小鼠神经功能评分(10页).doc

-小鼠神经功能评分-第 10 页小鼠神经功能评分1神经行为评分在梗死后24 h,按照Masao Shmi izu-Sasamata的方法3对所有大鼠进行神经行为评分,评分标准包括:自主活动的程度,左前肢偏瘫,提尾时左前肢伸不直,抗侧推能力,向左倾斜度,向左环行度,对触须的反应。以上指标无异常为0分,中等异常为1分,严重异常为2分,将各项评分相加,总分为014分。2动物行为学评定0分:无神经损伤症状;1分:不能完全伸展对侧前爪;2分:向瘫痪侧转圈;3分:向对侧倾倒;4分:不能自发行走,意识丧失。3大鼠神经损伤严重缺损评分（Neurological Severity Scores,NSS）：0分:神经功能正常;1分:轻度神经功能缺损(提尾时左前肢屈曲);2分:中度神经功能缺损(行走时向左侧转圈);3分:中度神经功能缺损(向左侧倾斜);4分:无自发行走，意识减退;5分:与缺血有关的死亡。4. 平衡木试验(Beam Balance Test, BBT):把大鼠置于一宽1.5cm的木条上。木条一端悬空，另一端固定于一块40x40cm的平板中心，以防止大鼠从木条上爬到桌面上使实验失败。木条下备有软垫以防大鼠掉下时跌伤。根据2分钟内大鼠的平衡能力行神经学评分。正常大鼠的平衡能力在1-2分钟。平衡试验评分标准：1在木条上站稳，无摇晃，持续2分钟2在木条上站稳，左右摇晃，未滑下，持续2分钟3在木条上站立，下滑至一侧，未掉下，持续2分钟4在木条上站立不到2分钟即从木条上掉下5试图在木条上站稳、但在数秒钟即掉下6无任何站立能力5. 抬高身体摇摆试验（Elevated Body Swing Test, EBST）：用于测量运动不对称，EBST测量时首先用手提起大鼠的尾根部，大鼠头部悬垂距平面5cm左右，这时大鼠头部会向左侧或右侧旋转，向单测旋转的角度大于100时为计数的标准，记录旋转的方向和角度，一次试验后让大鼠休息1min，再进行下一次实验，重复试验20次，记录总的次数和方向。6. 一次性被动回避平台试验(Step-down Passive Avoidance Test, SDPAT)是一种用于研究记忆的简单行为模型，主要适用于研究记忆的巩固( memory consolidation)和记忆的保持(memory retention)。该模型含有一定的空间记忆成份，试验箱是一个长方形的封闭空间，高为60cm，箱内有一较小的平台9 cm X 9 cm, 高出底面约2 cm，动物只能不十分舒服地坚持在平台上，如跑下平台(铜棒，通电，30 V)即遭到电击。训练过程是这样的:首先把动物放在平台上，大鼠一般在平台上只能停留几分钟，就会跑下来，但由于底面的金属条是通电的，大鼠在寻找一段时间后，能够找回平台。这时第一次试验结束，24 h后，再次把大鼠放在平台上，这时底面的金属条并不通电，记录大鼠在平台上滞留的时间，根据测试间隔时间的长短和在平台上滞留时间的多少来判定大鼠对上次电击的记忆保持能力。7. 水迷宫试验(Water Maze Test, WMT)：用于测量大鼠空间学习能力。每组于移植后的第7周进行。在相同室温（25±2）0C和象限条件下，将3组动物连续训练4d，2 次/d，每次限定时间为120s，超过120s 仍找不到平台者记为未找到平台，2 次间隔为10min，第5天测试。Bederson评分四个功能等级：0分：无神经损伤症状1分：悬尾实验不能完全伸展对侧前爪2分：前肢抵抗对侧推力能力下降？3分：向对侧转圈小鼠脑缺血神经功能障碍行为学评价的研究进展 缺血性脑卒中是一种高发病率、高致残率及高 致死率的疾病。 在脑缺血及脑缺血再灌注损伤的 研究中，最常使用大鼠或者小鼠的可逆性大脑中动 脉阻塞（ ，） ，因此小鼠 模型在研究脑缺血及再灌注损伤病理生理变 化及基因表达方面有着更大的优势 脑梗死体积与神经功能缺损的行为学评价是判定脑缺血严 重程度的重要指标，许多研究报告对大鼠的行为学 评价进行了阐述 ，而对小鼠的研究较少，其评价指标大多移植于大鼠的评价体系，至今为止，还没 有对这一系列的综合性评价达成共识，不仅有许多 不同的测试在使用，而且所应用测试的数量和频率 也没有统一的标准。 本文对小鼠脑缺血神经功能 损伤评价方法包括感觉功能、运动功能、学习能力 以及综合性评价做一综述。1.感觉功能评价 小鼠 模型中，感觉功能的缺失是对其神 经功能判定的一个可靠的指标 目前最常用的是 墙角试验（ ），最先由 改良，具体操作是将两个尺寸为 的纸板呈夹角放置，将 小鼠置于夹角之间，进入夹角深部，双侧的触须受到刺激后会站立并转身面向夹角的开口端。 正常 小鼠从右面或左面转身的概率基本相等，而一侧脑 损伤小鼠会优先向脑损伤侧转身。 墙角试验可以 准侧检测出感觉功能障碍，甚至 后的轻度局灶性脑缺血，特别是在纹状体发生缺血时。 此实验简 单易行，应用广泛，但 认为墙角试验对感觉功能恢复程度的检测不敏感，可能是因为这项试验 是对感觉和运动功能的综合评价，需要两种功能都 较好的恢复后才能检测出来，而且不能准确反映单 侧肢体的运动功能变化。 粘签试验（ 又称感觉不对称试验，用来确定皮肤敏感性和感觉功能的整合性。 缺血发生在大脑皮层的感觉区、皮质脊髓束和纹状体时，感觉功能发生明显缺失。 具体方法是将直径 的圆形背胶标签贴附在小鼠相对无毛的手腕 处，当回到饲养笼时，一个正常的小鼠会用牙齿迅 速除掉每个圆形标签，而发生脑缺血的小鼠首先除 掉附着在正常前肢的标签，然后是病变的一侧，并 需要花费更多的时间，缺血性病变导致了感觉功能 的不对称性 此外，时间的延迟还表明运动功能的缺失，嘴和前肢运动障碍导致去除粘性标签相对 困难。 后续的测试可以通过逐步增加患侧所粘标 签的大小并减小健侧的标签大小，直到患侧肢体所 受的的刺激变得比健侧的更突出，小鼠就开始首先 从患侧的肢体消除刺激 该方法主要用于对多种病因导致的前肢感觉、皮质运动区损伤后的功能 评价，与人类顶叶受损后对侧肢体的忽视症状类似。 圆筒试验（ 又称肢体不对称使用试验，最早应用于大鼠的行为学评价 通过改良用来评估小鼠前肢使用和旋转的对 称性，当小鼠一侧的感觉皮层、皮质脊髓束、纹状体 受到缺血损害时前肢的使用发生不对称性，进一步 观察会发现离散运动障碍和协调运动也相继发 具体操作是将小鼠放置在一个直径，高 度 的透明圆桶内。 当小鼠后腿站立时，分别 记录最初左前肢、右前肢及两侧前肢同时碰触筒壁 的次数。 当一侧前肢（如右侧）碰触筒壁后，另一侧 前肢（左侧）在右侧未移开时也碰触到了筒壁，记录 一次右侧和一次同时碰触。 当两侧前肢交替碰触 筒壁时，记录为同时碰触，共进行 次重复试验。 最终得分（右前肢的运动 左前肢运动） （右前 肢运动左前肢运动） 。 得分越高说明两侧 肢体的不对称程度越明显。 这种评分方法即使对 于没有经验的评价者也有较高的可信度。 运动功能评价 运动功能的不协调性和伴随出现的的代偿反 应是人类中风的突出特点。 大部分脑缺血的动物 模型都会在行走、转弯和游泳等运动中出现相应的 功能障碍。 在 年建立了一种大 鼠以前肢通过窄缝抓取食物的评价方法，称为伸爪 试验（ 该方法可评价单侧肢体的运动功能， 区分肢体损伤与修复的细小差 ，还可以用来评估感觉运动皮层和皮质脊髓束 的功能缺失 ， ，对小鼠同样适用。 伸爪实验盒用 透明玻璃制成，长宽高分别为 ， 和 ， 在盒的前壁正中央开一条宽度为畅 狭长的缝 隙，缝隙底部前壁的外侧有放置食物片的凹槽，迫 使小鼠从缝隙处伸出患侧前肢抓取食物。 正常小 鼠可从缝隙处伸出前肢，抓取并吃到凹槽内的食 物；而脑缺血后的动物不能完成。 定的反映脑缺血慢性损伤变化，对动物伸爪、抓食及吃食过程可作细致的轨迹分析，进而发现更多的 变化特征 烟囱试验（ 最早由 改良，具体发方法是在一根 长 ，直径 的透明玻璃管的 一个记号，水平放置，将小鼠放置于入口处，当其爬至管底时，将玻璃管垂直放置，使其头朝下，正常状 态下小鼠会通过快速反应学会倒着走路，到达标记 处所需的时间最长不会超过 ，而发生脑缺血后 所用时间会明显延长，此实验常用来测试小鼠的运 动协调性。 立柱试验（ ）主要对前肢 的力量，抓握能力和平衡性进行评估 提出并改进了评分方法，将一根长 英寸、直 径畅 英寸的木棍用胶带缠绕，以增加摩擦力，水 平放置后将小鼠放在木棍中央，将木棍慢慢抬起直 至与地面垂直，记录小鼠在木棍上的时间，评分标 之间；， 时间 ， 提出的前肢踩 空试验（ ）也可用于前肢运动功能的评 价，将小鼠放置在不同尺寸的 边行的铁丝网上，小 鼠在铁丝上行走，在此过程中会出现踩空或踩滑现 象，记录前肢总共行走的次数以及踩空的次数，踩 空的次数越多表明小鼠脑损伤越大。 爬板试验 是将小鼠置于一块包有铜 丝网的有机玻璃平板上，先保持平板在水平位置， 后逐渐将平板竖起，至小鼠不能攀爬而从平板上落 下，记录此时平板轴线与水平面之间的角度，即爬 板角度，重复三次取平均值。 爬板试验用于评价整 体协调功能，也是一种简便且可定量的指标，但是， 该指标变化的恢复较快，仅能用于 内的急性功能损伤。 为了提高神经功能行为评价的准确性及可信 度，近年来各种发明及改良的装置、软件层出不穷。 旋转加速试验（ 首先用于研究神经系统功能的运作，后来才在脑损伤如脑缺血 的研究中广泛应用 ，主要用来评估脑缺血动物运 动的平衡和协调能力。 在研究中将其 称为“旋转跑步机测试”，动物放置在直径 形转盘的中央，转盘与一个可调节速度的转轴连接，实验开始后转轴在 分钟内从 加速到 记录小鼠在圆盘上的时间，最大分值为，脑缺血的严重程度与得分成反比。 为了排除试验中可能 出现的偶然情况，每只动物可做 次测试，取平均值 作为最终得分。 此法操作简单，可行性大，且灵敏 度较高。 旷场试验（ ）需要一旷场实验敞 箱的装置 ，木质，周壁及底面涂黑，底面由面积相 等（ ）的方格组成，将小鼠放入旷场正中 格，用摄像系统记录动物 的行为变化，包括水 平运动、垂直运动及粪便粒数，数据用相应的统计 软件分析。 该试验不仅可以用来评价小鼠的运动 功能，也可用粪便粒数反应动物的焦虑状态 挂试验（ 最早开始于大鼠的行为学评价，后经 的改进成功应用于小鼠， 该试验 是将小鼠尾部 处用胶带粘贴悬挂于 墙上，用摄像设备记录小鼠 内在墙上运动情 况，输入计算机保存图像。 用计算机软件处理平均 角、优势角和转动次数等参数，并计算出相对转动 悬挂试验可以反映小鼠的偏瘫症状、运动和平衡能力，与梗死面积有较好的相关性，可客观的反 应脑缺血损伤及神经症状 学习与记忆能力评价人类脑卒中的发生经常伴随着认知与记忆功 能障碍，因此在脑缺血的动物模型中也需要对认 知、记忆功能进行检查。 常用的评估方法包括水迷 宫和跳台试验。 水迷宫最初由 提出，最 先应用于大鼠的认知功能评价，后来发现它对小 和人类 同样适用。 将测试小鼠放置于直径 的游泳池中，通过其视觉记忆找到隐藏于水下 的平台，如果找不到，表明其记忆受损，其损伤程 度可用找到平台所需的时间进行量化，平台的位置 也可每天变化。 当小鼠的前额叶皮层、纹状体、小 脑受损伤时测试结果明显，对海马损伤尤其敏感。 水迷宫操作简单，可信度高，在国内外使用较多。 旋臂迷宫试验（ ）可用于评估脑缺血 动物的学习和记忆功能障碍，同样对海马的损伤尤 为敏感 其实验装置包括一个中央平台及由平台向四周突出的八个或十二个径向臂 试验开始之前，将食物放置在某一径向臂的末端，动物需 禁食一段时间，以保持一定的觅食动力。 试验将小 鼠放置在平台上，依靠其空间感来寻找食物，完成 任务后将其放回平台中央，依靠记忆功能重新寻找 食物，为了增加困难，可将食物放在其他径向臂的 末端，记录犯错误的次数。 实验结果表明脑缺血小 鼠的学习与记忆障碍明显。 跳台测试（ 需要用到小鼠跳 台仪，此装置用黑色有机玻璃分割成 间，箱底放置 铜栅，每间右后角置一高 ，直径 的橡皮垫 作为动物逃避电击的安全区，实验时小鼠放置在橡 皮垫上，通 交流电，小鼠跳至铜栅上时会受到电击，正常反应是跳回安全区以躲避电刺激。 时间 持续 ，记录每只小鼠受到电击的次数作为记忆 成绩。 此实验受人的主观意识影响较小，能够客观 的评价小鼠记忆能力。 此外，测试小鼠学习记忆能 力的方法还有避暗试验、 形迷宫试验、穿梭箱试验 和高架十字迷宫试验等。 综合性评价 国际脑卒中治疗临床前研究指南（） 出，在脑缺血治疗药物研究中，多重指标综合评价很重要，各种行为学的结果都应该评价 目前，国内外 主要采用 五分法 对小鼠进行综合 性评分（以右侧脑缺血为例），即 分，无明显神经 功能损害症状； 分，左肢体不能完全伸展； 分，行走时向右侧倾倒；，不能自发行走； 分，死亡。 另外 提出的 级评分方法和以后改良的 分法 的症状 评分法也被大多国内外研究者采用，上述两种评分 方法操作简单，节约时间，但都存在主观性较大，结果不够客观的缺点，并且评价不够全面，评分不够 细致。 评分 分别从局灶性功能损伤和一般 功能损伤两个角度对小鼠的感觉运动功能进行了 综合性评价，总分为 分，它通过对毛发、耳朵、眼 睛、体态等细微的观察，以及步态、攀爬、身体对称 性、自主运动和癫痫发作的测试进行了评价，并且 与脑梗死体积的比例具有良好的的相关性。 评分 与 评分相似，最早应用于大鼠，是 对大鼠的运动功能和感觉功能的综合性评价，经过 改良，也可对小鼠进行评价。 综上所述，缺血性卒中引起的脑损伤通常与运 动、感觉和认知功能障碍等相关，实验研究主要集中于评估与脑缺血动物模型相关的行为和认知上 的改变。 迄今为止，还没有一种单一的评价标准被普遍承认，大多数实验研究都采用多种不同的评价 方法对缺血效果进行综合评价。 神经行为学评价 是一门不断发展的科学，现有的测试也正在不断的 改进中。 上述各项神经功能评分均不同程度地反 映了小鼠脑缺血后感觉功能、运动功能和认知功能 障碍及后期恢复的程度，可作为造模是否成功的标 每项评价都具有优缺点和侧重点，可以根据实验需要进行选择或搭配使用，保证实验的顺利进行 和结果的可靠性与真实性。