保健食品毒理和功能课件.ppt

关于保健食品毒理和功能现在学习的是第1页，共139页主要内容提纲主要内容提纲v 中国保健食品简介中国保健食品简介v 保健食品安全性毒理学检验与评价保健食品安全性毒理学检验与评价v 保健食品新原料安全性毒理学评价原则保健食品新原料安全性毒理学评价原则v 保健食品安全性毒理学评价中存在的问题保健食品安全性毒理学评价中存在的问题v 保健食品功能性检验与评价保健食品功能性检验与评价v 保健食品功能评价方法更改情况保健食品功能评价方法更改情况现在学习的是第2页，共139页第一部分第一部分中国保健食品简介中国保健食品简介现在学习的是第3页，共139页第二部分第二部分保健食品安全性毒理学保健食品安全性毒理学检验及评价检验及评价现在学习的是第4页，共139页主主 要要 内内 容容q 检验评价依据检验评价依据q 审评基本要求审评基本要求q 选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则q 实验动物的选择实验动物的选择q 样品的预处理原则样品的预处理原则q 毒理学试验项目要点介绍毒理学试验项目要点介绍q 毒理学安全性评价时应考虑的问题毒理学安全性评价时应考虑的问题q 审评结论的判定审评结论的判定现在学习的是第5页，共139页毒性及功能检验评价依据毒性及功能检验评价依据19961996年年3 3月卫生部月卫生部保健食品的管理方法保健食品的管理方法 保健食品的标准、功能评价、审批程序和监督管理办法保健食品的标准、功能评价、审批程序和监督管理办法19961996年年7 7月月GB15193GB15193食品安全性毒理学评价程序和方法食品安全性毒理学评价程序和方法 卫生部卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法保健食品功能学评价程序和检验方法 仅包含了仅包含了1212项功能检验及评价方法项功能检验及评价方法20012001年年7 7月月 卫生部卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法保健食品功能学评价程序和检验方法 可受理和评价的功能调整到可受理和评价的功能调整到3131项项20032003年年2 2月卫生部月卫生部保健食品检验与评价技术规范保健食品检验与评价技术规范 将功能学、毒理学、功效成分及卫生指标检验评价方法三者合一将功能学、毒理学、功效成分及卫生指标检验评价方法三者合一现在学习的是第6页，共139页审评的基本要求审评的基本要求1. 1. 配方配方 原（辅）料、用量、理化性质原（辅）料、用量、理化性质2. 2. 剂量剂量 食用方法及用量食用方法及用量3. 3. 工艺工艺 规格化产品规格化产品 符合配方、工艺、质量标准符合配方、工艺、质量标准4. 4. 批号批号 注意批号是否一致注意批号是否一致, ,益生菌、奶制品等保质期短的除外益生菌、奶制品等保质期短的除外现在学习的是第7页，共139页1. 1. 毒理学评价的四个阶段毒理学评价的四个阶段第一阶段：急性毒性试验第一阶段：急性毒性试验 经口急性毒性试验：经口急性毒性试验：LD50LD50，联合急性毒性，一次最大耐受量试验，联合急性毒性，一次最大耐受量试验第二阶段：遗传毒性试验，第二阶段：遗传毒性试验，3030天喂养试验，传统致畸试验天喂养试验，传统致畸试验 遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合AmesAmes或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等第三阶段：亚慢性毒性试验第三阶段：亚慢性毒性试验 9090天喂养试验、繁殖试验、代谢试验天喂养试验、繁殖试验、代谢试验第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则现在学习的是第8页，共139页2.2.无需进行毒性试验的保健食品无需进行毒性试验的保健食品q以普通食品和卫生部规定的药食同源物质为原料生产的；以普通食品和卫生部规定的药食同源物质为原料生产的； 1 1）以传统工艺生产且食用方式与传统方式相同的）以传统工艺生产且食用方式与传统方式相同的 2 2）以水提物配制生产、服用量为原料常规用量，且资料未提示具有）以水提物配制生产、服用量为原料常规用量，且资料未提示具有不安全性不安全性q用已列入营养强化剂或营养素补充剂名单的营养素化合物为原用已列入营养强化剂或营养素补充剂名单的营养素化合物为原料的，如其原料来源、生产工艺和产品质量均符合国家有关要料的，如其原料来源、生产工艺和产品质量均符合国家有关要求；求；选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则现在学习的是第9页，共139页3. 3. 需进行一阶段和三项致突变毒性试验的保健食品需进行一阶段和三项致突变毒性试验的保健食品 属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质且用水提属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质且用水提以外的其它常用工艺生产的：以外的其它常用工艺生产的：（1 1）服用量与常规用量相同）服用量与常规用量相同 急性毒性、三项致突变试验急性毒性、三项致突变试验（2 2）服用量大于常规用量）服用量大于常规用量 还需加做还需加做3030天喂养试验，必要时进行传统致畸试验和天喂养试验，必要时进行传统致畸试验和第三阶段毒性试验第三阶段毒性试验选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则现在学习的是第10页，共139页选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则4.4. 需进行一、二阶段毒性试验的保健食品需进行一、二阶段毒性试验的保健食品 以普通食品和卫生部规定的药食同源物质以及允许用作保以普通食品和卫生部规定的药食同源物质以及允许用作保健食品的物质以外的动植物或动植物提取物、微生物、化健食品的物质以外的动植物或动植物提取物、微生物、化学合成物等为原料生产的保健食品，原则上须进行第一、学合成物等为原料生产的保健食品，原则上须进行第一、二阶段的毒性试验，必要时进行下一阶段的毒性试验。二阶段的毒性试验，必要时进行下一阶段的毒性试验。r卫生部规定允许使用的动植物及其提取物或微生物为卫生部规定允许使用的动植物及其提取物或微生物为原料的。原料的。现在学习的是第11页，共139页5.5.需进行一至三阶段毒性试验的情况：需进行一至三阶段毒性试验的情况：q一、二阶段试验结果与国外产品不一致的一、二阶段试验结果与国外产品不一致的q国外少数国家或地区食用的原料或成分国外少数国家或地区食用的原料或成分q水提取物，大于常规服用量水提取物，大于常规服用量q用水提以外的其它常用工艺生产的，大于常规用量用水提以外的其它常用工艺生产的，大于常规用量选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则现在学习的是第12页，共139页6.6.需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分国内外均无食用先例国内外均无食用先例7.7.敏感指标及敏感试验的保健食品敏感指标及敏感试验的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则现在学习的是第13页，共139页对受试保健食品的要求对受试保健食品的要求q 单一已知化学成分，应提供物理和化学性质单一已知化学成分，应提供物理和化学性质q 多种原料的配方产品，应提供配方多种原料的配方产品，应提供配方q 配方产品，必要时还应提供各组分，功效成分的配方产品，必要时还应提供各组分，功效成分的 q 物理和化学性质及其检测报告物理和化学性质及其检测报告q 提供原料来源、生产工艺、人的可能摄入量。使提供原料来源、生产工艺、人的可能摄入量。使q 用说明书等有关资料用说明书等有关资料q 受试物应符合既定配方和生产工艺的规格化产品受试物应符合既定配方和生产工艺的规格化产品现在学习的是第14页，共139页实验动物的选择及给样量实验动物的选择及给样量1.1.根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物 常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系。常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系。2.2.动物应符合动物应符合实验动物管理条例实验动物管理条例 清洁级或清洁级以上清洁级或清洁级以上 动物合格证号及动物实验室合格证号动物合格证号及动物实验室合格证号3.3.灌胃量灌胃量 大鼠：大鼠：10 ml/kg10 ml/kgBWBW（若以水为溶剂，推荐（若以水为溶剂，推荐 20 ml/kg20 ml/kgBWBW） 小鼠：小鼠：20ml/kg20ml/kgBWBW现在学习的是第15页，共139页样品的预处理原则样品的预处理原则1.1.介质的选择介质的选择 应选择适合于受试动物的溶剂、乳化剂、助悬剂，要求无毒、与受试物不发生应选择适合于受试动物的溶剂、乳化剂、助悬剂，要求无毒、与受试物不发生反应、稳定性好。反应、稳定性好。 常用的介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基纤维素等。常用的介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基纤维素等。2.2.液体类液体类 受试物浓缩倍数应符合试验要求。受试物浓缩倍数应符合试验要求。 浓缩方法不应破坏其有效成份，常用的有浓缩方法不应破坏其有效成份，常用的有60607070减压或常压蒸发、减压或常压蒸发、冷冻干燥。冷冻干燥。 按工艺要求。按工艺要求。现在学习的是第16页，共139页样品的预处理原则样品的预处理原则3.3.袋泡茶类袋泡茶类 处理方法与产品推荐饮用方法相同处理方法与产品推荐饮用方法相同 推荐用：推荐用：80-90 80-90 常压用水浸泡常压用水浸泡30min30min 水量为受试物的水量为受试物的1010倍，提取倍，提取2 2次，次，2 2次提取液合并浓缩至所需浓度次提取液合并浓缩至所需浓度 标明该浓缩液与受试物的比例标明该浓缩液与受试物的比例现在学习的是第17页，共139页样品的预处理原则样品的预处理原则4.4.含乙醇类含乙醇类（1 1）不需浓缩的受试物）不需浓缩的受试物 乙醇浓度乙醇浓度151515 乙醇浓度应调至乙醇浓度应调至1515（2 2）需浓缩的受试物）需浓缩的受试物 乙醇浓度乙醇浓度151515 浓缩后调至浓缩后调至1515乙醇浓度乙醇浓度 在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基现在学习的是第18页，共139页样品的预处理原则样品的预处理原则5.5.膨胀系数较高的受试物膨胀系数较高的受试物 选择可溶性介质选择可溶性介质 给受试物的方法：灌胃给受试物的方法：灌胃 其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的100100倍，按采用实际倍，按采用实际达到的倍数达到的倍数 标明受试物的膨胀系数标明受试物的膨胀系数现在学习的是第19页，共139页样品的预处理原则样品的预处理原则6.6.益生菌等微生物类保健食品益生菌等微生物类保健食品 在进行在进行 AmesAmes试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。 需浓缩的应采用低温干燥法或由企业提供所需浓度的受试物（附方法、技术参数）。需浓缩的应采用低温干燥法或由企业提供所需浓度的受试物（附方法、技术参数）。7.7.以食品为载体的受试物以食品为载体的受试物 （1 1）有营养价值：按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说明。）有营养价值：按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说明。 （2 2）大豆蛋白、乳清蛋白）大豆蛋白、乳清蛋白 如质量、工艺等符合食品标准和安全要求，允许去除。如质量、工艺等符合食品标准和安全要求，允许去除。 如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验。如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验。现在学习的是第20页，共139页毒理学试验项目要点介绍毒理学试验项目要点介绍q 急性经口毒性试验急性经口毒性试验q 鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌（AmesAmes）试验）试验q 骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验q 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验q 小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验q 小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验q 3030天喂养试验天喂养试验现在学习的是第21页，共139页急性经口毒性试验急性经口毒性试验目的：目的：测定测定LDLD5050，毒性分级。了解毒性强度、性质和可能的靶器官，毒性分级。了解毒性强度、性质和可能的靶器官，为进一步的毒性试验提供剂量和观察指标的选择依据。为进一步的毒性试验提供剂量和观察指标的选择依据。原理：原理：急性毒性：经口一次性、急性毒性：经口一次性、24h24h内多次给予，短时间内的毒性反应。致死剂内多次给予，短时间内的毒性反应。致死剂量通常用半数致死剂量量通常用半数致死剂量LDLD5050表示。表示。急性联合毒性：两种或两种以上的受试物，可能发生拮抗、相加或协同的联急性联合毒性：两种或两种以上的受试物，可能发生拮抗、相加或协同的联合方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来确定这三种不同的作用。合方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来确定这三种不同的作用。现在学习的是第22页，共139页急性经口毒性试验急性经口毒性试验时间周期时间周期：一般为：一般为3 3周周 3-53-5天，大、小鼠适应期天，大、小鼠适应期 7-147-14天，染毒及实验观察期天，染毒及实验观察期 发生动物死亡时，应进行大体解剖发生动物死亡时，应进行大体解剖观察和评价指标观察和评价指标：毒性反应症状：各器官系统的异常表现（中枢、自主神经、呼吸、心毒性反应症状：各器官系统的异常表现（中枢、自主神经、呼吸、心血管、胃肠、生殖泌尿系统、皮毛、粘膜等）及体重变化血管、胃肠、生殖泌尿系统、皮毛、粘膜等）及体重变化死亡情况：死亡的时间、数量、性别、表现等。死亡情况：死亡的时间、数量、性别、表现等。大体尸检结果：如果发生死亡动物大体尸检结果：如果发生死亡动物现在学习的是第23页，共139页急性毒性（急性毒性（LDLD5050）剂量分级表）剂量分级表级级 别别大鼠口服大鼠口服LD50， mg/kg相当于人的致死量相当于人的致死量mg/kgg/人人极毒极毒150005000002500现在学习的是第24页，共139页急性经口毒性试验急性经口毒性试验试验结果的判定：试验结果的判定：1. LD501. LD50人可能摄入量的人可能摄入量的100100倍，放弃；反之继续下一倍，放弃；反之继续下一步试验。步试验。2. LD5010g/kgbw2. LD5010g/kgbw或按最大耐受量染毒而未出现动物死亡或按最大耐受量染毒而未出现动物死亡的，可继续下一步试验。的，可继续下一步试验。现在学习的是第25页，共139页鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验）试验目的：目的：检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可能性。检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可能性。 时间周期：时间周期：一般为一般为2 2周周 第一周，鼠伤寒沙门氏菌种、试剂、培养基准备第一周，鼠伤寒沙门氏菌种、试剂、培养基准备 第二周，染毒，培养第二周，染毒，培养48h48h，菌落计数，菌落计数剂量设计：剂量设计：决定受试物最高剂量的因素是对细菌的毒性及其溶解度。最低剂量为决定受试物最高剂量的因素是对细菌的毒性及其溶解度。最低剂量为0.2ug/0.2ug/皿；最高剂量为皿；最高剂量为5mg/5mg/皿，或最大溶解剂量，最大饱和剂量以及最小毒性剂量。皿，或最大溶解剂量，最大饱和剂量以及最小毒性剂量。可设五个剂量组，组间距不超过可设五个剂量组，组间距不超过5 5倍。同时设：阳性对照组，溶剂对照组和未处倍。同时设：阳性对照组，溶剂对照组和未处理对照组。理对照组。现在学习的是第26页，共139页鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验）试验观察及评价指标：观察及评价指标： 各受试物组及三个对照组的四种菌株（各受试物组及三个对照组的四种菌株（TA97aTA97a，TA98TA98，TA100TA100和和TA102TA102）分别在加和不加）分别在加和不加S9S9情况下的菌落计数。情况下的菌落计数。结果评价（掺入法）：结果评价（掺入法）： 受试物组回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数受试物组回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数2 2未处理对照组数），并有剂量反应关系或有可重复的阳性反应，即可未处理对照组数），并有剂量反应关系或有可重复的阳性反应，即可判试验阳性。判试验阳性。现在学习的是第27页，共139页骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验目的目的：检测整体动物体内骨髓嗜多染红细胞微核发生率，以评价受试物致突检测整体动物体内骨髓嗜多染红细胞微核发生率，以评价受试物致突变的可能性。变的可能性。原理原理：微核是在细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞微核是在细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中的色单体或染色体的无着丝点断片核时，仍然留在细胞质中的色单体或染色体的无着丝点断片 。末。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在细胞胞质内，期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在细胞胞质内，因比主核小，故称为微核。因比主核小，故称为微核。现在学习的是第28页，共139页骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验时间周期时间周期：一般为：一般为2 2周周 3-53-5天适应期天适应期 小鼠经口染毒，小鼠经口染毒，30h30h给受试物法给受试物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，镜检取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，镜检剂量设计剂量设计：至少设置：至少设置3 3个剂量，最高剂量组为动物出现严重中毒表现和个剂量，最高剂量组为动物出现严重中毒表现和/ /或或个别动物出现死亡的剂量。低剂量组应不出现毒性反应。一般取个别动物出现死亡的剂量。低剂量组应不出现毒性反应。一般取LD50LD50的的1/21/2、1/41/4、1/81/8作为三个剂量。当受试物的作为三个剂量。当受试物的LD5010g/kg.bwLD5010g/kg.bw时，最时，最高剂量通常采用高剂量通常采用10g/kg.bw10g/kg.bw。同时设阳性对照组和溶剂对照组。同时设阳性对照组和溶剂对照组。现在学习的是第29页，共139页骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物计数每只动物计数10001000个嗜多染红细胞个嗜多染红细胞 ，记录含有微核的细胞数，并，记录含有微核的细胞数，并计算微核千分率。同时观察嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例。计算微核千分率。同时观察嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例。 结果评价结果评价：受试物组与对照组微核率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学受试物组与对照组微核率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。意义，试验结果为阳性。现在学习的是第30页，共139页哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验目的目的：检测受试物对整体动物骨髓细胞染色体畸变的致突变性，：检测受试物对整体动物骨髓细胞染色体畸变的致突变性，以评价其致突变的可能性。以评价其致突变的可能性。原理原理：当受试物作用于细胞周期：当受试物作用于细胞周期G1G1期和期和S S期时，可诱发染色体型畸期时，可诱发染色体型畸变，而作用于变，而作用于G2G2期时则诱发染色体单体型畸变。给动物腹腔期时则诱发染色体单体型畸变。给动物腹腔注射秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体的形成，增加中期分注射秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体的形成，增加中期分裂相细胞的比例，并使染色体丝缩短、分散，轮廓清晰。在裂相细胞的比例，并使染色体丝缩短、分散，轮廓清晰。在显微镜下便可观察染色体数目和形态。显微镜下便可观察染色体数目和形态。现在学习的是第31页，共139页哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验时间周期时间周期：一般为：一般为3 3周周 3-53-5天适应期天适应期 小鼠或大鼠经口染毒小鼠或大鼠经口染毒2-42-4次，每次间隔次，每次间隔24h24h，在末次，在末次染毒染毒18-24h18-24h进行取材（取材前进行取材（取材前2-4h2-4h，腹腔注射秋水仙素）。，腹腔注射秋水仙素）。 取股骨，收集骨髓，制片，染色，镜检取股骨，收集骨髓，制片，染色，镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微核试验：同骨髓细胞微核试验现在学习的是第32页，共139页哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物分析每只动物分析100100个中期相细胞个中期相细胞 ，每个剂量组不少于，每个剂量组不少于10001000个。记个。记录染色体数目及结构的改变。录染色体数目及结构的改变。结果评价结果评价：受试物组与对照组染色体畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计受试物组与对照组染色体畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。学意义，试验结果为阳性。现在学习的是第33页，共139页小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验目的目的：检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体内生殖细检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体内生殖细胞的致突变作用。胞的致突变作用。原理原理：小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及体及X X、Y Y性染色体基因决定精子形态。精子的畸形主要是指性染色体基因决定精子形态。精子的畸形主要是指形态的异常，已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变形态的异常，已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白产物的改变。的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白产物的改变。现在学习的是第34页，共139页小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验时间周期时间周期：一般为：一般为7 7周周 3-53-5天适应期天适应期 小鼠经口连续染毒小鼠经口连续染毒5 5天，于首次给样后的天，于首次给样后的3535天处死天处死动物动物 取两侧附睾，收集精子，滴片，染色，镜检取两侧附睾，收集精子，滴片，染色，镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微核试验：同骨髓细胞微核试验现在学习的是第35页，共139页小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物检查每只动物检查10001000个精子个精子 ，记录精子畸形数目及类型。，记录精子畸形数目及类型。结果评价结果评价：受试物组与对照组精子畸变率相比，增高呈剂量反应关受试物组与对照组精子畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。系并有统计学意义，试验结果为阳性。现在学习的是第36页，共139页小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验目的目的：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评价受试物对：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评价受试物对整体哺乳动物睾丸生殖细胞的致突变性。整体哺乳动物睾丸生殖细胞的致突变性。原理原理：不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感性不同，：不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感性不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过DNADNA复制期，复制期，故在前细线期处理。第故在前细线期处理。第121214d14d采样，以观察作用于前细线采样，以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色体畸变效应。期引起的精母细胞染色体畸变效应。现在学习的是第37页，共139页小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验时间周期时间周期：一般为：一般为7 7周周 3-53-5天适应期天适应期 小鼠经口连续染毒小鼠经口连续染毒5 5天，与首次给样后的天，与首次给样后的12-12-1414天处死动物取材，（取材前天处死动物取材，（取材前6h6h，腹腔注，腹腔注 射秋水仙素）。射秋水仙素）。取两侧睾丸，收集生殖细胞，滴片，染色，镜检取两侧睾丸，收集生殖细胞，滴片，染色，镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微核试验：同骨髓细胞微核试验现在学习的是第38页，共139页小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物分析每只动物分析100100个中期相细胞个中期相细胞 ，记录染色体数目及结构，记录染色体数目及结构的改变（包括断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、的改变（包括断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等）。性染色体单价体等）。结果评价结果评价：受试物组与对照组的断片、易位、畸变细胞率、常染色体受试物组与对照组的断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等差异有统计学意义，试验结果单价体、性染色体单价体等差异有统计学意义，试验结果为阳性。为阳性。现在学习的是第39页，共139页遗传毒性试验组合遗传毒性试验组合试验结果的判定试验结果的判定：如三项致突变试验（如三项致突变试验（AmesAmes试验，微核或骨髓细胞染色体畸变试验，微核或骨髓细胞染色体畸变试验，精子畸形或睾丸染色体畸变试验）中，体外或体内有一试验，精子畸形或睾丸染色体畸变试验）中，体外或体内有一项或以上阳性，一般应放弃该受试物用于保健食品。项或以上阳性，一般应放弃该受试物用于保健食品。如三项试验均为阴性，则可继续进行下一步的毒性试验。如三项试验均为阴性，则可继续进行下一步的毒性试验。现在学习的是第40页，共139页30天喂养试验天喂养试验目的目的：急性毒性试验的基础上，此试验可进一步了解毒性：急性毒性试验的基础上，此试验可进一步了解毒性作用，特别是观察对生长发育的影响，并可初步估计最作用，特别是观察对生长发育的影响，并可初步估计最大观察到的无作用剂量，估计亚慢性摄入的危害性。大观察到的无作用剂量，估计亚慢性摄入的危害性。原理原理： 以不同剂量受试物每日经口给予各组实验动物，连续以不同剂量受试物每日经口给予各组实验动物，连续3030天。染毒期间每日密切观察动物的毒性反应，染毒结束后天。染毒期间每日密切观察动物的毒性反应，染毒结束后进行大体解剖、血生化及病理检查，以此观察重复喂食不进行大体解剖、血生化及病理检查，以此观察重复喂食不同剂量的受试物对动物引起的有害作用。同剂量的受试物对动物引起的有害作用。现在学习的是第41页，共139页30天喂养试验天喂养试验时间周期时间周期：在获得了急性毒性数据后，一般为：在获得了急性毒性数据后，一般为2 2月月 3-53-5天，大鼠适应期天，大鼠适应期 3030天，染毒及实验观察期天，染毒及实验观察期 再进行大体解剖、血液、生化、器官病再进行大体解剖、血液、生化、器官病 理检查。理检查。现在学习的是第42页，共139页30天喂养试验天喂养试验剂量设计剂量设计：至少设三个剂量组和一个对照组。高剂量应能引：至少设三个剂量组和一个对照组。高剂量应能引起动物明显毒效应但不造成动物死亡。低剂量应不出现任起动物明显毒效应但不造成动物死亡。低剂量应不出现任何毒作用，同时在这二剂量之间设几个中间剂量组。何毒作用，同时在这二剂量之间设几个中间剂量组。 对于能获得对于能获得LD50LD50的受试物的受试物：最高剂量为：最高剂量为10102525的的LD50LD50，最低剂量组至少为人可能摄入量的最低剂量组至少为人可能摄入量的3 3倍。倍。 对于不能获得对于不能获得LD50LD50的受试物的受试物：最高剂量为人可能摄入量的：最高剂量为人可能摄入量的100100倍，或按最大灌胃剂量或在饲料中的最大掺入量。倍，或按最大灌胃剂量或在饲料中的最大掺入量。现在学习的是第43页，共139页30天喂养试验天喂养试验观察及评价指标观察及评价指标：一般情况观察一般情况观察：每日的表现、行为、中毒和死亡情况。每周：每日的表现、行为、中毒和死亡情况。每周1 1次体重次体重及及2 2次食物摄入量，计算食物利用率。次食物摄入量，计算食物利用率。血液学指标血液学指标：喂养结束后测定血红蛋白、红和白细胞总数及分类，必：喂养结束后测定血红蛋白、红和白细胞总数及分类，必要时测定血小板或网织红细胞数等指标。要时测定血小板或网织红细胞数等指标。生化学指标生化学指标：喂养结束后测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、：喂养结束后测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、总蛋白、胆固醇和甘油三酯。肌肝、血糖、白蛋白、总蛋白、胆固醇和甘油三酯。病理检查病理检查：大体解剖、脏器称重、组织病理学检查。：大体解剖、脏器称重、组织病理学检查。现在学习的是第44页，共139页30天喂养试验天喂养试验试验结果的判定试验结果的判定： 对于只要求进行一、二阶段试验者，最大未观察到有害作用剂量对于只要求进行一、二阶段试验者，最大未观察到有害作用剂量人可能摄入量的人可能摄入量的100100倍，综合其它试验结果可初步做出安全性评价。倍，综合其它试验结果可初步做出安全性评价。 最小观察到有害作用剂量最小观察到有害作用剂量人可能摄入量的人可能摄入量的100100倍，或观察到毒性倍，或观察到毒性反应的最小剂量组其受试物在饲料中比例反应的最小剂量组其受试物在饲料中比例1010，放弃。，放弃。 在中低剂量组中个别指标与对照组相比有差异，应综合分析，决定取在中低剂量组中个别指标与对照组相比有差异，应综合分析，决定取舍或进行下一步毒理试验。舍或进行下一步毒理试验。现在学习的是第45页，共139页其它试验结果判断其它试验结果判断q 传统致畸试验传统致畸试验： 需大于或等于人摄入量的需大于或等于人摄入量的100100倍。在倍。在5050倍至倍至100100倍之间需进行安全性倍之间需进行安全性评价，小于评价，小于5050倍需放弃。倍需放弃。q 9090天喂养试验、繁殖试验天喂养试验、繁殖试验：1.1.仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分，仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分，需大于或等于人摄入量的需大于或等于人摄入量的100100倍。倍。2.2.国内外均无食用历史的原料或成分时，需大于或等于人摄入量国内外均无食用历史的原料或成分时，需大于或等于人摄入量的的300300倍。在倍。在100100倍至倍至300300倍之间需进行慢性毒性试验，小于倍之间需进行慢性毒性试验，小于100100倍需倍需放弃。放弃。现在学习的是第46页，共139页其它试验结果判断其它试验结果判断q 慢性毒性试验慢性毒性试验： 以以LD50LD50或或3030天喂养试验的最大未观察到有害作用剂量设计受试物各剂量组，未天喂养试验的最大未观察到有害作用剂量设计受试物各剂量组，未见有毒性作用。见有毒性作用。q 致癌试验阳性判定依据致癌试验阳性判定依据：肿瘤只发生在实验组动物，对照组中无肿瘤发生。肿瘤只发生在实验组动物，对照组中无肿瘤发生。实验组和对照组均发生肿瘤，但实验组发生率高。实验组和对照组均发生肿瘤，但实验组发生率高。实验组和对照组肿瘤发生率无明显差异，但实验组发生时间较早。实验组和对照组肿瘤发生率无明显差异，但实验组发生时间较早。符合以上三项中的情况之一，并经统计学处理有统计学意义，可认为致癌试验阳性。符合以上三项中的情况之一，并经统计学处理有统计学意义，可认为致癌试验阳性。现在学习的是第47页，共139页安全性评价的科学性和艺术性安全性评价的科学性和艺术性安全性评价的艺术性安全性评价的艺术性：1.1.动物实验结果外推到人必须考虑动物与人的种属差异；动物实验结果外推到人必须考虑动物与人的种属差异；2.2.安全性标准与社会经济基础、技术能力的相符性；安全性标准与社会经济基础、技术能力的相符性；3.3.安全性标准与社会和公众利益之间的平衡性。安全性标准与社会和公众利益之间的平衡性。结论结论：在对化学物质进行科学地安全性评价之后，应结合试验的局限：在对化学物质进行科学地安全性评价之后，应结合试验的局限性，社会经济状况，人们的生活习惯等因素，对评价结果作出一个合理性，社会经济状况，人们的生活习惯等因素，对评价结果作出一个合理的分析，为卫生标准的制定提供具有实际指导意义的依据。的分析，为卫生标准的制定提供具有实际指导意义的依据。现在学习的是第48页，共139页应综合考虑的问题应综合考虑的问题1.1.试验指标的统计学意义和生物学意义试验指标的统计学意义和生物学意义 在分析试验组与对照组指标统计学的显著性时，应根在分析试验组与对照组指标统计学的显著性时，应根据其有无剂量反应关系及与本实验室的历史性对照值范围据其有无剂量反应关系及与本实验室的历史性对照值范围比较的原则比较的原则, ,来综合考虑指标差异有无生物学意义。来综合考虑指标差异有无生物学意义。2.2.生理作用与毒性作用生理作用与毒性作用 对实验中某些指标的异常改变，在结果分析时要注意区对实验中某些指标的异常改变，在结果分析时要注意区分是生理学表现还是受试物的毒性作用。分是生理学表现还是受试物的毒性作用。现在学习的是第49页，共139页应综合考虑的问题应综合考虑的问题3.3.时间时间- -毒性效应关系毒性效应关系 对由受试物引起的毒性效应进行分析评价时，要考虑在对由受试物引起的毒性效应进行分析评价时，要考虑在同一剂量水平下毒性效应随时间的变化情况。同一剂量水平下毒性效应随时间的变化情况。4.4.特殊人群和敏感人群特殊人群和敏感人群 对孕妇、乳母或儿童食用的保健食品，应特别注意其胚对孕妇、乳母或儿童食用的保健食品，应特别注意其胚胎毒性或生殖发育毒性、神经毒性和免疫毒性。胎毒性或生殖发育毒性、神经毒性和免疫毒性。现在学习的是第50页，共139页应综合考虑的问题应综合考虑的问题5.5.人的可能摄入量较大的保健食品人的可能摄入量较大的保健食品 应考虑给予受试物量过大时，可能影响营养素摄入应考虑给予受试物量过大时，可能影响营养素摄入量及其生物利用率，从而导致某些毒理学表现，而非受量及其生物利用率，从而导致某些毒理学表现，而非受试物本身的毒性作用所致。试物本身的毒性作用所致。6.6.含乙醇的保健食品含乙醇的保健食品 对实验中出现的某些指标的异常改变，在结果分析评价对实验中出现的某些指标的异常改变，在结果分析评价时应注意区分是乙醇本身还是其它成分的作用。时应注意区分是乙醇本身还是其它成分的作用。现在学习的是第51页，共139页应综合考虑的问题应综合考虑的问题7.7.动物年龄对试验结果的影响动物年龄对试验结果的影响 对实验中出现的某些指标的异常改变，要考虑是否对实验中出现的某些指标的异常改变，要考虑是否因动物年龄选择不当所致。因动物年龄选择不当所致。8.8.安全系数安全系数 鉴于动物、人的种属和个体之间的生物学差异，安全系鉴于动物、人的种属和个体之间的生物学差异，安全系数通常为数通常为100100。现在学习的是第52页，共139页应综合考虑的问题应综合考虑的问题9.9.人体资料人体资料 在评价保健食品的安全性时，应尽可能收集人群食用在评价保健食品的安全性时，应尽可能收集人群食用受试物后反应的资料。受试物后反应的资料。10.10.综合评价综合评价 在对保健食品进行最后评价时，必须综合考虑受试物的在对保健食品进行最后评价时，必须综合考虑受试物的原料来源、理化性质、毒性大小、代谢特点、蓄积性、接触原料来源、理化性质、毒性大小、代谢特点、蓄积性、接触的人群范围、食品中的使用范围、人的可能摄入量及保健功的人群范围、食品中的使用范围、人的可能摄入量及保健功能等因素，确保其对人体健康的安全性。能等因素，确保其对人体健康的安全性。现在学习的是第53页，共139页应综合考虑的问题应综合考虑的问题11.11.保健食品安全性的重新评价：很早的毒性评价可保健食品安全性的重新评价：很早的毒性评价可 能因为当能因为当时科学水平和技术条件的限制，现已不适用需重新评价。时科学水平和技术条件的限制，现已不适用需重新评价。12.12.若受试物掺入饲料的最大加入量（若受试物掺入饲料的最大加入量（1010）或液体受试物）或液体受试物经浓缩后仍达不到最大观察到有害作用剂量为人的可能摄经浓缩后仍达不到最大观察到有害作用剂量为人的可能摄入量的规定倍数时，如何综合其它的毒性试验结果进行安入量的规定倍数时，如何综合其它的毒性试验结果进行安全性评价。全性评价。现在学习的是第54页，共139页审评结论的判定审评结论的判定1.1.认可毒理学试验：试验设计合理