动物组织学和胚胎学实验指导.doc

动物组织学与胚胎学实验指导畜牧、兽医专业用崔 燕 主编甘肃农业大学动物医学院基础兽医系动物组织学与胚胎学实验指导主 编崔 燕 编 者崔燕 何俊峰 王正波 课程网址：前言动物组织学与胚胎学是动物医学、动物科学等专业的一门必修的专业基础课程。动物组织学与胚胎学课程也是一门实践性很强的形态学课程。实验课是一个重要的教学环节，它可帮助学生巩固和加深课堂所学的理论知识，培养学生应用基本知识和技能，观察动物体微观世界的能力，自己动手分析问题、解决问题的能力。为了使这些专业的学生在实习和自学中能更好的学习、掌握组织学与胚胎学的基本理论知识和鉴别组织结构的方法，得到必要的技能训练，我们基础兽医学解剖组织学教研室在总结以往的教学经验的基础上，编写了这本适合于本科生和研究生所使用的实验课本。本书图文并茂，所有插图均为照片，形象逼真，其中部分是作者在教学、科研中积累的组织学切片通过数码摄像技术制作而成的原创作品，部分来源与参考资料，扫描收集了了大量的根据新修订的实验大纲，本书共设计了17个实验，每个实验都附有作业，以提高学生的学习效果。每个实验所附的思考题可以活跃学生思维。在实验的编排上，实验一主要介绍了光学显微镜的基本结构和使用方法；实验二到实验十三为组织学切片实习部分；实验十五为胚胎学实习部分；。除了要求学生系统的观察组织切片外，根据新修订的实验大纲，在实验课的设计上，新开设了综合性实验（实验四 血液、实验十五石蜡切片制作）和部分高水平的设计性实验（显微摄影、免疫组织化学方法），以加强学生的实际动手能力。本书中的图片除了实验中要求学生观察的图片外，还有相当多的为示教切片，以扩展学生的知识层面。本书附录部分的彩图与正文中的插图一一对应，不但便于学生查找和使用，而且便于学生使用显微镜观察组织学切片时对照插图进行自学；附录部分的作业以表格形式出现，学生即可以作为实验前的预习、又作为实验后的复习总结。 本书虽然经过了大量时间进行编写和修改，但仍然可能有不当和错误之处，望各位老师和同学在教学实践过程中给予批评指正，以备今后修编时参考。 崔 燕 2004年6月目 录绪论.1实验一 显微镜的使用及细胞的结构.2实验二 上皮组织.8实验三 结缔组织.11实验四 血液. .15实验五 肌组织.18实验六 神经组织及神经系统.21实验七 循环系统.25实验八 免疫系统.28实验九 消化系统.32实验十 呼吸系统.39实验十一 泌尿系统.41实验十二 生殖系统.44实验十三 被皮系统.48*实验十四 石蜡切片的制作.52实验十五 哺乳动物早期胚胎发育及胎膜、胎盘的结构.55*实验十六 显微摄影方法与步骤 .58*为开放性选做实验绪 论 （一） 实验课的目的 动物组织学与胚胎学是畜牧兽医专业的一门必修专业基础课。组织学是在学习生物学和解剖学的基础上，进一步借助显微镜（包括光学显微镜和电子显微镜）研究动物细胞、组织和器宫等微细结构及功能的科学；胚胎学则是研究个体发生，发育的科学。本课程教学过程包括理论课和实验课两部分，实验课是理论课的继续和深化，其目的不仅在于验证理论知识，使学生加深对基本理论的理解和记忆，正确掌握使用光学显微镜和制作切片等基本方法，更重要的是引导学生应用这些基本知识和技能、观察和复习切片标本，从而达到正确认识不同动物各种器官、组织的结构和不同染色方法所制成的切片，从而培养和提高学生学习的自觉性和深人钻研客观事物的能力。研究和辨认标本时，要配合必要的绘图和记录，借以培养学生掌握科学的记录方法和分析、综合问题的能力。 （二） 实验课的要求 为了达到上述目的，实验课要求做到下列项目： l.实验前要求学生认真复习有关理论课内容和预习实验指导书，明确本次实验目的要求、内容和方法，以培养独立操作的能力。 2.显微镜是组织学实验课的主要仪器，是培养基本技能的重要手段，因此要求每个学生必须熟练掌握显微镜的使用方法。显微镜是贵重的光学仪器，使用时务必严格按操作规程进行，切勿随意拆卸或暴力转动，做到轻取轻放，用毕放回原处。 3.对切片要严加爱护，观察切片前一定要区别其正反面，盖玻片朝上为正面，切忌盖玻片朝下。必须按肉眼低倍镜高倍镜的顺序进行观察，在低倍镜下先观察整体结构，然后转换高倍镜观察局部微细结构，切忌集中于切片某一部位，未加详细观察与思考就转入高倍镜。一定要做到既认真仔细，又实事求是地观察每张切片。观察标本时要配合必要的绘图和记录，增强理解和记忆，但必须在全面观察并掌握主要结构和弄清主要结构与次要结构关系的基础上，选择器官或组织中比较典型的部分进行绘图，切忌盲目临摹挂图或书本的插图，要按时完成每次的实验报告。 4.绘图方法：绘制组织学图只要求用点和线绘制半模式图。用线条绘细胞膜、核膜和纤维等连续性结构，而细胞质则用点来表示。线条要粗细均匀，点要大小一致，圆、细、密而不重叠。绘图要求真实反映显微镜下的结构和比例，绘图要用横线指明结构，并注字说明，一般要求在绘图纸的左边绘图，右边注字。要求字体正楷，字迹清楚，无错别字。在图下方要注明标本（图）名称，染色方法和放大倍数等。 5.在学习本课程期间，要求学生充分利用实验指导书上的插图、实验室的挂图，实物标本、模型、幻灯片和图片等直观教具，反复比较和认真思考，做到理论和实际、立体和切面、局部与整体、结构与功能、光镜结构与电镜结构等关系密切结合，达到融会贯通，全面理解的目的。6.为检查学生获得知识是否巩固，除实验前进行提问外，还可利用切片标本进行经常性的辨认或小测验，从而了解理论课或实验课获得知识是否巩固，并验证基本技能掌握的程度以及独立工作能力等。实验一 显微镜的使用及细胞的结构一、目的与要求1.了解生物显微镜的构造和使用。2.掌握细胞在光镜下的基本结构。3.认识动物不同组织的细胞，了解由于功能各异，导致细胞的多样性。4.了解细胞的主要增殖方式有丝分裂过程中各期的形态学特征。二、材料LEICA生物显微镜、卵巢切片、脊神经结切片、马蛔虫卵巢切片。三、内容和方法（一）生物显微镜的构造及使用1. LEICA（徕卡）EME型生物显微镜的构造包括机械部分和光学部分。机械部分（1）镜座 一般呈蹄铁状或方形，有稳固和支持镜体的作用。（2）镜臂 是镜座与镜筒的连接部分，呈弓状，便于手握，有的在基部具一关节螺旋，可使镜简倾斜，便于观察。（3）载物台（镜台） 方形，上有两个金属片夹，供固定标本用，或安装标本推进器。载物台中央有一通光孔。（4）标本推进器 安放在载物台上，除固定切片外，还通过转轴连接接两个调节螺旋，这两个调节螺旋可前、后、左、右移动切片。在推进器的纵、横坐标上标有刻度，以便确定某一结构的方位。（5）物镜转换器 呈圆盘状，上有34个物镜螺旋口，供物镜按放大倍数高低顺序嵌入，以便把物镜根据观察需要推到正确的使用位置上。（6）调节螺旋 分粗调节和细调节两个螺旋。粗调节螺旋用于低倍镜调焦；细凋节螺旋用于高倍镜调焦。两螺旋结合使用，使视野清晰。（7）眼间距调整 使两目镜与两眼间距离一致，不同的人两眼间距离不同，应根据自己的情况加以调节。（8）屈光度调节 光学部分（1）物镜 作第一次放大标本用。安装在物镜转换器上，通常有34个接物镜，分别是4×、l0×、40× （50×）和l00×，在每个接物镜的镜管上分别标有醒目的红色、黄色、蓝色和白色线圈。4×和l0×称低倍镜，40 （50） ×称高倍镜，l00×是油浸镜，每个接物镜的镜管上通常标有主要性能参数，如40/0.65，160/0.17, 40表示放大倍数，0.65表示镜口率（数值孔径，N·A），160表示机械管长（mm），0.17表示允许盖玻片厚度（mm）。N·A值越大，透镜分辨率越高。（2）目镜 亦有5×, 10×, 15×和20×等。目镜的作用是将物镜放大的标本像（实像）再放大成虚像。观察者可根据工作需要和标本的实际情况，恰当选择不同放大倍数的目镜。接目镜内常安放一指针，便于指示视野中的某一结构。目镜可旋转，目镜底部有相应的刻度，以供两眼度数不同的人调节。（3）聚光器 位于载物台的下方，起着把光线汇聚成光柱（束），增强照明度之用。聚光器的一侧有调节螺旋，可以升降，可按需要调节亮度。（4）光阑 在聚光器下方，由许多金属叶片组成。由一光圈调节杆调节光圈大小，以控制聚光镜的N·A值，以便符合物镜要求。（5）亮度调节钮 用于调整照明亮度。注意每次用完显微镜后应将亮度调节钮置于最暗的位置，然后关闭电源。（6）滤光片 在光阑下方有一金属圈，可安放滤光片，借以改变光源的色调和强弱，便于观察和摄影。常用滤光片有三种：毛玻片减弱光强度、使光漫射而变的柔和；蓝玻片白炽灯光照明时用，将黄色灯光校正成白光；绿玻片通常适用于黑白照片，显微摄影用。（7）光源 有自然光源（阳光）和人工光源（灯光）之分，本机采用人工光源。2.显微镜的使用（1）显微镜的提取和放置 显微镜是精密的光学仪器，从显微镜柜中取出时，一定要按操作规程进行，即一手握住镜臂，另一手托住镜座，严禁单手握住镜臂走动。显微镜使用前要平放于使用者前方偏左的位置上。用擦镜纸轻轻擦拭目镜和物镜，若有脏物，则用擦镜纸蘸少许乙醚与酒精混合液擦拭干净，并用纱布擦拭显微镜的机械部分。（2）接通电源，打开电源开关，调整光强度，旋转物镜转换器，先把低倍接物镜对准载物台中央的通光孔（对正光轴），根据标本染色情况选用不同放大倍率的接物镜，灵活应用亮度调节钮、聚光器和光阑，调节至视野完全照明、亮度均匀，光强适宜。（3）观察切片 观察切片前，先用肉眼分辨切片的正反面，盖玻片朝上为正面，并大致观察标本的外形、大小和着色。将切片放置于载物台上，置于持片夹内固定，运用推进器将组织块对准载物台中央的通光孔。在镜臂的两侧有调节螺旋，可调节镜筒和物镜或载物台的升降。 按照低倍镜、高倍镜顺序观察切片，低倍镜观察的范围大，便于观察器官或组织的全貌或整体结构。高倍镜观察的范围小，放大的倍数高，适用于分辨器官或组织某一局部的微细结构。两者互相配合，可达到全面了解器官结构的目的。观察标本时，首先在低倍镜下对焦至观察物象最清晰时为止，观察完切片一般结构后，需要进一步观察某一部分结构时，应将此部位移至视野中央，转换高倍镜观察，如图像不清晰时，只需稍调节细调节螺旋，即可看到清晰的物象。必须指出，接物镜放大倍数愈低，其工作距离（即接物镜前镜片与盖玻片上平面之间的距离）愈长，接物镜放大倍数愈高，其工作距离愈短。所以使用高倍物镜时，应避免用粗调节器。若必须便用时，则应用眼睛从侧方观看载物台上升，当盖玻片至物镜之间的距离约为1毫米时，然后用眼观察视野，慢慢转动细调节器，直至看见物象清晰为止。运用粗调节器时应小心，否则会压碎切片。观察切片时姿势要端正，要做好绘图或记录。（4）收藏 观察完毕后，移开物镜，取下切片，放入切片盒，降下镜筒。注意每次用完显微镜后应将亮度调节钮置于最暗的位置，然后关闭电源，套上塑料套。（二）细胞的结构1.学生观察切片（1）光镜下圆形细胞的形态结构 以初级卵母细胞为例。A卵巢切片 H.E染色肉眼观察：卵巢纵切面呈椭圆形，着紫红色。低倍镜观察：参考例图，找到卵巢的边缘部分，可见其中有许多小而圆、单个或成群存在的原始卵泡。选择一个典型而清晰的原始卵泡，转换高倍镜观察。高倍镜观察：高倍镜下可见原始卵泡由位于中央的卵母细胞和其外围呈扁平状的一层卵泡细胞组成。卵母细胞较大，圆形，中央有一个大而圆、嗜碱性的细胞核，核仁大而明显、染色质呈小块状。细胞质包绕在核的周围，弱嗜酸性，呈细颗粒状或均质淡红色。细胞质内未见任何细胞器和包含物，这是由于所有的细胞器和包含物都需要经过特殊的染色才能显示。胞膜和核膜在光镜下不能分辨。切面如不经过细胞核或核仁，则细胞内无细胞核或缺核仁。核内的各种结构可能不在同一焦距平面上，观察时必须上下转动细调节螺旋方可获得清晰的图像（图1）。 图1 卵巢切片 图2脊神经节纵切片B高尔基复合体 脊神经节纵切片 镀银法肉眼观察：脊神经节纵切面略呈椭圆形，染成棕黄色。低倍镜观察：可见脊神经节主要由深色的神经纤维束和纤维束之间呈淡黄色的脊神经节细胞构成。脊神经节细胞成群分布，切面呈圆形或椭圆形，胞体大小不等。选择一个细胞质中有黑色网状物的脊神经节细胞，转换高倍镜观察。高倍镜下观察：脊神经节细胞呈淡黄色，中央或偏心处有一个不着色圆形的细胞核。核周围的胞质中散布棕黑色的网状物即高尔基复合体。注意胞质中的高尔基复合体数量不等，形状各异，有的呈网状，有的则被切断而呈粗颗粒状。切面如不经胞核的脊神经节细胞，高尔基复合体则散布于细胞质中（图2）。（2）动物细胞有丝分裂 马蛔虫子宫切片 铁苏木精染色肉眼观察：切片中有46个圆形马蛔虫子宫横切面。低倍镜观察：一个马蛔虫子宫横切面，可见子宫壁由高柱状细胞构成，子宫腔内有许多圆形或椭圆形的马蛔虫卵切面。每个虫卵的外表面都包着一层较厚的胶质膜，其内是处于不同分裂阶段的卵细胞。卵细胞的胞质着淡蓝色，参考例图，找出各分裂期的形态学特点，找出前期、中期、后期和末期的卵细胞，并依次置于高倍镜下观察。高倍镜下观察：前期：虫卵的胶质膜内只有一个圆形的卵细胞，胞核中的染色质已形成发夹样的染色体，并在核仁、核膜消失后群集于细胞质中。纺锤体明显，其两极有深染的中心体。中期：纺锤体移至细胞中部，染色体排列于纺锤体中部的赤道面上。后期：染色体分为均等的两半，并分别向两极的中心体集中，中部的胞膜向内缩窄而呈哑铃状。末期：胶质膜内的两个子细胞已完全分开，染色体解聚变成小块状的染色质，核仁、核膜相继出现，注意若在一个马蛔虫的子宫切片中，未能察见各期分裂相时，可从别的子宫切面中寻找，直至全部察见为止（图3）。图3马蛔虫子宫内卵细胞切片2.教师示教切片A立方形细胞 甲状腺切片 H.E染色高倍镜下观察甲状腺滤泡，指针所指的是滤泡壁的滤泡上皮细胞，呈立方形，细胞的长、宽和高几乎相等，细胞核圆形，位于细胞中央，细胞质弱嗜酸性，围绕在核的周围（图4）。B柱状细胞 小肠切片 H.E染色 高倍镜下观察小肠绒毛，可见绒毛表面整齐地排着一层柱状上皮。指针所指的是一个柱状细胞，细胞的高度大于宽度，呈柱状，细胞质弱嗜酸性.细胞核椭圆形，位于细胞近基部。由于细胞排列紧密，且细胞膜极薄，细胞界限不清，可从两核之间划一分界线，即可显示细胞的柱状形态（图5）。C星状有突起细胞（神经元） 脊髓切片 硫堇染色 高倍镜下观察脊髓灰质的腹角，指针所指的是脊髓运动神经细胞，细胞呈星状，从胞体向外周伸出数个突起，胞体中央有一大而圆的细胞核，核内有较大的核仁（图6）。D梭形的平滑肌细胞 平滑肌分离装片高倍镜下观察单个平滑肌细胞，可见平滑肌细胞（肌纤维）呈长梭形，两端尖细，中部略宽，胞质红染，内有一深蓝色杆状或长椭圆形的细胞核（图7）。图4甲状腺切片 图5小肠肠绒毛切片 图6 神经元 图7 平滑肌纵切片3.观察电镜幻灯片和图片结合功能，了解细胞膜、各种细胞器和细胞核的亚微结构。四、作业1.绘制一个原始卵泡中的卵母细胞的形态结构高倍镜图。2.绘制一个脊神经节细胞，示高尔基复合体高倍镜图。五、思考题1.粗、细调节旋钮使物镜上下移动还是使载物台上下移动？2.若用低倍镜能看到切片内容，但用高倍镜看不到，应考虑那些原因？3.一般而言，细胞哪些部分嗜碱性，哪些部分嗜酸性？为什么？实验二 上皮组织一、目的与要求1.掌握各种类型被覆上皮的形态结构。2.了解外分泌腺中几种腺上皮细胞的形态结构特点。3.了解上皮细胞各个面的特化结构。二、材料LEICA生物显微镜、小肠横切片、气管横切片、食管横切片。三、内容和方法1.学生观察切片（1）单层柱状上皮 小肠横切片 H.E染色肉眼观察：小肠横切面一般呈圆形或椭圆形，中央的空腔为肠腔，周围紫红色的部分为肠壁。低倍镜观察：可见肠壁腔面有许多突起的小肠绒毛，选择一个结构清晰的小肠绒毛进一步详细观察。高倍镜观察：小肠绒毛表面由单层柱状上皮构成。上皮细胞的胞质嗜酸性，细胞核椭圆形，嗜碱性且着色较深，位于细胞近基部。转动细调节螺旋可见上皮的游离面有一条亮红色粗线样的结构即纹状缘，它是由微绒毛密集而成的。上皮的基底面与结缔组织交界处有着色较深的基膜，在局部的上皮细胞之间，夹有单个呈空泡样的杯状细胞，属于单细胞腺，分泌粘液。杯状细胞的顶部因含大量粘原颗粒而膨大成杯状，由于粘原颗粒不着色（或着淡蓝色）而呈空泡状。细胞的基部较小，内含不规则或新月状的细胞核（图8）。（2）假复层柱状纤毛上皮 气管横切片 H.E染色肉眼观察：气管横切面呈圆形，管腔较大，腔面平整，管壁中有染成蓝紫色形如“C”字的透明软骨。低倍镜观察：气管的粘膜层较薄，被覆的是假复层柱状纤毛上皮，选择其中较清晰的部分换高倍镜观察，高倍镜观察：由于构成上皮的三种细胞高低不一，故上皮中细胞核的位置亦高低不平。大致可排成三层。表层的细胞核呈椭圆形，较大，着色较淡的是高柱状细胞的核，中间层细胞的核呈较小的椭圆形，着色较深，是梭形细胞的核；最深层的核呈圆形，着色最深，是锥形细胞的核。三种细胞同位于基膜上，实属单层上皮。注意高柱状细胞的游离面有纤毛。在有的部位上皮细胞间也见到空泡样的杯状细胞。上皮的基底面与结缔组织之间有较明显的基膜（图9）。图8小肠肠绒毛切片 图9气管横切片（3）复层扁平上皮 食管横切片 H.E染色肉眼观察：食管横切面呈椭圆形，粘膜向管腔突出形成数个皱襞，故管壁面凹凸不平。 低倍镜观察：找到紧靠腔面的复层扁平上皮，可见到上皮厚，层数多，选择一清晰部位换高倍镜观察。高倍镜观察：从腔面向外观察，上皮细胞可分三个层次：表层由数层扁平状的细胞构成，胞质弱嗜酸性，由于不同程度的角化，细胞核可固缩而浓染变小以至消失，最后呈鳞片状脱落。中间层细胞大，层数多，由多边形或梭形的细胞构成，细胞核圆或椭圆，着色较浅，细胞质亦弱嗜酸性。基底层细胞呈立方形或矮柱状，位于基膜上，排列紧密，胞核椭圆着色深，胞质弱嗜碱性。因此，易与基膜下淡红色的结缔组织相区别（图10）。图10食管横切片 图11甲状腺切片2.教师示教切片（1）立方上皮甲状腺切片 H.E染色 高倍镜下甲状腺滤泡壁的单层立方上皮。可见细胞的高度和宽度大致相等，细胞核圆，位于中央（图11）。（2）变移上皮（高倍） 膀胱 H.E染色 当膀胱收缩时，膀胱壁的变移上皮增厚，由不同形态的46层细胞组成，表层细胞体积大，核圆呈双核，该细胞顶端的胞质浓缩而呈深红色，称壳层，中间层细胞稍小，多为梭形或倒梨形，有一个位于中央的圆形核，胞质染色淡而清亮，基底层细胞小，呈不规则立方形，排列较密，核圆色深。当膀胱充盈扩张时，上皮变薄，数减少至13层，细胞变成扁平形（图12）。（4）腺上皮 颌下腺切片 H.E染色 在颌下腺中，可以见到由浆液性细胞和粘液性细胞组成的不同形态的腺泡。A浆液性腺泡呈圆形或椭圆形，由数个锥形的浆液性细胞围成，腺细胞基部胞质嗜碱性，细胞顶部含大量嗜酸性分泌颗粒而呈红色，核圆，位于细胞基部。B粘液性腺泡由锥形的粘液性细胞组成，胞质内含大量的粘原颗粒，着色很淡，呈淡蓝色，核被挤向基底部，呈扁平月牙形。C混合性腺泡是在粘液性腺泡的一侧有几个浆液性的细胞附着，呈半月状排列，色红，又称浆半月（图13）。图12膀胱 图13颌下腺切片（5）细胞的特化结构 通过观察电镜图片和幻灯片，了解上皮细胞游离面的微绒毛，纤毛，侧面的连接复合体、缝管连接、镶嵌连接，基底面的基膜、质膜内褶、半桥粒等的亚微结构。四、作业1.绘制部分单层柱状上皮细胞（含杯状细胞）的高倍镜图。2.绘制高倍镜下的部分复层扁平上皮。五、思考题1.总结各种被覆上皮的结构特点及分布。2.在组织切片上，可以根据那些形态结构特征确认上皮组织？3.复层扁平上皮和变移上皮在形态结构和功能上有什么不同？实验三 结缔组织一、目的与要求l.掌握固有结缔组织中特别是疏松结缔组织和网状组织的形态特点。2.掌握软骨的一般结构和三种软骨的特点，并了解骨组织的结构特征。二、材料Leica生物显微镜、结缔组织铺片、淋巴结切片（镀银法）、淋巴结切片（H.E）、气管横切片、骨干横磨片。三、内容和方法1. 学生观察切片（1）疏松结缔组织铺片 结缔组织铺片（活体注射台盼蓝） H.E及特殊的弹性纤维染色法复染肉眼观察：铺片染成蓝紫色，形态不规则且厚薄不均匀。低倍镜观察：可见纵横交错呈淡红色的胶原纤维和深紫色单根的弹性纤维，纤维间有许多散在的细胞。选择一薄而清晰的部位换高倍镜观察，高倍镜观察：可以辨认以下几种纤维和两种细胞成分： A胶原纤维 染成淡红色，数量多，为长短粗细均不等的纤维束，呈现波浪状且有分支，相互交织成网。 B弹性纤维 数量少，呈深紫色的发丝状，长而比较直，断端有卷曲。 C成纤维细胞 数量最多，胞体大，具有多个突起的星形或多角形的细胞。由于胞质染色极浅而细胞轮廓不清，只能根据细胞核较大，椭圆形，有12个明显的核仁等特点来判断。这些细胞多沿胶原纤维分布。另外还可见到一些椭圆形、较小且深染，核仁不明显的细胞核，此系功能不活跃的纤维细胞的细胞核。 D巨噬细胞 又称组织细胞，一般呈梭形或星形，最大的特征是胞质内有许多被吞噬的台盼蓝颗粒。细胞核较小，椭圆形且染色较深，见不到核仁，可借助于胞质中吞噬颗粒的存在来判断它的形状和大小（图14）。（2）网状细胞 淋巴结切片 H.E染色肉眼观察：淋巴结切面，周围色深的部分是淋巴结的皮质，中央色较浅的部分是淋巴结的髓质。低倍镜观察：找到淋巴结髓质，把细胞分布比较稀疏的部分（髓窦）置高倍镜下观察。高倍镜观察：可见网状细胞较大，有数目不等的胞质突起，相邻网状细胞的突起可互相连接成网，胞质和突起呈弱嗜碱性，胞核圆形或椭圆形，着色浅（图15）。图14疏松结缔组织 图15淋巴结髓质 （3）网状纤维 淋巴结切片 镀银法肉眼观察：淋巴结的切面被染成棕黑色。低倍镜观察：找到粗细不等交织成网的黑色纤维，换高倍镜观察。高倍镜观察：可见纤维着色深浅不同，其中较细呈黑色的是网状纤维，较粗呈棕色或灰黑色的是胶原纤维。因镀银时两种纤维都着色，只是着色深浅程度不同而已（图16）。（4）透明软骨 气管横切片 H.E染色肉眼观察：在气管壁中有一条染成深蓝紫色的“C”形软骨环，即透明软骨。低倍镜观察：找到透明软骨后，即可见到表面有嗜酸性的软骨膜，中央的基质着浅蓝紫色，其中散布着许多软骨细胞。高倍镜观察：软骨膜由致密结缔组织构成，可见嗜酸性平行排列的胶原纤维束，束间夹有扁平的成纤维细胞。软骨细胞位于软骨陷窝内，边缘的软骨细胞小，呈扁平形或椭圆形，越靠近中央，细胞体积渐大变成卵圆形或圆形。生活状态下软骨细胞充满软骨陷窝，制片后因胞质收缩，软骨细胞与陷窝壁之间出现空隙。由于软骨细胞分裂增值，一个陷窝内常可见到24个软骨细胞，称同源细胞群。软骨基质呈均质凝胶状，埋于其中的胶原纤维不能分辨。在软骨陷窝周围的基质中含有较多的硫酸软骨素而显强嗜碱性，称软骨囊（图17）。图16网状纤维 图17透明软骨（5）密质骨 骨干横磨片 原色肉眼观察：骨磨片形状呈方形，着淡黄色。 低倍镜观察：由于是磨片，骨中的骨膜、骨细胞、血管及神经等已不存在，只留下骨板、骨陷窝及骨小管等结构。从外向内可见骨板、分为外、中，内三层。外层骨板较厚，内层骨板较薄，它们分别围绕骨表面和骨髓腔作环行排列，称外环骨板和内环骨板。中间层骨板最厚，有许多同心圆排列的骨板系统即哈佛氏系统（骨单位）。哈佛氏系统中央的深色管腔称哈佛氏管，周围环形的骨板是哈氏骨板。位于哈佛氏系统之间的一些呈不规则形状的骨板称骨间板。在上述各种骨板周围可见到浅色的分界线即粘合线。在骨板面成骨板内有许多深染的小窝为骨陷窝，其周围伸出的细管为骨小管。骨陷窝和骨小管是骨细胞及其突起存在的腔隙。另外还有少数呈横行或斜行的管进穿，与内、外环骨板相通，并与哈佛氏管相通，称伏克曼氏管（图18）。图18骨干横磨片 2. 教师示教切片（1）脂肪细胞与脂肪组织 皮肤切片 H.E染色高倍镜下的脂肪组织呈蜂窝状，由大量脂肪细胞及少量结缔组织和毛细血管构成。脂肪细胞较大，胞质内充满脂滴，胞核被挤到边缘，染色深呈扁平状，由于脂滴被溶去，故脂肪细胞呈空泡状（图19）。（2）致密结缔组织 腱切片 H.E染色腱是规则的致密结缔组织。高倍镜下可见它由平行排列着的粗大淡红色的胶原纤维束和夹于纤维束之间的腱细胞构成。腱细胞核呈细长状，着色深，胞质少而不易看见（图20）。图19脂肪细胞 图20 腱切片 （3）弹性软骨 耳廓切片 Weigert染色高倍镜下弹性软骨的主要特征是基质中含有大盘染成深蓝色的弹性纤维交织成网。在软骨边缘的弹性纤维稀疏，深部的粗大而致密。软骨膜及软骨细胞的结构，基本同透明软骨（图21）。（4）纤维软骨 椎间盘切片 H.E染色高倍镜下可见基质中有大量呈淡红色平行排列的胶原纤维束，纤维束之间有较小的单个、两个或成行排列的软骨细胞（图22）。图21弹性软骨 图22纤维软骨 四、作业1.绘图：高倍镜下疏松结缔组织结构图。2.绘图：高倍镜下网状组织的结构图。五、思考题1.比较上皮组织和结缔组织的结构特点。2.疏松结缔组织中有哪几种细胞和纤维。3.三种软骨的组织结构有什么不同？实验四 血液一、目的与要求掌握血液涂片的制作方法，并观察血液涂片。二、材料LEICA生物显微镜、牛血液、骆驼血液、鸡血液、瑞特氏染液、香柏油、吸水纸、擦镜纸、载玻片、蒸馏水、二甲苯、染色缸。三、内容和方法1. 血涂片的制作（1）血涂片的染色取一滴新鲜的血液，置于玻片的一端，以左手拿该片的两端，迅速用右手拿住另一载玻片的一端，在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成45o角度，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片。涂片在空气中干燥后置于染色架上，滴加染色液，使涂片被染色液覆盖，染1min后，再加等量的缓冲液于染色液上，浸染约58min。此时涂片表面呈现一层古铜色，用蒸馏水迅速冲洗，见涂片呈粉红色后，以吸水纸吸干。（2）将干燥好的血涂片加香柏油一滴，置显微镜下观察。肉眼观察制作良好的血涂片厚薄适宜,血膜分布均匀,呈粉红色。有些血片涂抹厚薄不均匀,主要是推片不齐,用力不匀及玻片不洁所致。选一厚薄适宜部位置显微镜下观察。2. 学生观察切片（1）家畜血液涂片（图23）低倍镜观察可见到大量圆形而细小的红细胞。白细胞很少，稀疏地散布于红细胞之间,具有蓝紫色的细胞核。选白细胞较多的部位（一般在血膜边缘和血膜尾部,因体积大的细胞常在此出现），换油镜观察。油镜下区别血液中各种有形成分时，可参考第三版教材的彩色图版1或3，结合图5-1各种血细胞模式图的特点进行观察。应该指出的是,图版中的细胞形态都是经过典型化了的，实际上,血细胞的形态不仅因动物而异，而且常因制片技术和染色偏酸、偏碱均可使细胞形态或染色反应异常。如血膜过厚，细胞重叠而细胞直径缩小，血膜太薄，白细胞多集中于边缘。染色结果偏酸，则红细胞和嗜酸性颗粒偏红，白细胞的细胞核呈极浅蓝色或不着色。染色结果偏碱,所有的红、白细胞呈灰蓝色，颗粒深暗等。故观察时不能生搬硬套，一定要根据具体情况，灵活掌握，对比分析，才能做出正确的判断。A红细胞 数量最多，体积小而均匀分布，呈粉红色的圆盘状，边缘厚，着色较深，中央薄，着色较浅，无核无细胞器，胞质内充满血红蛋白。B中性粒细胞 是白细胞中较多的一种,体积比红细胞大,主要的特征是胞质中的特殊颗粒细小，分布均匀，着淡红色或浅紫色。胞核着深紫红色,形态多样,有豆形、杆状（为幼稚型,胞核细长，弯曲盘绕成马蹄形、S形、W形或U形等多种形态）或分叶状，一般分35叶或更多，叶间以染色质丝相连，各叶的大小、形状和排列各不相同。核分叶的多少与该细胞年龄有关。C嗜酸粒细胞 比中性粒细胞略大，数量少，胞核常分两叶，着紫蓝色。主要特点是胞质内充满粗大的嗜酸性特殊颗粒，色鲜红或桔红。马的嗜酸性颗粒粗大，晶莹透亮，呈圆形或椭圆形，其他家畜的嗜酸性颗粒较小。D嗜碱粒细胞 数量很少，体积与嗜酸粒细胞相近或略小。主要特征是胞质中含有大小不等，形状不一的嗜碱性特殊颗粒，颗粒着蓝紫色，常盖于胞核上。胞核呈"S"形或双叶状，着浅紫红色。此种白细胞由于数量极少，,必须多观察一些视野方能察见。E淋巴细胞 有大、中、小三种类型，其中小淋巴细胞最多，血膜上很易见到，体积与红细胞相近或略大。核大而圆，几乎占据整个细胞，核一侧常见凹陷，染色质呈致密块状，着深紫蓝色。胞质极少，仅在核的一侧出现一线状天蓝色或淡蓝色的胞质,有时甚至完全不见。中淋巴细胞体积与中性粒细胞相近,形态与小淋巴细胞相似，但胞质较多呈薄层围绕在核的周围。在核的凹陷处胞质较多且透亮，偶见少量紫红色的嗜天青颗粒。大淋巴细胞在正常血液中不常见到，体积与单核细胞相近或略小，胞核圆形着深紫蓝色，胞质更多，呈天蓝色。围绕核周围的胞质呈一淡染区。F单核细胞 是白细胞中体积最大的一种，胞核呈肾形、马蹄形或不规则形，着色浅，染色质呈细网状。细胞质丰富，弱嗜碱性，呈灰蓝色,偶见细小紫红色的嗜天青颗粒。G血小板 体积很小，常三五成群散布于红细胞之间，形态有圆形、椭圆形、星形或多角形的蓝紫色小体，,中央着色深的是血小板的颗粒区，周边着色浅的是透明区。（2）家禽血液涂片（图24）鸡血的有形成分与家畜比较有以下不同：A红细胞呈椭圆形,中央有一深染的椭圆形细胞核，不见核仁，胞质呈均质的淡红色。B中性粒细胞，又称异嗜性粒细胞,圆形,具有25个分叶核,胞质内嗜酸性的特殊颗粒呈杆状或纺锤形。C凝血细胞，又称血栓细胞，相当于家畜的血小板。凝血细胞具有典型细胞的形态和结构，比红细胞略小，两端钝圆，核呈椭圆形、染色质致密。胞质微嗜碱性，内有12个紫红色的嗜天青颗粒。其它血细胞基本上与其它家畜的血细胞相似。 图23牛血涂片 图24鸡血涂片 3. 教师示范切片骆驼血涂片高倍镜下观察骆驼血液中的有形成分,见红细胞呈椭圆形,无细胞核。其余血细胞的形态结构与一般家畜血液的有形成分相似（图25）。图25骆驼血涂片四、作业1.写出血涂片制作的操作步骤。2.绘制自制血涂片中的各种血细胞。五、思考题1.比较哺乳动物和禽类红细胞的形态结构特点。2.比较哺乳动物和禽类各种白细胞的结构特点。实验五 肌组织一、目的与要求 以骨骼肌为重点，掌握三种肌纤维的形态和结构特点，要求在显微镜下准确识别它们纵横切面的不同。二、材料LEICA生物显微镜、骨骼肌切片、心肌切片、平滑肌切片。三、内容和方法1. 学生观察切片（1） 骨骼肌纵、横切 铁苏木素（或H.E）染色 低倍镜观察：骨骼肌的纵切面上有许多平行排列着的圆柱状肌纤维，具有明暗相间的横纹，边缘有很多细胞核。横切面上可见肌纤维集聚成束，被切成许多圆形或多边形断面。无论纵切面或横切面的肌纤维周围都有疏松结缔组织包裹（肌内膜和肌束膜），结缔组织内含丰富的血管。高倍镜观察：在纵切面找出一条横纹清晰的肌纤维，在肌纤维膜下分布着一些椭圆形的细胞核，可以见到核仁。肌纤维内含有顺长轴平行排列的肌原纤维，很多肌原纤维上的明带（I带）和暗带（A带）相间排列，就形成了横纹。仔细观察在暗带中有一淡染的窄带称H带，H带中央还有一细的M线。在一般光镜下，M线不能见到。在明带中央有一条隐约可见的Z线（间线），相邻两条Z线之间的一段肌原纤维，即为一个肌节。 肌纤维的横切面上可见肌原纤维被切成点状或短杆状（斜切），有的均匀分布，有的则被肌浆分别成一个个小区。在横切面上还可以见到少量位于周边的圆形细胞核（图26，27）。图26骨骼肌纵切 图27骨骼肌横切 （2）心肌 心肌切片 H.E染色 低倍镜观察：由于心肌纤维呈螺旋状排列，故在切面中可同时观察到心肌纤维的纵切、斜切或横切面，各心肌纤维之间由结缔组织相连系并含有丰富的血管。 高倍镜观察：先观察纵切的心肌纤维，细胞呈短柱状，平行排列，并以较细而短的分支与邻近的肌纤维相吻合，互连成网。胞核椭圆形，位于细胞中央，注意核周围由于肌浆较多而呈淡染区。心肌纤维亦可见明暗相间的横纹，但不如骨骼肌明显。心肌横切面呈大小不等的圆形或椭圆形切面，心肌无骨骼肌那样结构典型的肌原纤维，中间有一圆形胞核，核周围清亮，但很多切面未能切到核（图28、29）。（3）平滑肌 小肠横切片 H.E染色肉眼观察：切片呈红色，本实验观察的是小肠的肌层，呈更深的红色，而且比较厚。低倍镜观察：从小肠的腔面向外观察，依次是粘膜层，粘膜下层（淡红色）、肌层（深红色）和浆膜。肌层发达，由平滑肌纤维呈内环行、外纵行排列，在此切而上内环肌呈纵切，外纵肌呈横切。高倍镜观察：纵切的平滑肌纤维呈细长纺锤形，彼此嵌合紧密排列，胞核为长椭圆形，位于肌