实验一检测生物组织中的糖类脂肪蛋白质.doc

实验 检测生物组织中复原糖、脂肪与蛋白质一、实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反响。5065水浴 颜色反响: 复原糖+斐林试剂 砖红色沉淀 淀粉 +碘液 蓝色 脂肪 +苏丹/ 橘黄色/红色 蛋白质+双缩脲试剂 紫色络合物二、实验步骤：待测样液2ml斐林1ml甲液与乙液混合5065水浴加热3min观 察 1、检测复原糖 2、花生子叶薄片1片染色2min苏丹染液洗浮色50%酒精观 察检测脂肪3、检测蛋白质待测样液2ml双缩脲A液1ml双缩脲B液4滴观 察待测样液2ml碘液2滴观 察4、检测淀粉考前须知：复原糖的检测与观察： 复原糖有葡萄糖，果糖，麦芽糖；甲乙液必须等量混合均匀后再参加样液中，现配现用；必须用水浴加热 脂肪的鉴定：切片要薄，如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰，有的地方模糊。  酒精的作用是：洗去浮色  需使用显微镜观察  使用不同的染色剂染色时间不同蛋白质的鉴定：先加A液1ml，再加B液4滴鉴定前，留出一局部组织样液，以便比照加热资料一：生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖与蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具复原性的半缩醛羟基，因此叫做复原糖；蔗 糖分子内没有，为非复原糖。 可溶性复原糖如葡萄糖、果糖、麦芽糖与斐林试 剂发生作用，可生成砖红色的Cu 2O沉淀。如： 葡萄糖 + 2Cu2+ + 4OH     葡萄糖酸 + Cu 2O砖红色+ H 2O即Cu 2+被复原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。用斐林试剂鉴定复原糖时，溶液变化过程为：浅蓝色棕色砖红色沉淀淀粉遇碘变蓝色直链或紫红色支链。 资料二：脂肪与类脂磷脂、糖脂、固醇脂等统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分，脂类的主要功能是氧化供能。脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞内。苏丹三染液其实是苏丹三固体颗粒溶于高浓度乙醇70%-95%,多用95%配制而成的,而脂肪同样较易溶于高浓度乙醇,所以染色时间长了就会让样品中的脂肪溶解,洗浮色的时候被洗掉,就观察不到了。 在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹，苏丹，苏丹黑及油红O等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。临床上常对组织切片进展染色观察。 资料三：蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反响。蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反响。 资料四：在实验中液体的材料可以直接利用，而有些固体的材料需经过处理后才能用于实验。如苹果、萝卜、梨、西瓜等可以支撑匀浆过滤后利用。一种检测脂肪的方法：取少量生物组织，制成临时装片，用苏丹后者苏丹染色后，用50%酒精洗去浮色，在高倍显微镜下观察。这样即使生物组织中脂肪含量少，显色不明显也能观察到。第 3 页