常见的几种禽病毒病采样技术(8页).doc

-常见的几种禽病毒病采样技术在防治畜禽疾病中，很多畜禽传染病的临床症状不明显，单凭临床经验是难以做到确切诊断、准确用药，往往因此而贻误了病情。为此，需要通过从病畜或尸体采取病料，进一步做微生物学和血清学化验，查清病原，进而有针对性地采取相应的防治措施，以达到预防、控制和扑灭传染病的目的，同时减少临床工作的盲目性，提高兽医人员的技术水平，保护养殖户的利益。而病料采集、保存、送检的方法是否正确，直接影响到检验的结果和防治工作的开展，故采集检测样品是诊断检测工作的重要内容，另外采样的时机是否适宜，样品是否具有代表性，样品处理、保存、运送是否及时等，都会影响到检验结果的准确性和可靠性。下面就如何正确地采集、保存、送检病料等进行归纳和整理，希望能够对基层兽医和养殖户提供一些借鉴。一、采集原则 1，新鲜、具代表性，且足量：采集死禽样本，夏天6小时之内完成，冬天在24小时之内完成；采集样品的数量要满足诊断检测的需要，并留有余地，以备必要时复检使用。2，减少对病料的污染：在做尸体剖检时，应将尸体浸泡在消毒剂溶液中，防止羽毛及皮屑飞扬对病料造成的污染；病料采集时，对采集病料的器械及容器必须提前消毒，减少因器械或盛放病料的容器对病料的污染；尸体剖开腹腔时，第一时间采取病料，减少病料因暴露于空气中而造成的污染。3，典型采样：选取未经药物治疗、症状最典型或病变最明显的样品，如有并发症，还应兼顾采样。4，合理采样：根据诊断检测的要求，须严格按照规定采集各种足够数量的样品外，不同疫病的需检样品各异，应按可能的疫病侧重采样。对未能确定为何种疫病的，应全面采样。5，安全采样：既要保护采样人员，以要防止病原外泄，还要防止样品受到污染。6，迅速送检：应尽快送实验室进行检测，延误送检时间，会影响到检测质量和结果的可靠性。二、病料的采集方法1，组织和实质器官的采集：剖开腹腔后，必须注意肠管的完整。如需进行细菌的分离培养，要以烧红的手术刀片烫烙脏器表面，使用经火焰灭菌的接种针插入烫烙的部位，提取少量的组织或液体，作涂片镜检或接种于培养基上，进行培养。2，液体病料的采集：采集血液、胆汁、脓肿液、渗出物等液体病料，使用灭菌吸管或注射器，经烫烙部位吸取病变组织的液体，将病料注入灭菌的试管中，塞好棉塞送检。3，全血的采集方法：用灭菌注射器自鸡的心脏或翅静脉采血2-5毫升，注入灭菌试管中。建议加入少量的抗凝剂（3.8%枸橼酸钠0.1-0.5毫升或柠檬酸钠液，配制方法：葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100ml高压灭菌10磅/10分钟。）4，血清的采集方法：用灭菌注射器自禽的心脏或翅静脉采血2毫升，注入灭菌的1.5ml离心管中摆成斜面，待血液凝固血清析出后，将血清吸出注入另一个灭菌试管中，备用。5，肠道及肠内容物的采集方法：选择病变明显部位的肠道，将内容物弃掉，用灭菌生理盐水冲洗干净，然后将病料放入盛有灭菌的30%甘油盐水缓冲液中送检。亦可将肠管切开，用灭菌生理盐水冲洗干净，然后用烧红的手术刀片烫烙粘膜表面，将接种针插入粘膜层，取少量病料接种于培养基上。采集肠内容物则需用烧红的手术刀片烫烙肠道浆膜层，将接种针插入肠道内，吸取少量肠内容，放入试管中或将带有肠内容的肠道两端扎紧，去掉其它部分送检。6，皮肤及羽毛的采集：皮肤要选病变明显部分的边缘，采取少许放入灭菌的试管中送检；羽毛也要选病变明显部分，用灭菌的刀片刮取羽毛及根部的皮屑少许，放入灭菌的试管中送检；采集孵化室的绒毛需用灭菌镊子采取出雏机出风口的绒毛3-5克，放入灭菌的试管中送检。三、各种病料的采集部位表1鸡病毒性疾病主要采集的主要部位疾病名称病原病料采集部位鸡新城疫副粘病毒脑组织、喉头、气管、气囊、肝、脾、肺禽流感A型流感病毒内脏器官、气管粘液、肺、泄殖腔拭子、血液传染性法氏囊病双RNA病毒法氏囊、内脏器官、肠道粘液、泄殖腔拭子、血液传染性支气管炎病冠状病毒气管栓子、肺组织、肾、肝、脾、淋巴组织、输卵管、气管泄殖腔拭子传染性喉气管炎A型疱疹病毒气管渗出物、气管、肺病毒性关节炎禽呼肠孤病毒关节、腱鞘、脾、泄殖腔、气管禽脑脊髓炎禽脑脊髓炎病毒脑、胰淋巴白血病禽白血病病毒血液、泄殖腔拭子、肿瘤组织马立克氏病疱疹病毒血液、肿瘤组织网状内皮组织增殖病网状内皮组织增殖病病毒血液、肿瘤组织、脾鸡传染性贫血病鸡传染性贫血病毒肝、皮肤、脾、心脏、胸腺、肺、法氏囊、肾、骨髓、血液产蛋下降综合征禽腺病毒肝、胰、气管、肺、空肠、盲肠扁桃体、肠内容、输卵管、畸形蛋、变形卵泡、粪便、血液禽痘痘病毒病变组织、口、鼻、咽、喉、食道、气管粘膜的结节鸭病毒性肝炎鸭肝炎病毒肝、脾、病变组织、血液鸭病毒性肠炎疱疹病毒科鸭瘟病毒肝、脾、脑、肺、肾、口腔分泌物、肠道、粪便、血液小鹅瘟鹅细小病毒内脏器官、组织、肠管、粪便、血液四、病料的保存和处理 1，采集的样品应一种样品一个容器，立即密封，防止样品损坏、污染和外泄等意外发生。也可以根据表1将几种适合检测同种病毒的病料合并于一个容器内。2，装样品的容器应贴上标签，标签要防止因冻结而脱落，标签标明采集的时间、地点、号码和样品名称，并附上发病、死亡等相关资料，尽快送实验室。3，根据样品的性状检验要求的不同，作暂时的冷藏、冷冻或其它处理。4，病料采集后，应先存放于冰箱中1-2小时后，再做微生物检验。 五、病料的送检要点 1，在没有条件的情况下，可以采取运送整鸡、鹅或鸭尸体，运送时用浸透消毒液的布包好，装入塑料袋中运送；如果需要长途运输，整个尸体放入冰箱冰冻过夜。2，装在容器中的病料应先密封，然后装入冰桶中运送，放入冰袋运送。3，运送的病料必须标明：送检单位、地址、送检病料的品种、性别、日龄、种类、数量、死亡日期、送检日期、检验目的、送检者姓名，并附临床病例摘要（发病时间、死亡情况、临床症状、产蛋及饮食情况、免疫和用药情况等）。4，运送病料时一定注意病料要低温保存。供病毒学检验的样品，数小时内要送到实验室，只作冷藏处理，超过数小时的要冷冻处理，可将样品放入-30冰箱内冻结后再装入有大小冰块或干冰的冷藏瓶（箱）内运送，亦可将装入样品的容器放入隔热保温瓶内，再放入冰块，然后按100冰块加入食盐约35克，立即将隔热保温瓶瓶口塞紧，瓶内温度可达-21左右。-第 8 页-