各种离心机的分离方法！.docx

各种离心机的别离方法!离心机的别离方法：1 .差速沉降离心法：这是普通的离心法。即采用逐渐增加离心速度或低速和高速交替进行离心，使沉降速度不同 的颗粒，在不同的离心速度及不同离心时间下分批别离的方法。此法一般用于别离沉降系数 相差较大的颗粒。2 .密度梯度区带离心法（简称区带离心法）：区带离心法是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡，在一定的离心力下把颗 粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同区带的别离方法。此法的优点是：别离效果 好，可一次获得较纯颗粒；（1）差速区带离心法：当不同的颗粒间存在沉降速度差时（不需要像差速沉降离心法所要 求的那样大的沉降系数差）。在一定的离心力作用下，颗粒各自以一定的速度沉降，在密度 梯度介质的不同区域上形成区带的方法称为差速区带离心法。此法仅用于别离有一定沉降系 数差的颗粒（20的沉降系数差或更少）或分子量相差3倍的蛋白质，与颗粒的密度无关， 大小相同，密度不同的颗粒（如线粒体，溶酶体等）不能用此法别离。离心管先装好密度梯度介质溶液，样品液加在梯度介质的液面上，离心时，由于离心力的作 用，颗粒离开原样品层，按不同沉降速度向管底沉降，离心一定时间后，沉降的颗粒逐渐分 开，*后形成一系列界面清楚的不连续区带，沉降系数越大，往下沉降越快，所呈现的区带 也越低，离心在沉降*快的大颗粒到达管底前结束，样品颗粒的密度要大于梯度介质的密度。 梯度介质通常用蔗糖溶液，其*大密度和浓度可达L28 kg/cm3和60。此离心法的关键是选 择合适的离心转速和时间。（2）等密度区带离心法：离心管中预先放置好梯度介质，样品加在梯度液面上，或样品预 先与梯度介质溶液混合后装入离心管，通过离心形成梯度，这就是预形成梯度和离心形成梯 度的等密度区带离心产生梯度的二种方式。离心时，样品的不同颗粒向上浮起，一直移动到 与它们的密度相等的等密度点的特定梯度位置上，形成几条不同的区带，这就是等密度离心 法。体系到达平衡状态后，再延长离心时间和提高转速已无意义，处于等密度点上的样品颗 粒的区带形状和位置均不再受离心时间所影响，提高转速可以缩短到达平衡的时间，离心所 需时间以*小颗粒到达等密度点（即平衡点）的时间为基准，有时长达数日。等密度离心法 的别离效率取决于样品颗粒的浮力密度差，密度差越大，别离效果越好，与颗粒大小和形状 无关，但大小和形状决定着到达平衡的速度、时间和区带宽度。等密度区带离心法所用的梯 度介质通常为氯化绝CSCI,其密度可达1.7g/cm3o此法可别离核酸、亚细胞器等，也可以 别离复合蛋白质，但简单蛋白质不适用。收集区带的方法有许多种，例如：（1）用注射器和滴管由离心管上部吸出。（2）有针刺穿离心管底部滴出。（3）用针刺穿离心管区带部份的管壁，把样品区带抽出。（4）用一根细管插入离心管底，泵入超过梯度介质*大密度的取代液，将样品和梯度介质 压出，用自动局部收集器收集。