癌胚抗原(CEA)作业指导书.doc

糖1. 分析原理采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。·第1步：10µl标本、生物素化的抗CEA特异性的单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗CEA特异性的单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。·第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。·第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。仪器通过2点定标曲线以及试剂条码提供的母定标曲线计算出结果。2. 标本要求血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素钠,柠檬酸钠和EDTA-K3抗凝。使用肝素钠和柠檬酸钠抗凝结果要增加10。标本在28度可稳定7天，-20oC可稳定6个月。不要使用加热灭活的标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，8ml。粒子浓度0.72mg/ml。含防腐剂。R1：生物素化的抗CEA单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml，3.0mg/l，磷酸缓冲液100mmol/l，Ph6.0；含防腐剂。R2：Ru(bpy)32+标记的抗CEA单克隆抗体（黑盖），1瓶，8ml。浓度4.0mg/l，磷酸缓冲液100mmol/l，pH 6.5,含防腐剂。校准品：Cal 1 阴性定标液（白盖），2瓶，1ml/瓶Cal 2 阳性定标液（黑盖），2瓶，1ml/瓶两个定标品的CEA的浓度范围约为5ng/ml和50ng/ml，以缓冲液/蛋白为基质。质控品：Elecsys 肿瘤标志物质控品1和2 （PreciControl Tumor Marker）货号11776452其他所需材料：Elecsys E170/E411分析仪Elecsys通用稀释液货号Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号Elecsys E411分析仪 Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号 Elecsys 添加剂液（SysWash）货号11930346 Elecsys适配器 （Adapter for SysClean），货号11933159,Elecsys反应杯（CUP），货号Elecsys加样头（TIP），货号Elecsys E170分析仪 Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号Elecsys 试剂针清洗液（ProbeWash）货号ElecsysPC/CC杯,货号Elecsys反应杯/加针头/废物袋（CUP/TIP），货号Elecsys系统清洗适配器（SysCleanAdapterM），货号4. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批CEA试剂盒必须用新鲜试剂和CEA Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：Elecsys E170分析仪：·一个月（同一批号试剂）· 7天（放置仪器上的同一试剂盒）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行定标：如质控结果超出范围时。5. 操作步骤（以E 170为例）5.1 校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在ApplicationCalib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。进入CalibrationStatus菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、全点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在CalibrationCalibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。 在CalibrationStatus菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。6. 质量控制用Elecsys肿瘤标志物质控品1和2 （PreciControl Tumor Marker）。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7. 计算方法仪器会自动计算标本的浓度（ng/ml或者mIU/ml）。8. 参考范围352例健康人群结果如下：9. 分析性能9.1精密度10. 干扰因素该方法不受黄疸（胆红素<66mg/dl）、溶血（血红蛋白<2.2g/dl）、脂血（脂质<1500mg/dl）和生物素<120ng/ml等 干扰。接受高剂量生物素（>5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（1500U/ml）。26种常用药物经试验对本测定无干扰。CEA浓度高达200000ng/ml也不出现钩状效应。接受过小鼠单抗治疗 或体内诊断的病人会出现假阳性反应。ElecsysCEA测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。11. 临床意义CEA属癌胚胎性抗原，只在胚胎期产生，主要来源于胎儿的胃、肠道和血液。在正常成人的肠道、胰腺和肝组织中也有少量存在。出生后，CEA的形成被抑制，因此，在正常成人的血液中CEA很难测出。患有结肠腺癌的病人，CEA含量通常很高。而在2050%的良性消化系统及肺部疾患中，CEA含量通常不超过10ng/ml。吸烟者也常见CEA升高。CEA测定主要用于指导结肠癌治疗及随访。CEA测定不适用于普通人群的癌症筛查。因为CEA正常不能排除恶性疾病的存在。12参考文献1. Gold P, Freedman SO. Demonstration of tumor-specific antigen inhuman colonic carcinomata. J Exp Med 1965;121:(3)439.2. Thompson JA. Molecular cloning and expression of carcinoembryonicantigen gene family members. Tumor Biol÷1995;16:10-16.3. Hammarström S, et al. Antigenic sites in carcinoembyronic antigen.Cancer Research 1989;49:4852-4858.4. Bormer OP, Thrane-Steen K. Epitope group specificity of siximmunoassays for carcino-embyronic antigen. Tumor Biol 1991;12:9-15.5. Kuroki M, et al. Reaction profiles of seven enzyme immonoassay kits forcarcinoembyronic antigen (CEA) analyzed with purified preparations ofCEA and related normal antigens. Clin Biochem 1992;25:29-35.6. Stieber P, Fateh-Moghadam A. Sensible use of tumor markers.Boehringer Mannheim, Cat. No. 1536869 (Engl.), 1320947(German). ISBN 3-926725-07-9 German/English. Juergen HartmannVerlag Marloffstein-Rathsberg (1993).7. Sell SS. Serological Cancer Markers. Humana Press 1992;ISBN 0-89603-209-4.8. Ballesta AM, Molina R, X, Jo J, Gimenez N. CarcinoembryonicAntigen in Staging and Follow-up of Patients with SolidTumors. Tumor Biol 1995;16:32-41.9. Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes;Pre-analytical Variables. Brochure in: Samples: Fromthe Patient to theLaboratory. GIT-Verlag, Darmstadt 1996:10. ISBN 3-928865-22-6.10. Bablok W, et al. A General Regression Procedure for MethodTransformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26:783-790.编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日