医疗器械无菌检查SOP.doc

医疗器械无菌检查SOP1、目的：制定本司所有产品无菌检查操作规程。2、范围：适用于本公司产品无菌检查。3、职责：检验员负责实施，质量部经理监督实施。4、内容4.1 操作要求 4.1.1 与供试液接触的所有器具应采用可靠地灭菌方法，置压力蒸汽锅 内121， 30min 。或置电热干燥箱内160，2h。4.1.2 超净工作台应符合局部洁净度100单向流空气区域要求。无菌室在消毒处理完毕后，应检查空气中的菌落数，方法如下：取培养皿，无菌操作注入融化的培养基约20ml，在35培养48h证明无菌后取3支培养皿在超净工作台平均位置上打开上盖，暴漏30min后置35培养48h后取出检查，3支培养皿上生长的菌落数平均不应超过一个。4.1.3 无菌检查过程中应检查空气中的菌落数，方法同4.1.2.在试验开时打开培养皿盖，至试验结束后盖好置35，培养培养48h，结果应符合4.1.2要求。4.2 培养基配制4.2.1 硫乙醇酸盐流体培养基：称取硫乙醇酸盐流体培养基29.3g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热至沸腾完全溶解，分装试管.121高压蒸汽灭菌15min。4.2.2 改良马丁培养基:称取改良马丁培养基28.5g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管，115，蒸汽灭菌30min。4.2.3 营养琼脂培养基：称取营养琼脂培养基32.0g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角锥形瓶，121，高压灭菌15min。4.2.4 营养肉汤培养基：称取营养肉汤培养基18.0g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热至蒸汽灭菌15min，冷却至常温，备用。4.3 培养基适用性检查4.3.1 无菌性检查：每批培养基随即抽取不少于10支。5支置35，另5支置25培养14天，均应无菌生长。4.3.2 灵敏度检查：培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5 代，（从菌种冷冻中心获取得的冷冻干燥菌种为第0代），试验菌应采用适宜的菌种保存技术进行保存，以保证菌株的生物学特性。 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） CMCC(B)26 003 铜绿假单胞菌 （Pseudomonas aeruginosa) CMCC(B)10 104 枯草芽孢杆菌 （Bacillus subtilis） CMCC(B)63 501 生孢梭菌 （Clostridium sporogenes）CMCC(B)64 914 白色念珠菌 （Candida albicans） CMCC(F)98 001 黑曲霉 （Aspergillus niger） CMCC(F)98 0034.3.3 菌液制备：接种金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，枯草芽孢柑的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，35培养24小时，接种白色念珠的新鲜培物至改良马丁培养基中，25培养48小时。上述培养物用0.9% 的氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬浮液。接种黑曲霉的新鲜培养物至 改良马丁培养基上，28培养5天，加入35ml无菌的含0.05%聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬浮液。菌液在室温下放置应在两小时内使用，若保存在28可在24小时内使用。黑曲霉的悬浮液可保存在28，在验证过的贮藏期内使用。4.3.4 培养基接种：取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，生孢梭菌各2支，另一只不接种，作为空白对照，置35培养3天；取每支装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠，黑曲霉各两支，另一支不接种作为空白对照，置25培养5天。逐日观察结果4.3.5 结果判定：空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管菌生长良好，判定该培养基的灵敏度符合规定。4.4 稀释液，缓冲液及其制备方法4.4.1 0.1%蛋白胨水溶液：取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节PH至7.1±0.2，分装，灭菌。PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液：0.9%氯化钠缓冲液：取氯化钠9.0g加水溶解成1000ml，过滤，分装，灭菌。（仅用于上述两种溶液不适用时使用）4.5 方法验证试验4.5.1 菌种及菌液制备：同培养基灵敏度检查。4.5.2 直接接种法：取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，铜绿假单菌，枯草芽孢杆菌，生孢梭菌，各两管，取符合直接接种用量要求的改良马丁培养基4管，分别接入小于100cfu的白色念珠菌，黑曲霉各2管。其中一管接入每支培养基规定量的供试品量，另一管作为对照，细菌置35，真菌置25培养5天，逐日观察试验菌的生长情况。4.5.3 结果判定：与对照管比较，如含供试品各试管中试验菌生长良好，则说明供试品的改检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检验方法和检验条件下进行供试品的无菌检验。如含供试品的任一试管试验菌生长微弱，缓慢，或者不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量，增加培养基用量，使用中和剂，或灭活剂，或更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法验证试验。4.6 供试品无菌检查4.6.1 供试品数量：同一批号3个单位供试品。4.6.2 浸提介质：9g/L的无菌氯化钠溶液，或其他符合中国药典的缓液和冲洗液。 4.6.3 供试液的制备：优先采用将供试品或其有代表性的部分直接投入培养基内培养。如供试品不适宜直接投放，可按下列方法制备供试液。应使供试液充分充分洗提供试品的浸提表面。供试液制备应按无菌操作进行。在制备后2小时内使用。4.6.3.1 根据供试品的特性选择下列适用方法： a.管类器具：按管内表面积10cm²流过管内腔1ml浸提介质。流量约为10ml/min。 b.容器类器具：容器内已装有液体的可直接抽取容器内液体为供试液，空容器按容器内表面积每10cm²加入浸提介质1ml，振摇数次。4.6.4 接种，对照，培养，观察。4.6.4.1 接种：将供试品分别接种至硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基中，两种培养基接种支数为2:1.分别置于35，25培 养14天，逐日观察结果。4.6.4.2 阳性对照：以金黄色葡萄球菌作为阳性对照，置35培养72h应生长良好。4.6.4.3 阴性对照：供试品无菌检查时应取相对应的稀释液，冲洗液，作为阴性对照，阴性对照不得有菌生长。4.6.5 结果判定 阳性对照管生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。若供试管都澄清，或随显浑浊，但经确证无菌生长，判定供试品符合规定。若供试管中有任何显浑浊并确证有菌生长，则判定供试品不符规定。除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。 试验若经确认无效，应重试，重试时，重新取同量供试品，依法检查,若无菌生长，判定供试品符合规定，若有菌生长，判定供试品不符合规定。 5.相关文件记录 5.1 引用文件 5.1.1 中国药典2010 附录XII A 无菌检查法 5.1.2 GB-T14233.2-2005 第二部分：生物学试验方法 5.2 相关记录 5.2.1 无菌检验记录 5.2.2 培养基适用性检查记录 5.2.3 无菌检查方法验证报告