动物细胞培养和核移植技术 (2).ppt

关于动物细胞培养和核移植技术 (2)现在学习的是第1页，共47页教学目标教学目标 简述动物细胞培养的过程、条件及应用。 简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。现在学习的是第2页，共47页重点重点 动物细胞培养的过程及条件。 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。难点难点 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。重点难点重点难点现在学习的是第3页，共47页 植物细胞工程常用的技术手段有植物细胞工程常用的技术手段有哪些？哪些？ 那么动物细胞常用的技术手段那么动物细胞常用的技术手段 呢？呢？ 植物组织培养植物组织培养, 植物体细胞杂交植物体细胞杂交问题探讨问题探讨现在学习的是第4页，共47页动物细胞工程：动物细胞工程：动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等动物细胞融合、生产单克隆抗体等 动物细胞培养技术是其他动物动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的细胞工程技术的基础基础教学过程教学过程现在学习的是第5页，共47页 皮肤烧伤，如果创面很小（不大于硬币）只要保持皮肤烧伤，如果创面很小（不大于硬币）只要保持清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。如果下层真皮受损清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。如果下层真皮受损面积较大，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮面积较大，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自烧伤病人自身未烧伤的部位需要的健康皮片，可以取自烧伤病人自身未烧伤的部位（自体植皮），也可取自其他活人或尸体（异体植皮）（自体植皮），也可取自其他活人或尸体（异体植皮）等。自体植皮是永久性的，取自其他人或动物的植皮是等。自体植皮是永久性的，取自其他人或动物的植皮是暂时性的，是在创面愈合过程中为保护创面而采取的措暂时性的，是在创面愈合过程中为保护创面而采取的措施，施，10101414天后就要被身体排斥。天后就要被身体排斥。 如果一个大面积烧伤的病人来说，自体皮肤有如果一个大面积烧伤的病人来说，自体皮肤有限，其他渠道的皮肤来源不足。如何才能获得大量限，其他渠道的皮肤来源不足。如何才能获得大量的自体健康皮肤？的自体健康皮肤？现在学习的是第6页，共47页人耳鼠“人耳鼠人耳鼠”再出风头再出风头 20012001年，一只特别的活老鼠在北年，一只特别的活老鼠在北京引起轰动京引起轰动这是有着一对红眼睛的、这是有着一对红眼睛的、尾巴长长的、浑身没毛的小白鼠。值得尾巴长长的、浑身没毛的小白鼠。值得一提的是，这只小白鼠的背上，竟长着一提的是，这只小白鼠的背上，竟长着一只几乎与身子一般大小的一只几乎与身子一般大小的“人耳人耳”。这只老鼠背上的这只老鼠背上的“人耳人耳”是由上海市第是由上海市第九人民医院副院长、整复外科主任曹谊九人民医院副院长、整复外科主任曹谊林教授利用组织工程技术复制出来的。林教授利用组织工程技术复制出来的。 在京展出的数天，尽管门票高达在京展出的数天，尽管门票高达2020元，但还是有将近元，但还是有将近2020万人，万人，心甘情愿地掏钱一睹心甘情愿地掏钱一睹“人耳鼠人耳鼠”的风采。的风采。 人耳鼠的出现，透露了怎样的信息？现在学习的是第7页，共47页 从动物机体中取出相关的组织，从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。生长和增殖。原理：细胞增殖现在学习的是第8页，共47页 注意关键词: 细胞贴壁细胞贴壁 接触抑制接触抑制 原代培养原代培养 传代培养传代培养现在学习的是第9页，共47页动物细胞培养的过程:现在学习的是第10页，共47页思考题1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？什么成份？没有没有是是成块的组织细胞靠在一起成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖彼此限制了细胞的生长和增殖先用剪刀剪碎先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理后用蛋白酶处理胰蛋白酶水解蛋白质胰蛋白酶水解蛋白质细胞间的成份是蛋白质细胞间的成份是蛋白质现在学习的是第11页，共47页思考题、细胞膜的主要成份是什么？、细胞膜的主要成份是什么？、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？单个细胞要注意什么问题呢？、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？的组织或器官，请解释原因？蛋白质和磷脂蛋白质和磷脂能能注意时间的控制注意时间的控制不能，因为两的最适不能，因为两的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适蛋白酶的最适PH较接近较接近胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛现在学习的是第12页，共47页思考题11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？13、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？易于培养细胞贴壁，进行生长增殖易于培养细胞贴壁，进行生长增殖当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。这样的过程叫做传代培养这样的过程叫做传代培养现在学习的是第13页，共47页思考题14、如何理解原代培养和传代培养？、如何理解原代培养和传代培养？15、传代培养的细胞能一直传代下去吗？、传代培养的细胞能一直传代下去吗？16、有些为何能一直传下去吗？、有些为何能一直传下去吗？17、动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？、动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？18、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养移到其它培养瓶中培养就是传代培养不都能不都能发生突变，朝着癌细胞方向发展发生突变，朝着癌细胞方向发展不是不是保存保存10代以内的细胞，因为代以内的细胞，因为1050部分细胞的细胞核型可能发部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展现在学习的是第14页，共47页动物胚胎或幼龄动物动物胚胎或幼龄动物的组织、器官的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液10代细胞代细胞50代细胞代细胞传代培养传代培养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加培养液加培养液（分解弹性纤维）（分解弹性纤维）原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎细胞株细胞株细胞系细胞系动物组织细胞间隙中含动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。韧性的组织和器官。遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传物质已改变已改变现在学习的是第15页，共47页细胞株：细胞株：原代细胞一般传至原代细胞一般传至1010代左右细胞生长代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40504050代，这种传代细胞为细胞株。代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞系：细胞株传代至细胞株传代至5050代后又出现细胞生代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别：细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。代培养。现在学习的是第16页，共47页 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第原代细胞。培养的第1 1代细胞与传代细胞与传1010代以内代以内的细胞称为原代细胞培养。的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。培养瓶中继续培养，称为传代培养。现在学习的是第17页，共47页现在学习的是第18页，共47页培养器皿动物细胞培养瓶内表面为什么动物细胞培养瓶内表面为什么要光滑、无毒？要光滑、无毒？现在学习的是第19页，共47页三三、培养条件培养条件细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同。 【讨论】【讨论】多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，讨论以多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，讨论以下问题：下问题：1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 提示：充足的营养供给、适宜的温度、适宜的提示：充足的营养供给、适宜的温度、适宜的pH和气体和气体环境。环境。2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 提示：无菌、无毒的环境。提示：无菌、无毒的环境。现在学习的是第20页，共47页1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。）3、温度和、温度和PH 36.5 +0.5度 ；PH为7.2-7.4。4、气体环境：、气体环境： O2和和CO2（95%空气和空气和5% CO2 ）补充合成培养基中缺补充合成培养基中缺乏的物质乏的物质现在学习的是第21页，共47页2）营养）营养培养基培养基： 在保证细胞渗透压的情况下，培养在保证细胞渗透压的情况下，培养液里的成分要满足细胞进行代谢所需要液里的成分要满足细胞进行代谢所需要的各种营养，如包括十几种必需氨基酸的各种营养，如包括十几种必需氨基酸及其他多种非必需氨基酸、维生素、碳及其他多种非必需氨基酸、维生素、碳水化合物及无机盐类等。只有满足了这水化合物及无机盐类等。只有满足了这些基本条件，细胞才能在体外正常存活、些基本条件，细胞才能在体外正常存活、生长。生长。 动物细胞的培养基一般分为天然、合动物细胞的培养基一般分为天然、合成、无血清培养基几种，此外细胞培养成、无血清培养基几种，此外细胞培养还需要一些常用的溶液。还需要一些常用的溶液。现在学习的是第22页，共47页合成合成培养基培养基 1951年厄尔开发了供动物细胞体外生年厄尔开发了供动物细胞体外生长的人工合成培养基长的人工合成培养基(MEM)。合成培养基。合成培养基的种类相当多。合成培养基成分已知，便的种类相当多。合成培养基成分已知，便于对实验条件的控制。但与天然培养基相于对实验条件的控制。但与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用化学成分所替代，因此，细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。然培养基成分，以克服合成培养基的不足。最普遍的作法是加入小牛血清。最普遍的作法是加入小牛血清。 人工合成培养基，如人工合成培养基，如109培养液、培养液、DMEM、199、 RPMI-1640，IMEM，MEM培养液等。培养液等。现在学习的是第23页，共47页天然天然培养基培养基 直接采用取自动物体液或从组织中提取的成分作培直接采用取自动物体液或从组织中提取的成分作培养液，主要有血清、组织提取液、鸡胚汁等。养液，主要有血清、组织提取液、鸡胚汁等。 血清是天然培养基中最有效和最常用的培养成分。血清是天然培养基中最有效和最常用的培养成分。它含有许多维持细胞生长繁殖和保持细胞生物学性它含有许多维持细胞生长繁殖和保持细胞生物学性状不可缺少的未知成分。状不可缺少的未知成分。 使用最普遍的天然培养基是血清，基本以小牛使用最普遍的天然培养基是血清，基本以小牛血清最普遍。血清由于含有多种细胞生长因子、促血清最普遍。血清由于含有多种细胞生长因子、促贴附因子及其多活性物质。与合成培养基合用，能贴附因子及其多活性物质。与合成培养基合用，能使细胞硕利增殖生长。使细胞硕利增殖生长。现在学习的是第24页，共47页 常用的动物血清主要有牛血清和马血清。常用的动物血清主要有牛血清和马血清。牛血清分为牛血清分为胎牛血清和犊牛血清胎牛血清和犊牛血清，前者来，前者来源少，价格高；后者要求刚产下尚未哺乳源少，价格高；后者要求刚产下尚未哺乳的小牛，因为哺乳后的小牛血清中可能含的小牛，因为哺乳后的小牛血清中可能含有更复杂的成分。血清中已知的成分主要有更复杂的成分。血清中已知的成分主要有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等。蛋有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等。蛋白质主要是白蛋白和球蛋白。白质主要是白蛋白和球蛋白。现在学习的是第25页，共47页 氨基酸是细胞合成蛋白质的基本成分，氨基酸是细胞合成蛋白质的基本成分，氨基酸中有氨基酸中有1212种是细胞本身不合成的，种是细胞本身不合成的，必须由培养液提供。激素有胰岛素、生必须由培养液提供。激素有胰岛素、生长激素和多种生长因子如表皮生长因子、长激素和多种生长因子如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、增殖刺激因子成纤维细胞生长因子、增殖刺激因子(MSA)(MSA)、类胰岛素生长因子、类胰岛素生长因子(IGFl(IGFl、IGF2)IGF2)等。等。 水解乳蛋白、胶原水解乳蛋白、胶原是另外两种较好的天然培养基成分。是另外两种较好的天然培养基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解产物，呈蛋黄色粉末状，富含氨水解乳蛋白是乳白蛋白的水解产物，呈蛋黄色粉末状，富含氨基酸。一般配制成基酸。一般配制成0 05 5溶液，微酸性。胶原是从动物真皮中溶液，微酸性。胶原是从动物真皮中提取的，具改善细胞表面特性促使其附着生长的作用。提取的，具改善细胞表面特性促使其附着生长的作用。现在学习的是第26页，共47页无血清培养基无血清培养基 动物血清成分复杂，各种生物大小分子混动物血清成分复杂，各种生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血清对细胞生长很有效，但后期对培养产物清对细胞生长很有效，但后期对培养产物的分离、提纯以及检测造会成一定困难。的分离、提纯以及检测造会成一定困难。另外高质量的动物血清来源有限，成本高，另外高质量的动物血清来源有限，成本高，限制了它的大量使用。限制了它的大量使用。 无血清培养基不加动物血清，在基础培无血清培养基不加动物血清，在基础培养基中加入细胞生长有效因子，激素等。养基中加入细胞生长有效因子，激素等。现在学习的是第27页，共47页（1 1）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。单克隆抗体等。（2 2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。（3 3）用于检测有毒物质）用于检测有毒物质（4 4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据治疗和预防疾病提供理论依据现在学习的是第28页，共47页2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：独特之处有：1、液体培养基、液体培养基 2、成分中有动物血清等、成分中有动物血清等因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体现在学习的是第29页，共47页细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体或组织植物体或组织培养结果培养结果获得细胞获得细胞或细胞分泌蛋白或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育无快速繁殖、培育无病毒植株等病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目现在学习的是第30页，共47页 动物细胞特点？动物细胞特点？ 分化潜能变窄分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。 细胞核仍具有全能性细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性现在学习的是第31页，共47页 根据动物细胞核仍具有全能性的根据动物细胞核仍具有全能性的特点特点,怎样将动物细胞的全能性表达怎样将动物细胞的全能性表达? 利用动物体细胞核移植技术利用动物体细胞核移植技术现在学习的是第32页，共47页 动物核移植： 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。发育为动物个体。 用核移植的方法得到的动物。克隆动物：现在学习的是第33页，共47页核移植的种类核移植的种类胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植体细胞核移植全能性容易恢复容易全能性容易恢复容易全能性容易恢复困难全能性容易恢复困难现在学习的是第34页，共47页卵细胞卵细胞C母绵羊子宫母绵羊子宫母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植胚胎移植胚胎移植早期胚胎早期胚胎多莉羊多莉羊分娩分娩卵裂卵裂融合后的卵细胞融合后的卵细胞细胞拆合技术细胞拆合技术妊娠妊娠多莉羊的培育过程多莉羊的培育过程现在学习的是第35页，共47页现在学习的是第36页，共47页供体细胞（供核）供体细胞（供核）细胞培养细胞培养体细胞体细胞卵巢卵母细胞卵巢卵母细胞（M中期：供质）中期：供质）去核去核无核卵母细无核卵母细胞胞注入注入细胞细胞融合融合重组重组细胞细胞构建重组胚胎构建重组胚胎胚胎移植胚胎移植代孕母体代孕母体生出与供体奶牛生出与供体奶牛遗传基础相同的遗传基础相同的犊牛犊牛现在学习的是第37页，共47页讨论讨论1，什么是克隆，克隆有几个层次？，什么是克隆，克隆有几个层次？2，为什么要采用，为什么要采用M2期的卵母细胞作为受体细胞？期的卵母细胞作为受体细胞？3，为什么要选用传代为什么要选用传代10代以内的细胞作为供体细胞？代以内的细胞作为供体细胞？4，克隆动物是对体细胞供体动物百分百的复制吗克隆动物是对体细胞供体动物百分百的复制吗?5, 动物克隆说明了什么？动物克隆说明了什么？现在学习的是第38页，共47页归纳归纳:1.共分成两大阶段：共分成两大阶段：核移植核移植和和胚胎移植胚胎移植2.取卵细胞作受体细胞的原因取卵细胞作受体细胞的原因是是:它是最大的细胞它是最大的细胞,易操易操作作,它发育可直接表达性状它发育可直接表达性状3.严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质，所以有严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质，所以有两个两个亲本的性状（质遗传亲本的性状（质遗传+核遗传）核遗传）现在学习的是第39页，共47页2.体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术的应用前景现在学习的是第40页，共47页克隆动物的研究意义克隆动物的研究意义1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白2.改良动物品种改良动物品种 3.治疗人类疾病，作为供体治疗人类疾病，作为供体4.保护濒危动物保护濒危动物体细胞核移植技术存在的问题体细胞核移植技术存在的问题1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。常肥胖，发育困难，免疫失调等。2.成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。现在学习的是第41页，共47页知识结构知识结构 动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养动物细胞培养细胞培养的应用和概念细胞培养的应用和概念细胞培养的过程细胞培养的过程细胞培养的条件细胞培养的条件细胞培养技术的应用细胞培养技术的应用动物体细胞核移植动物体细胞核移植技术和克隆动物技术和克隆动物核移植技术和克隆动物的概念核移植技术和克隆动物的概念体细胞核移植技术的过程体细胞核移植技术的过程体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术存在的问题体细胞核移植技术存在的问题现在学习的是第42页，共47页 1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质一定发生改变的细胞（）、在动物细胞培养过程中遗传物质一定发生改变的细胞（） A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞 2 2、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 - - （ ） A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD 3.3.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-（ ） A.A.培养基不同；培养基不同； B.B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。养成植株。A教学反馈教学反馈现在学习的是第43页，共47页 1.动物细胞培养要经过脱分化吗？为什么？ 2.体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？课后习题课后习题现在学习的是第44页，共47页教学参考 1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？ 细胞间的成分主要是蛋白质。胃蛋白酶适宜的细胞间的成分主要是蛋白质。胃蛋白酶适宜的PH约为约为2，当当PH6时，胃蛋白酶就会失去活性，而胰蛋白酶作用的时，胃蛋白酶就会失去活性，而胰蛋白酶作用的适宜环境适宜环境PH为为7.2-8.4，多数动物细胞培养的适宜，多数动物细胞培养的适宜PH为为7.2-7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性。胰蛋白酶在此，胃蛋白酶在此环境中没有活性。胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。化。 2.胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质外，长时间的作用也会消胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。消化时间。 3.单层细胞培养：单层细胞培养：1957年，科学家采用胰蛋白酶消化处理和应用液年，科学家采用胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基的方法，获得了单层细胞培养。单层培养法的出现，对体培养基的方法，获得了单层细胞培养。单层培养法的出现，对细胞培养的发展起了很大的推动作用。细胞培养的发展起了很大的推动作用。现在学习的是第45页，共47页 4.为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质为白蛋白和球蛋白；血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质为白蛋白和球蛋白；氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，有些动物细胞不能合成，必须氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，有些动物细胞不能合成，必须由培养液提供；激素有胰岛素、生长激素等促进细胞的生长、增殖、贴附。因由培养液提供；激素有胰岛素、生长激素等促进细胞的生长、增殖、贴附。因此，细胞培养要保证细胞能顺利生长和繁殖，一般要添加此，细胞培养要保证细胞能顺利生长和繁殖，一般要添加10%-20%的血清。的血清。5.无血清培养：在科学研究中，有时需要明确界定培养液的成分，而血清中由于无血清培养：在科学研究中，有时需要明确界定培养液的成分，而血清中由于含有许多未知成分，会对研究结果有影响，因此，在进行细胞培养时，也可采含有许多未知成分，会对研究结果有影响，因此，在进行细胞培养时，也可采用无血清培养。无血清培养基是在基本培养基中，添加一些已知的促进细胞生用无血清培养。无血清培养基是在基本培养基中，添加一些已知的促进细胞生长和增殖的物质。长和增殖的物质。6.去核方法：目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作去核法。去核方法：目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作去核法。还有人采用其他方法，如梯度离心、紫外光短时间照射、化学物质还有人采用其他方法，如梯度离心、紫外光短时间照射、化学物质处理等。这些方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况下，处理等。这些方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况下，去除细胞核或使卵细胞核去除细胞核或使卵细胞核DNA变性，从而达到去核目的。变性，从而达到去核目的。现在学习的是第46页，共47页感谢大家观看8/23/2022现在学习的是第47页，共47页