 可以对进展基因操作，不影响它的分化功能可以定点整合，解决了随机整合的问题。向胚胎干细胞导入外源基因，然后植入到待孕雌鼠子宫，发育成幼鼠，杂交获得纯合鼠。