实训等电点沉淀法分离牛乳中的酪蛋白.docx

实训 等电点沉淀法别离牛乳中的酪蛋白任务描述蛋白质是一种亲水胶体，在水溶液中蛋白质分子外表形成一个水化层。另外, 蛋白质又是一种两性离子，在一定pH溶液能够维持一个稳定的状态。但是调节 蛋白质溶液的pH值至等电点时，蛋白质会因失去电荷而变得不稳定，此时假设再 加脱水剂或加热，水化层被破坏，蛋白质分子就相互凝聚而析出。等电点沉淀法 主要利用两性电解质分子在等电点时溶解度最低的原理，而多种两性电解质具有 不同等电点而进行别离的一种方法。牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白含量约为35g/Lo酪蛋白是一些含磷蛋白质的 混合物，等电点为4. 7。将牛乳的pH调至4. 7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇 洗涤沉淀，除去脂类杂质后便可得到较纯的酪蛋白。但单独利用等电点沉淀法来别离生化产品效果并不太理想，因为即使在等电 点时，有些两性物质仍有一定的溶解度，并不是所有的蛋白质在等电点时都能沉 淀下来，特别是同一类两性物质的等电点十分接近时。生产中常与有机溶剂沉淀 法、盐析法并用，这样沉淀的效果较好。本次实训任务的目的是使学生学会运用等电点沉淀法制备酪蛋白，从而掌握 等电点沉淀操作方法；加深对蛋白质等电点性质的理解。任务实施一、准备工作1 .建立工作小组，制定工作计划，确定具体任务，任务分工到个人，并记 录到工作表。2 .收集等电点沉淀法工作中必须信息，掌握相关知识及操作要点，与指导 教师共同确定出一种最正确的工作方案。3 .完成任务单中实际操作前的各项准备工作。(1)材料准备 新鲜牛乳。(2)试剂95%乙醇、乙醛、0.2mol/L醋酸溶液、0. 2mol/L pH 4. 7醋酸- 醋酸钠缓冲液(配制方法如下：先分别配制A液和B液：A液(0.2mol/L醋酸 钠溶液)称取分析纯醋酸钠(NaAc - 3H2O) 27. 22g溶于蒸储水中，定容至1000mL, B液(0. 2moi/L醋酸溶液)称取分析纯冰醋酸(含量大于99.8%) 12. 0 g溶于 蒸储水中，定容至1000mL,取A液885 mL和B液615mL混合，即得pH 4. 7的 醋酸-醋酸钠缓冲液1500 mL)o（3）器具 恒温水浴、普通离心机、精密pH试纸或酸度计、布氏漏斗、抽 滤瓶、外表皿、离心管（80mL）、量筒、烧杯（100mL）、玻棒、电子天平。二、操作过程1 .取30mL鲜牛乳，置100 mL烧杯中，加热至40。在搅拌下慢慢加入预 热至40、pH4. 7的醋酸-醋酸钠缓冲溶液40mL,用精密pH试纸或酸度计检查 pH,再用0.2mol/L醋酸溶液调至pH4.7,静置冷至室温。2 .悬浮液出现大量沉淀后，转移至离心管中，3500r/min,离心lOmin,弃 去上清液，所得沉淀为酪蛋白的粗制品。3 .用40mL蒸储水洗涤沉淀，将沉淀搅起，同上离心别离职，弃去上清液。 加入30矶95%乙醇，把沉淀充分搅起至成悬浊液，将其转移到布氏漏斗中抽滤, 先用30mL 95%乙醇洗涤，再用30mL乙醛洗涤，最后抽干制得酪蛋白。4 .将酪蛋白白色粉末摊在外表皿上风干，于电子天平称重，计算得率（牛乳 中酪蛋白理论含量为3.5g/100 mDo三、结束工作1 .填好所有操作记录、任务单、各种评价表。2 .检查设备仪表是否洁净完好。3 .检查工作场地及环境卫生。4 .进行任务总结。工作反思1 .为什么在牛乳中加入缓冲液后，还要再加几滴0. 2mol/L的醋酸溶液？2 .用乙醇洗涤沉淀时，为什么要充分将沉淀搅起成悬浊液？