茶叶中茶多酚含量测定工作方案.doc

茶叶中茶多酚含量测定工作方案一、 紫外分光光度法1. 实验原理在一定PH条件下，酒石酸铁能与多酚类物质反应形成蓝紫色络合物，该络合物在540nm波长下具有最大吸光度。用分光光度法测定其含量2. 仪器试剂1) 仪器名称数量紫外分光光度计1台电子天平1台电炉1个烧杯（100mL）5个烧杯（500mL）2个量杯（50mL）1个容量瓶（100mL、250mL）各1个比色管（50mL）7个比色皿1个吸量管（2mL、5mL、10mL）各1根胶头滴管1个2) 试剂A. 酒石酸亚铁溶液:称取1.0g 硫酸亚铁()与5.0 g 酒石酸钾钠()，用水溶解并定容至1L（低温保存有效期10天)。B. PH=7.5 磷酸盐缓冲液1/15mol/L磷酸氢二钠:称取23.9 g 十二水磷酸氢二钠()，加水溶解后定容至IL。1/15 mol/L磷酸二氢钾:称取经110烘干2h的磷酸二氢钾()9.08 g,加水溶解后定容至1L。取上述 1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液85mL与1/15mol/L的磷酸二氢钾溶液15mL混合均匀。3. 工作步骤1) 试样的制备与测定：称取磨碎茶叶试样0.1g(准确至0.0001g) ，置于小烧杯中，加温水30mL，溶解冷却，注入100mL容量瓶中，定容、摇匀、过滤，弃去初滤液约20mL，剩余的滤液为试液【1】。取试液【1】 2mL于50mL比色管中，加酒石酸铁10mL摇匀，用PH=7.5的磷酸盐缓冲液定容。取2mL蒸馏水于50mL比色管中，加酒石酸铁10mL摇匀，用PH=7.5的磷酸盐缓冲液定容作为空白对照，于540nm处用1cm比色皿测定吸光度值。2) 标准系列溶液的配制与测定：称取茶多酚纯品0.2500g，加水溶解定容至250mL，混匀，即为每毫升含1mg茶多酚的标准溶液。分别称取标准溶液0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL于一组50mL比色管中，各加水至10mL，再加酒石酸铁溶液10mL，用PH=7.5的缓冲液定容至刻度，混匀后用1cm比色皿，以试剂空白作参比，于波长540nm处测定吸光度，绘制出标准曲线。4. 数据计算茶叶中茶多酚的含量以干态质量分数表示，按下式计算：茶多酚 ( % ) =式中：试液的总量,mL测定时的用液量,mL试样的质量，gm试样干物质含量，%;A试样的吸光度二、 高锰酸钾直接滴定法1. 工作原理茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。根据消耗1ml0.318g/ml的高锰酸钾相当于5.82mg茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。2. 仪器试剂1) 仪器分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500ml白瓷皿。2) 试剂A. 0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50ml，冷却后用蒸馏水定容至1000ml，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50ml，在80烘箱或水浴中加热磺化46h，用蒸馏水定容至1000ml，过滤后贮于棕色瓶中。B. 0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000ml。C. 高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000ml。准确吸取0.630%草酸溶液10ml，放入250ml锥形瓶中（平行2份），加入蒸馏水50ml，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10ml，摇匀，在7080水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边颠边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。按下式计算高锰酸钾溶液的浓度：（kMnO4浓度，%）= 3. 工作步骤1) 供测试液的准备：准备称取茶叶磨碎样品1g，放在200ml三角烧瓶中，加入沸蒸馏水80ml，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100ml容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100ml，摇匀。2) 测定：取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入0.1%靛红溶液5ml，再加入供测试液5ml，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。同时做空白测定。4. 结果计算X= X茶多酚的含量，%B空白消耗的高锰酸钾毫升数，mlA样品消耗的高锰酸钾毫升数，ml-高锰酸钾的浓度，%m样品的质量gV1测定用供测试液的体积，mlV2-供测试液的体积，ml第 5 页