知识点+练习-微生物的实验室培养.docx

微生物的试验室培育(5年15考)(2013新课标全国卷, 四川理综, 江苏卷，北京卷, 浙江, 山东，天津)一, 培育基1概念：依据微生物对养分物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的养分基质2养分构成3培育基的种类及用途划分标准培育基的种类特点用途物理性质液体培育基不加凝固剂工业生产半固体培育基加凝固剂，如琼脂视察微生物的运动, 鉴定固体培育基微生物的分别与鉴定, 活菌计数, 菌种保藏化学成分自然培育基成分不明确的自然物质工业生产合成培育基培育基成分明确分类, 鉴定用途选择培育基培育基中加入某种化学物质，以抑制不须要的微生物的生长，促进所须要的微生物的生长培育, 分别出特定微生物(如在培育酵母菌与霉菌时，可在培育基中加入青霉素；在培育金黄色葡萄球菌时，可在培育基中加入高浓度的食盐等)鉴别培育基依据微生物的代谢特点，在培育基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如可用伊红美蓝培育基检测饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)特别提示 自养微生物与异养微生物所需的养分物质不同：自养微生物所需的碳源, 氮源来自含碳, 含氮的无机物，而异养微生物须要的碳源, 氮源来自含碳, 含氮的有机物，因此可依据培育基中养分物质推断微生物的代谢类型。含氮无机物不但能给自养微生物供应氮源，也能作为能源物质，供应能量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。二, 无菌技术1消毒2灭菌3消毒与灭菌比较比较理化因素的作用强度歼灭微生物的数量芽孢与孢子能否被歼灭消毒较为温与部分生活状态的微生物不能灭菌猛烈全部微生物能三, 微生物的纯化培育及菌种的保藏1原理:在培育基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。2制备固体培育基的流程3纯化大肠杆菌的方法常用的微生物接种方法有平板划线法与稀释涂布平板法。(1) 平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培育基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培育基的表面。(如下图示) (2)稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的表面，进行培育。( 如下图所示)系列稀释操作(如下图所示) 涂布平板操作(如下图所示) (3)两种纯化细菌的方法的比较项目优点缺点适用范围平板划线法可以视察菌落特征，对混合菌进行分别不能计数适用于好氧菌稀释涂布平板法可以计数，可以视察菌落特征吸取量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，简洁扩散适用于厌氧菌与兼性厌氧菌4.培育：接种后的培育皿放入恒温箱内培育5菌种保藏 (1)临时保藏(2)长期保存法：甘油管藏法，放在20_下保存特别提示 (1)配制牛肉膏蛋白胨固体培育基的留意事项倒平板的适宜温度是50 左右，温度过高会烫手，过低培育基又会凝固。平板需倒置，这样既可使培育基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培育基，造成污染。(2)平板划线操作的留意事项第一次划线及每次划线之前都须要灼烧接种环。灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。划线时最终一区不要与第一区相连。划线用力大小要适当，防止用力过大将培育基划破。微生物培育与分别的考查1(·江苏)某探讨小组从有机废水中分别微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()。A培育基分装到培育皿后进行灭菌B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C接种后的培育皿须放在光照培育箱中培育D培育过程中每隔一周视察一次解析本题考查微生物的分别与培育过程中的操作要求与培育条件等相关学问，意在考查考生的学问运用实力与试验处理实力。培育微生物的过程中应先灭菌再倒平板，A错误；每一次划线前都要进行接种环的灼烧灭菌，B正确；接种后的培育皿应在恒温培育箱中进行培育，光照会影响温度等条件；培育过程中视察间隔的时间一般不超过24 h。答案B微生物试验室培育的拓展应用2(·新课标全国理综)临床运用抗生素前，有时须要做细菌耐药试验。试验时，首先要从病人身上获得少量样本，然后依据确定的试验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：(1)为了从样本中获得致病菌单菌落，可用_法或_法将样本接种于固体培育基表面，经过选择培育, 鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释，用_法接种于固体培育基表面，在37 培育箱中培育24 h，使其匀整生长，布满平板。(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A, B, C, D四种抗生素的滤纸片匀整置于该平板上的不同位置，培育一段时间后，含A的滤纸片四周出现透亮圈，说明该致病菌对抗生素A_；含B的滤纸片四周没有出现透亮圈，说明该致病菌对抗生素B_；含C的滤纸片四周的透亮圈比含A的小，说明_；含D的滤纸片四周的透亮圈也比含A的小，且透亮圈中出现了一个菌落，在解除杂菌污染的状况下，此菌落很可能是抗生素D的_。(4)依据上述试验结果，为达到抗菌目的，最好选用抗生素_。解析(1)在微生物的培育过程中，常用来分别微生物的方法是稀释涂布平板法或平板划线法。(2)为了使微生物在培育基上能够匀整分布，一般用稀释涂布平板法将微生物接种在培育基上。(3)在抗药性检验过程中，假如在菌落四周出现透亮圈，说明此种抗生素可抑制该细菌；透亮圈的大小表示此种抗生素抗菌效果的强弱。据此可推断抗菌效果强弱依次是A, C, B；D的透亮圈中出现了一个菌落，说明该菌落对此种抗生素具有耐药性。答案(1)平板划线稀释涂布(或涂布)平板(2)稀释涂布平板(涂布)(3)敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌(4)A归纳比较1培育基的配制原则(1)目的要明确：配制时应依据微生物的种类, 培育目的等确定配制的培育基种类。(2)养分要协调：留意各种养分物质的浓度与比例。(3)pH要适宜：细菌为6.57.5，放线菌为7.58.5，真菌为5.06.0，培育不同微生物所需pH不同。2培育基的养分构成(1)各种培育基的具体配方不同，但一般都含有水, 碳源, 氮源与无机盐；(2)不同培育基还要满足不同微生物对pH, 特别养分物质以及氧气的要求。3微生物与动植物养分要素的比较项目碳源氮源能源无机盐, 水动物糖类, 脂肪等蛋白质或其降解物同碳源都须要，种类及功能基本相同 微生物异养型糖类, 脂肪, 醇, 有机酸等蛋白质或其降解物, 铵盐, 硝酸盐, N2等同碳源自养型CO2, 碳酸盐等NH3, 铵盐, 硝酸盐等氧化无机物或利用光能铵盐, 硝酸盐光能绿色植物32. (8分)农业生产上有一种广泛运用的除草剂在土壤中不易被降解，长期运用会污染土壤。为修复被污染的土壤，可按图示程序选育出能降解该除草剂的细菌。已知该除草剂(含氮有机物)在水中溶解度低，含确定量该除草剂的培育基不透亮。ABCD(1) 微生物接种是微生物学探讨中最常用的基本操作技术，该技术的核心是_，应当在_旁完成。图中B, C所示操作的目的是将聚集的菌种逐步_。(2) 在选育过程中，应将土壤浸出液接种于以_为唯一氮源的固体培育基上。为了筛选出高效的目的菌，可比较单菌落四周透亮圈的大小。试验结果如右图显示的AE五种菌株中，_是最志向菌株。(3) 若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可接受的接种方法是_。对分别的细菌数目统计时，统计的菌落数目往往比活菌的实际数目_。(4) 操作过程中有三种材料或用具须要消毒或灭菌：培育细菌用的培育基与培育皿；操作者的双手；玻棒, 试管, 烧瓶与吸管。其中须要灭菌的是_。(填序号)32. (8分)(1) 无菌操作酒精灯火焰稀释获得单个菌落(2) 该除草剂E(3) 稀释涂布平板法少(4) 【微生物培育】35（15分）I下表所示为某微生物培育基的配方，请回答：（1）依物理性质划分，该培育基属于_培育基；依用途划分，则属于_培育基。 （2）依培育基的成分，所培育微生物的同化作用类型是_。 （3）如要鉴定自来水中的大肠杆茵是否超标，至少要加入_, _与_，除去_。 I（1）液体 选择 （2）异养 （分） （3）琼脂 伊红与美蓝 青霉素（分） 【微生物培育】33（8分）土壤中含有大量的难溶性磷酸盐，为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为植物能吸取的可溶性磷的优良解磷菌株，以便将其添加到有机肥中，改善植物磷元素供应。科研人员进行如下试验：试验原理：固体培育基中难溶性磷酸盐在微生物的作用下溶解，会在菌落四周形成透亮圈（如右图），透亮圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的实力大小。试验步骤：菌株透亮圈直径（D）菌落直径（d）D/dM-3-0118.812.31.5B3-5-620.78.02.6T1-4-019.16.51.4步骤1 取某地区土样5g制得土壤溶液后稀释，取稀释液1mL接种到基础培育基A上，在适宜温度下培育72h。步骤2 在基础培育基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种，培育34d后视察菌落特征与透亮圈的大小，初步筛选出三种优良解磷菌株（如右表）。分析回答：（1）从物理形态看，培育基A属于 培育基。培育基中磷源应当是 。（2）步骤1中接种方法是 ，步骤2中接种环的灭菌方法是 。（3）依据试验结果可以确定溶解磷实力最强的菌株是 。（4）为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的实力，探讨人员将它们接种到基础培育基B中，并在37, 200 r·min-1 摇床培育，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到右图所示曲线。 用摇床进行培育的好处是 结果表明最优良的解磷菌株是 。33.（8分，除特别注明外，每空1分）（1）固体 难溶性磷酸盐 （2）稀释涂布平板法 灼烧（3）B3-5-6（4）增加培育液中的溶氧量；使菌株与培育液充分接触，有利于物质的交换（2分）M-3-01【微生物培育】高考及模拟题31.(8分)人工瘤胃仿照了牛羊等反刍动物的胃,可用来发酵处理秸秆,提高秸秆的养分价值。 为了增加发酵效果,探讨人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株,并对其降解纤维素实力进 行了探讨。请回答下列问题: (1)在样品稀释与涂布平板步骤中,下列选项不须要的是 _ (填序号)。 酒精灯 于培育皿 显微镜 无菌水 (2)在涂布平板时,滴加到培育基表面的菌悬液量不宜过多的缘由是 _ 。 (3)向试管内分装含琼脂的培育基时,若试管口粘附有培育 基,须要用酒精棉球擦净的缘由是 _ 。 (4)刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降 解产物纤维二糖与葡萄糖发生这种反应。探讨人员在刚 果红培育基平板上,筛到了几株有透亮降解圈的菌落(见 右图)。 图中降解圈大小与纤维素酶的 _ 有关。 图中 降解纤维素实力最强的菌株是 _ (填图中序号)。 (5)探讨人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1与J4,在不同温度与pH条件下进行发酵, 测得发酵液中酶活性的结果见下图,推想菌株 _ 更适合用于人工瘤胃发酵,理由是 _ 。 31.(8分) (1) (2)培育基表面的菌悬液会出现积液,导致菌体积累,影响分别效果 (3)避开培育基污染棉塞 (4)量与活性 (5)J4 发酵过程会产热与产酸,J4菌株在较高温度与酸性环境下酶的活性更高 第 8 页