免疫荧光步骤(3页).doc

-免疫荧光步骤-第 3 页免疫荧光步骤1.脱蜡和水化     脱蜡前，应将组织切片在室温中放置60min或60恒温箱中烘烤20min。     1）组织芯片置于二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯后再浸泡10min；    2）无水乙醇中浸泡5min； 3）95%乙醇中浸泡5min；     4）70%乙醇中浸泡5min； （动作要快，减少暴露在空气中中的时间）洗两次各5min。 （整个过程中注意切片不能干） 3.抗原修复，用于多聚甲醛固定的石蜡包埋组织芯片。煮沸热修复电炉或者水浴锅加热柠檬酸钠缓冲溶液（）至95左右，放入组织芯片加热10min，必须等缓冲液冷却后，方能将切片取出。 洗3次每次5min。  5.滴加5%正常山羊血清，室温封闭30min，甩去多余液体。  6.滴加一抗（根据说明书的比例稀释，一般为1:100），室温1小时或者4过夜或者371小时（4过夜后在37复温45min）。   洗3次每次5min。  8.滴加荧光标记的二抗，室温避光孵育1h。（注意抗体针对的种属，使用浓度，用锡箔纸包住培养板放在抽屉中避光。）洗3次每次5min。  10. DAPI染色：把DAPI滴在片上，将切片覆盖，50ul/片，染色10min。 11. PBS洗3次每次2 min。 12.封片： 抗荧光淬灭封片剂封片，再拍照。