2022年医学分子生物学资料总结 .docx

精品_精品资料_医学分子生物学资料总结一、名词说明1、质粒 是细菌细胞内携带的染色体外的DNA分子,是共价闭合的环状DNA分子,能独立进行复制.质粒只有在宿主细胞内才能够完成自己的复制.2、基因 指贮存有功能的蛋白质多肽链或RNA序列及表达这些信息所需的全部核苷酸序列,是核酸分子中贮存遗传信息的遗传单位.3、癌基因 是细胞内掌握细胞生长和分化的基因,具有潜在的诱导细胞恶性转化的特性, 它的结构反常或表达反常,可以引起细胞癌变.4、基因克隆 是指把一个生物体的遗传信息（基因片段）转入另一个生物体内进行无性繁衍,得到一群完全相同的基因片段,又称DNA克隆.5、抑癌基因 是指存在于正常细胞内的一大类可抑制细胞生长并具有潜在抑癌作用的基因,当这类基因在发生突变、缺失或失活时可引起细胞恶性转化而导致肿瘤发生.6、基因诊断 是以 DNA和 RNA为诊断材料,通过检查基因的存在、缺陷或表达反常,对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程.7、管家基因 是在生命过程都是必需的,是在一个生物个体的几乎全部细胞中连续表达的基因,它较少受环境因素的影响,其表达方式为组成性基因表达.外切酶活性,它具有的3 5外切酶活性能保证DNA复制的精确性,把DNA合成过程中8、klenow 片段亦称 DNA聚合酶 1 大片段,为 DNA聚合酶 I 经枯草杆菌蛋白酶裂解后产生的大片段,它除了保留5 3聚合酶活性及 3 5外切酶活性外,失去了5 3错误配对的碱基去除,再把正确的核苷酸接上去.9、核蛋白体 系 rRNA 与蛋白质结合生成的一种复合体,是蛋白质生物合成的场所.10、限制性内切核酸酶能识别 DNA 的特异序列,并在识别位点或其邻近切割双链DNA 的一类内切核酸酶, 是基因克隆中最重要的工具酶,通常所说的限制酶是指2 型酶. 主要从原核细胞中提取,大多数限制性内切酶是错位切割双链DNA,产生粘性末端,部分酶就沿对称轴切割 DNA而产生平端.11、Tm值 DNA变性是在一个相当窄的温度范畴内完成的,在这一范畴内, 紫外吸取值达到最大值的 50%时的温度称为 DNA的解链温度,又称融解温度（Tm）,其大小与 G+C含量成正比.或 : 双链 DNA变性一半所需要的温度叫DNA的融解温度 .12、DNA的甲基化 是指 DNA的一级结构中, 有一些碱基可以通过加上一个甲基而被修饰, 其作用是对自身 DNA产生爱护作用.13、原位杂交 是核酸保持在细胞或组织切片中,经适当方法处理细胞或组织后,将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交的方法.14、DNA微陈设 系直接将大量DNA探针以显微打印的方式有序的固化于支持物表面所组成的微陈设（基因芯片）称为DNA微陈设. .可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_15、次序作用元件 是指那些与结构基因表达调控相关,能被基因调控蛋白异性识别和结合的 DNA序列 , 抱括启动子 . 上游启动子元件 . 增强子 . 加尾信号和一些反应元件.16转位因子 是指能够在一个 DNA分子内或 2 个 DNA分子之间移动的 DNA片段.17、基因治疗 - 是指通过在特定靶细胞中表达该细胞原来不表达的基因,或采纳特定方式关闭和抑制反常表达基因,达到治疗疾病目的的治疗方法.二、综合内容1 、DNA的结构、性质及特点一级结构是指 DNA分子中核苷酸的排列次序,二级结构是指两条DNA单链形成的双螺 旋结构、 三股螺旋结构和四股螺旋结构.三级结构是指双链DNA进一步扭曲回旋形成的超螺 旋结构. DNA一级结构的基本特点：4 种脱氧核糖核苷酸以3, 5磷酸二酯键相连, 形成长链, 链中的脱氧核糖和磷酸都是相同的.组成 DNA的碱基有腺嘌呤 （ A）、鸟嘌呤（ G）、胞嘧啶（ C）和胸腺嘧啶（ T）. DNA是由两条单链结合在一起形成的双链分子,两条单链都是由 A、T、G、C以千变万化的排列组合而形成的.大多数生物的遗传信息都是储存在DNA 分子中. DNA分子主要携带两类遗传信息,即有功能活性的DNA序列所携带的信息和调控 信息. DNA二级结构是指 DNA的双螺旋结构,其特点为：脱氧核糖与磷酸交替排列构成了DNA主链.两条脱氧核苷酸链是反向平行排列,一条是5 3方向,另一条为3 5 方向. 以右手方向盘绕成双螺旋构型.A 配 T,G配 C.生物体的闭环 DNA都以超螺旋形式存在,如细菌质粒、一些病毒、线粒体的DNA等.2 、RNA的结构、功能、特点由 4 种基本的核苷酸以3, 5 - 磷酸二酯键连接而成的长链,碱基中没有T,而为尿嘧啶（ U）.分为 mRN（A信使 RNA）,tRNA（转 RNA,转运氨基酸） 和核蛋白体 RN（A rRNA）.mRNA结构特点：不稳固、代谢活跃,更新快速,寿命短.原核生物mRNA具有操纵子结构,主要是多顺反子, mRNA5 端无帽子结构, 3端一般无多聚A 尾巴,没有修饰碱基.真核 mRNA5 端有帽子结构、 3端大多有多聚腺苷酸尾巴、分子中可能有修饰碱基,主要有甲基化、有编码区和非编码区.tRNA 的结构特点及作用：作用：在蛋白质合成过程转运氨基酸,参加蛋白质的翻译.一级结构含有稀有碱基如DHU, 3端为 3 个同样的核苷酸序列（CCA）序列, 此序列是 tRNA 结合和转运安基酸而生成氨酰tRNA 所必需的. 5端为 G、具有 T C. 二级结构为三叶草形,三级结构为倒L 形. C 、rRNA 即核蛋白体 RNA：为细胞内含量最丰富 的 RNA,约占细胞总 RNA的 80%以上 , 参加组成核蛋白体, 作为蛋白质生物合成的场所.原核生物核糖体的沉降系数为70S,由 50S 和 30S 两个大小亚基组成, 30S 小亚基含 16SrRNA和21 种蛋白质 ,50S 大亚基含 23S 和 5SrRNA以及 34 种蛋白质.真核生物细胞核糖体的沉降系数为 80S,由大小亚基组成, 40S 小亚基含 18SrRNA 及 30 多种蛋白质, 60S 大亚基含 3 种rRNA28S.5.8S.5S以及大约 45 种蛋白质. hnRNA即核内不均 -RNA,为真核生物转录生成的 mRNA前体. SnRNA即小分子核内 RNA,不单独存在, 常与多种特异的蛋白质结合在一起, 形成小分子核内核蛋白颗粒,在mRNA的剪接中起重要作用.反义RNA,又称调剂 RNA,主要封闭 RNA.3、参加蛋白质合成的氨基酸在特异的氨基酰tRNA 合成酶催化下,与其相应的tRNA 结可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_,翻合成氨基酰 tRNA.真核生物起始 tRNA结合的氨基酸为蛋氨酸,结合形成Met-tRNAi译起始时第一与40S 核糖体小亚基结合形成复合物.原核生物的起始氨基酸为甲酰化蛋氨met可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_fmet酸,结合形成fMet-tRNA f.导致 DNA变性的常用方法有热变性、碱变性和化学试剂变性.DNA变性的结果：粘性降低,密度增加,A260 紫外吸取值增加.4 、蛋白质的结构、功能特点蛋白质又称为“功能分子”,依据功能分为结构蛋白、活性蛋白和信息蛋白.蛋白质的一级结构是指蛋白质多肽链中氨基酸排列的次序.蛋白质一级结构发生转变,可以使蛋白质的功能发生转变, 严峻时可导致疾病的发生.因基因突变而导致的蛋白质一级结构转变后表现诞生理功能的反常, 使机体显现病态现象, 称为分子病. 蛋白质的二级结构单元（形式）有 a- 螺旋、 - 折叠、 - 转角、 - 螺旋和无规章卷曲. .一级结构的化学键是肽键及硫键.二级结构主要化学键为氢键.三级结构的主要靠疏水作用、离子键、氢键和范得华力等.四级结构的结合力主要是疏水作用、氢键和离子键.5 、端粒的主要特点和功能：特点为：位于真核生物染色体末端、端粒酶催化端粒DNA的完整复制、爱护染色体末端、打算细胞的寿命.延长、在打算细胞寿命中起重要作用、含短的高度重复序列.其主要功能有：爱护线性DNA6 、DNA聚合酶（ DNApol）2+作用是催化 DNA合成,其活性需要 Mg 的存在.大肠杆菌 DNA聚合酶有 I-II、II3种（即原核生物DNA聚合酶）. DNApolI 的功能有： a、聚合作用,使 DNA链沿 5 3方向延长, b、 3 5外切酶活性,即能从DNA链 3端开头沿 3 5进行水解反应,产生 5单核苷酸,订正复制过程中的错误,保证DNA复制的正确性,因而具有校对功能.C、5 3外切酶活性,参加RNA生物的切除、填补冈崎片段间的间隙以及DNA损耗的修复.DNApolII ：具有 5 3 DNA聚合酶活性及 3 5外切核酸酶活性,可能参加DNA损耗的应急状态修复.DNApolII ：亚基具有催化合成DNA的功能.亚基具有3 5外切酶活性及编辑和校对功能,就为装配所必需, 是原核生物复制延长中真正起催化作用2+的酶. DNA聚合酶的共同性质是：需要DNA模板. RNA或 DNA作为引物. ATP与 Mg 的参加.以 dNTP作底物. DNA合成的方向是 5 3.反应特点：新生链的延长方向为 5' 3' .半保留方式合成子代 DNA双链.反应需要 DNA引物.共同具有的酶活性： 5' 3' 聚合酶活性. 3' 5' 核酸外切酶活性.7 、RNA聚合酶 RNA聚合酶也称依靠 DNA的 RNA聚合酶,能以DNA为模板,四种核苷三磷酸为底物, 依据碱基配对原就,从5 3方向延长RNA链.原核生物的RNA聚合酶只有一种,是 由四种亚基 2 ' 组成的五聚体蛋白质,称为全酶.去掉亚基后,剩下的2 称为核心酶.活细胞的转录起始,需要全酶.而核心酶负责催化RNA链的延长. 真核生物RNA聚合酶有三种,即 RNA聚合酶 I 、II 、 III .RNA聚合酶 I 定位在核仁,主要转录 5.8S 、18S、28S-rRNA 基因.酶 II 定位在核浆, 主要转录编码蛋白质的基因, 即主要转录产生 mRN.A酶 III 定位在核浆,主要转录 tRNA 和 5S-rRNA 基因. RNA聚合酶催化聚合反应时需要有2+2+Mg 或 Mn 的存在,无 3 5 外切酶海性,无校对功能.8、密码子分为 起始密码和终止密码,起始密码为AUG,终止密码为UAA、 UAG和 UGA,可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_共有 64 种不同的密码.可作为原核生物起始密码的是：AUG.GUG.UU.G 9、遗传密码具有以下特点：A、连续性： 两个密码子之间没有任何核苷酸加以分隔,即密码是无标点的. B、方向性： mRNA中密码子的排列是有方向性的,即起始密码子总是位于编码区5 末端, 而终止密码子位于 3 末端.每个密码子的三个核苷酸也是5 3 方向阅读,不能倒读. C、简并性： 是指遗传密码中除色氨酸和甲硫氨酸仅有一个密码子外,其余氨基酸有2 6 个密码子为其编码 , 以密码子的第三位碱基和反密码子的第一位碱基常见.D、通用性：从最简洁的病毒、 原核生物、直至人类,都使用同一套遗传密码.E、摇摆性：翻译过程中,氨基酸的正确加入,要靠 mRNA上的密码子与tRNA 上的反密码子相辩认. 密码子与反密码子配对辩认时,有时不完全遵守碱基互补规律,即使不严格互补也能辩认配对,这种现象称为摇摆. 以密码子的第三位碱基和反密码子的第一位碱基常见.10、转录的过程及特点转录是以 DNA为模板, 以 4 种 NTP为原料, 依碱基配对规律, 在 DNA指导的 RNA聚合酶催化下合成 RNA的过程,其过程包括：起始、延长和终止三个阶段.转录的特点： A、对于一个基因组来说, 转录只发生在一部分基因, 而且每个基因的转录都受到相对独立的控制. B、转录是不对称的. C、转录时不需要引物,而且RNA链的合成是连续的. D、转录的单向性,即 RNA生物合成时,只能向一个方向进行聚合,所依靠的模板DNA链的方向为 35 ,而 RNA链的合成方向为5 3 .E、有特定的起始和终止位点.参加转录终止的因素为因子或转录产物的3' 端发夹结构 , 转录终止的修饰点:AATAAA+GT序列.11、原核生物 DNA复制的过程及特点复制过程包括：起始（复制起始位点识别、解螺旋酶解开 DNA双链,引发体合成 RNA 引物）延长（ DNA聚合酶催化聚合反应,连续合成前导链,不连续合成随从链）.终止（ RNA 引物去除、冈崎片段连接、在特别的终止结构区域停止）.复制的共同特点为：半保留复制和半不连续复制、聚合反应都需要模板、底物、 DNA聚合酶及其它酶和蛋白质.12 、真核生物染色体DNA复制的特点：（原核相反）复制起始点为多个. 复制叉移动速度慢. 复制方向大多数为双向. RNA引物短.冈崎片段短,不行连续复制13 、翻译的主要过程及特点起始：形成翻译起始复合物延长：指每加一个氨基酸经过进位、成肽和转位,使肽链从 N 端向 C 端延长.终止（当mRNA分子中的终止密码子显现后,多肽链合成停止,肽链从肽酰 -tRNA 中释出, mRN、A 核蛋白体等分别）.蛋白制合成是一个耗能过程,每生成一个肽键,要消耗 2 个高能磷酸键,氨基酸活化要消耗2 个高能磷酸键,整个过程可能多于4个高能磷酸键. 14、原核生物 mRNA的加工： 转录产物 mRNA分子不需加工. tRNA 结构基因的初级转录产物需要加工,才能成为具有生物功能的成熟分子.tRNA 前体的加工包括剪切作用（切除余外核苷酸）、添加和修复3' 端 CCA序列,某些碱基的化学修饰（成熟tRNA 分子中有稀有碱基）.15 、翻译后的加工修饰：加工包括： A、去掉 N-甲酰基、 N- 蛋氨酸或 N端序列. B、个别氨基酸的修饰（羟化、可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_磷酸化形成 -S-S- 等）. C、多蛋白水解修饰,D、分子伴侣,蛋白质二硫键异构酶,肽- 脯氨酰顺反异构酶帮助折叠成空间构象.E、亚基聚合, F、辅基的结合（糖基化等）.其中A、B、C 属一级结构修饰, D、E、F 属空间结构修饰.多肽链形成后,氨基酸残基可进行多种共价修饰,包括.磷酸化,羟基化,ADP-核糖基化,形成胱氨酸及乙酰化.翻译过程涉及 多种分子之间的相互作用,可以归纳为：RNA-蛋白质相互作用,蛋白质- 蛋白质相互作用及RNA-RNA相互作用.参加翻译终止的蛋白质因子包括：RF、PR、IF .广义的核蛋白体循环包括：翻译起始,进位,成肽,转位和翻译终止.16 、真核生物 mRNA的加工包括：7 5端加帽（由加帽酶催化 5端加入 7- 甲苷乌苷酸, 形成帽子结构mGpppmNP）- . 3端加入 PolyA 尾（ A、组蛋白的成熟mRNA无需加 polyA 尾. B、加尾信号包括 AAUAAA 和富含 GU 的序列. C、加尾不需模板.D 剪切过程需要多种蛋白质因子的帮助）.mRNA 前体的剪接（剪接加工以除去内含子序列,并将外显子序列连接成为成熟的有功能的mRNA 分子. 内含子两端的结构通常是5-GU AG-3.挑选性剪接的作用机制包括.A 使用不同的剪接位点, B 挑选使用外显子,C、反式剪接, D、使用不同的启动子,E、使用不同的 多腺苷酸化位点）. RNA的编辑（发生于转录后水平,改编mRNA序列, C U或 A G,增加遗传信息容量）.17、基因表达是 指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经过转录、翻译等一系列过 程,合成特定的蛋白质,进而发挥特定的生物学功能和生物学效应的全过程.但并非全部基 因表达过程都产生蛋白质,tRNA、 rRNA 编码基因转录生成RNA的过程也属于基因表达.基 因表达受到多级水平的调控,具有阶段特异性 （时间特异性） 和组织特异性 （空间特异性） .基因表达分为几个阶段：基因活化、转录、转录后加工、翻译、翻译后加工等、产物是RNA 和有功能的蛋白质.18 、原核生物基因表达调控的环节,主要在转录水平, 其次是翻译水平.原核生物基因多以操纵子的形式存在,转录水平的调控涉及到启动子、因子（能与RNA聚合酶结合）、阻遏蛋白 负调控 、正调控蛋白、倒位蛋白、RNA聚合酶抑制物、衰减子等多种因素.而翻 译水平的调控涉及到SD序列（位于 AUG前）、 mRNA的稳固性（不稳固,其5端和 3端的发夹结构可爱护其不被酶水解,mRNA的 5端与核糖体结合,可明显提高其稳固性）、翻译产物及小分子 RNA的调控作用.19 、真核生物基因表达的调控环节较多,在 DNA水平可通过染色体丢失,基因扩增、基因重排、 DNA甲基化以及染色体结构转变影响基因表达,在转录水平就主要通过反式作用因子的作用调控转录因子与 TATA盒的结合、 RNA聚合酶与转录因子 -DNA 复合物的结合及转录起始复合物的形成.在转录后水平主要通过 RNA修饰、剪接及 mRNA运输的掌握来影响基因表达.影响翻译水平的因素有影响起始翻译的阻遏蛋白、 5 AUG、 5端非编码区的长度、 mRNA的稳固性调剂及小分子 RNA等.真核基因调控中最重要的环节是基因转录,真核生物基因表达需要转录因子、启动子、缄默子和增强子.20 、反式作用因子： 指能直接或间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质, 其主要特点包括三个功能结构域（DNA识别结合域、转录活性域、结合其它蛋白的结合域）、能识别并结合上游调控区的顺式作用元件、对基因表达有正性和负性调控作用.其活性调剂方式：可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_表达式调剂, 共价修饰, 配体结合及蛋白质 - 蛋白质相互作用. 作用方式 : 成环、 扭曲、滑动、Oozing .DNA结构域包括：锌指、螺旋转角螺旋、亮氨酸拉链和螺旋环螺旋.转录激活域富含：酸性氨基酸、脯氨酸和谷氨酰胺.21、参加 DNA复制（合成）的物质包括：模板（解开成单链的 DNA母链）.引物（供应 3 OH未端使 dNTP可以依次聚合） .底物（ dATP,dGTP,dCTP和 dTTP）.聚合酶（依靠DNA的 DNA聚合酶（ DNApol ）.其它的酶和蛋白质因子.DNA复制 的基本过程包括： DNA双链解开, RNA引物的合成,DNA链的延长,切除引物,填补缺口,连接相邻DNA片段,切除和修复错配碱基.22、结构基因突变的类型包括点突变、缺失、插入和倒位四类,遗传密码的转变分为错义突变、无义突变、同义突变和移码突变.23、癌基因恶性激活的机制包括：原癌基因点突变,原癌基因获得外源启动子而激活,原癌基因因甲基化程度降低而激活,基因易位或重排使原癌基因激活.24、逆转录病毒载体 是基因治疗中最常用的载体.造血肝细胞是基因治疗中最重要的靶细胞,禁用生殖细胞.基因转移技术 基因治疗技术 包括生物学方法和非生物学方法: 生物学方法有 : 逆转录病毒载体 . 腺病毒载体 . 腺相关病毒载体 . 单纯疱疹病毒载体; 非生物学方法有：脂质体介导基因转移技术、DNA 直接注射法 . 磷酸钙沉淀法、电穿孔法、显微注射、基因枪技术 .DEAE- 葡聚糖法.25、DNA 甲基化 的一个特点是它们经过细胞很多代分裂之后仍保持稳固.在真核生物DNA中,几乎全部甲基化均发生于二核苷酸序列5 mCG3上.26、一个基因所 包括的序列有：编码蛋白质肽链或RNA的核酸序列、保证转录所必需的调控序列、 位于编码区 5 端上游的非编码序列、 内含子、 位于编码区3' 端下游的非编码序列.27、启动子 是 RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列 , 启动子具有方向性,真核生物的启动子必需与转录因子结合后,才能被 DNA聚合酶识别和结合, 真核生物的启动子元件是TATA盖,TATA 盒的核心序列是 TATAA/TAA/T,位于转录起始点上游25bp 处, 启动子打算转录方向 . 模板链及转录效率.上游启动子元件包括：CAAT盒, CACA盒和 GC盒.28、逆转录： 是指以 RNA为模板,利用宿主细胞中4 种 dNTP为原料,在引物的3' 端以 5'3' 方向合成与 RNA互补的 DNA链的过程,此过程与中心法就方向相反,故称为逆转录.29 、原癌基因产物的类型及细胞定位生长因子及其类似物,由细胞分泌,如C-sis家族 （sis编码血小板源生长因子, 表达产物与 PDGF链结构同源）.跨膜生长因子受体型的酪氨酸蛋白激酶,如erb-B, 表皮细胞生长因子（ EGF）受体. fims,巨噬细胞集落刺激因子受体.定位于质膜.细胞内信号传导分子,定位于胞夜 , 包括 A、低分子量 G蛋白,如 H-ras 等基因表达产物. B、胞内蛋白激酶（包括与膜结合的蛋白酪氨酸激酶和胞浆丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶） ,如 src 、abl 等基因表达产物.核内转录因子：如 myc、fos 等基因表达产物,定位于细胞核内.胞浆调节蛋白, 如 crk 的产物是存在于胞浆中的调剂蛋白, 定位于胞浆. 可溶性蛋白酪氨酸激酶受体和非蛋白激酶受.30 、细胞周期的主要调控点可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_细胞周期的运行受多种因素所调控,有2 个主要调控点,亦称为检测点. G1/S 期检测点：在酵母中称起点,在哺乳细胞中称限制点, 是掌握细胞进入S 期检测点（ G1 期检测点）,cyclinB与 CDK4和 CDK6结合, cyclinE与 CDK2,CDK3结合,通过磷酸化使它们活化. cyclin-CDK复合物可使 Rb 蛋白磷酸化,从而释放转录因子E2F,促进 DNA复制相关基因的表达. CDK2也可和 cyclinA、cyclinA1结合,促进早S 期 DNA合成的起始. G2/M 期检测点：是掌握细胞进入 M期检测点 （G2 期检测点） ,促有丝分裂因子 （ MPF）由 cyclinB和 CDK1组成,是启动有丝分裂的关键因子.细胞何时进入M期取决于 Cdc2 的磷酸化状态.31 、真核细胞转染的基本方法：磷酸钙沉淀法.电穿孔法.脂质体介导的基因导入法.DEAE-葡聚糖法.显微注射法.32 、DNA损耗的主要类型碱基和糖基破坏错配DNA链断裂：电离辐射致DNA损耗的主要形式DNA交联.上述 DNA损耗可导致 DNA模板发生碱基的置换、插入、缺失、链的断裂, 并可影响到染色体的高级结构. DNA链中一种嘌呤被另一种嘌呤取代,或嘧啶被另一种嘧啶所取代,称为转换. 嘌呤被嘧呤取代,或反之,称为颠换.转换和颠换在DNA复制时可引起碱基错配,导致基因突变.碱基的插入和缺失可引起移码突变.基因突变包括：点突变,缺失,插入,倒位.突变的后果包括：错义突变（一种氨基酸变为另一种氨基酸）,无义突变（一种密码变为终止密码如 UGU颠换成 UGA）,同义突变和移码突变.,33 、DNA修复机制的主要类型光修复.切除修复.重组修复.SOS修复.错配修复.34 、基因文库挑选的主要方法及原理(1) 依据抗药性标志挑选：对于带有某种抗药性标志基因,只有转化胜利的受体菌才可能在含该抗生素的培育基中生存并形成菌落.而没有转化胜利的受体菌,不能在培育基中生长,以此可挑选阳性菌.2 依据菌落的呈色反应挑选（互补、蓝- 白挑选）：根椐菌落的颜色并结合插入片段的序列测定挑选.3 养分缺陷型标记法 :4核酸分子杂交法：即采纳与 目的基因部分互补的DNA片段作为探针, 与含有重组体的细菌菌落进行杂交,以确定重组体中带目的基因.包括原位杂交和southern印迹杂交. （5）遗传互补法：载体上的养分代谢标记可以对宿主细胞的养分代谢缺陷进行互补,以此作为挑选重组体的标记.（6）免疫学方法： 假如克隆基因的产物是已知的,并且在菌落或噬菌斑中表达,因而可以用相应的抗血清或单克隆抗体,通过放射免疫、化学发光或显色反应进行挑选.35 、PCR的主要步骤及引物设计的基本要求 PCR的主要步骤： PCR又称聚合酶链式反应,是在体外进行的DNA复制反应过程.其基本过程包括： A、双链 DNA模板加热变性成单链 变性 , 温度 95 度左右. B、在低温下引物2+与单链 DNA互补配对 退火 ,85-90度.C、延长：在四种 DNTP底物及 Mg 存在条件下, TaqDNA聚合酶在最适作用温度（7075）下,依据碱基互补配对原就,催化引物3 -OH 端掺入单核苷酸,合成新的 DNA分子.引物设计的基本要求：A、引物长度一般为 1530 个核苷酸.B、引物中的碱基组成尽可能随机分布,防止显现嘌呤、嘧啶碱基积累现象,特别在3端可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_防止连续 3 个 G 或 C.C、引物自身不应存在互补序列以防止折叠成发夹结构,引物自身存在的连续互补序列,一般不超过 3bp.D、两个引物之间不应存在互补序列,特别应防止 3端的互补重叠. E、引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过 70%,引物 3末端连续8 个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列. F、引物与模板结合时, 引物的 5端可以修饰.如附加陷制酶位点,引入突变位点,用生物素 . 荧光物质 . 的高辛标记.36 、乳糖操纵子的正、负调剂机制乳糖操纵子包含 3 个结构基因 Z.Y.A（编码 - 半乳糖苷酶, - 半乳糖苷通透酶和转乙酰基酶）、 3 个调控元件（启动子、操纵基因和CAP结合位点）和1 个调剂基因（编码阻遏蛋白）.乳糖操纵子的转录起始是由CAP和阻遏蛋白两种调控因子来调控的.（1）阻遏蛋白的负调控：无乳糖时, 阻遏蛋白结合操纵基因,阻碍 RNA聚合酶结合启动子,从而抑制结构基因转录.有乳糖时,生成半乳糖（诱导剂）结合阻遏蛋白,使阻遏蛋白构象转变,变构的阻遏蛋白不能与操纵序列结合,阻遏机制解除,结构基因可以转录,基因得以表达.cAMP-CAP复合物的正调控 : 无葡萄糖时, cAMP浓度高,形成的cAMP-CAP复合物结合于 CAP 结合位点,增强启动子转录活性,促进下游基因得以表达.有葡萄糖时,cAMP 浓度低, cAMP-CAP复合物形成受阻,影响转录活性.正、负调控机制相辅相成：cAMP-CAP复合物是转录必需的, 同时阻遏蛋白进一步掌握转录启动.综上, 乳糖操纵子最强的表达条件是有乳糖而无葡萄糖.37、双脱氧末端终止法DNA测序的主要步骤：双脱氧末端终止法是以单链或双链DNA 为模板,采纳 DNA引物引导新生DNA的合成, 又称为引物合成法,或酶促引物合成法.其主要步骤为：制备单链模板.模板与测序引物结合.掺入法标记反应.延长- 终止反应. 变性胶电泳.放射自显影.阅读测序结果.38 、常用的分子生物学技术的原理、过程及特点核酸分子杂交技术：基本原理是： 具有互补序列的两条单链核酸分子在肯定条件下碱基互补配对结合,重新形成双链.在这一过程中,核酸分子经受了变性和复性的变化,以及复性过程中各分子间键的形成和断裂等.特点：直接检测血清中病毒基因组,无须扩增,灵敏度较 PCR低.在杂交体系中已知的核酸序列称作探针.聚合酶链反应（PCR）： PCR的原理是依据待测DNA片段两端的核苷酸序列,设计并 人工合成两个分别与DNA片段两端互补的寡聚核苷酸引物,在有过量的引物、 过量的底物 （ 4 种 dNTP）、DNA聚合酶以及模板 （待扩增片段的 DNA分子） 的反应体系中, 经过高温变性 （使DNA链解开）、低温退火（使引物与模板结合）和适温延长（新合成的DNA片段）三个阶段的循环周期,对 DNA分子进行扩增.特点 : 极强的扩增才能 , 度高灵敏性 , 高度特异性,只需微量模板 , 只需数小时 , 扩增产物量大 , 变性 . 复性 . 延长三个步聚循环进行, 操作简便,适用广泛,但可显现假阳性 . DNA序列测定： DNA序列测定是在高辨论率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的基础上建立起来的,包括 Sanger 双脱氧链末端终止法和化学降解法. Sanger 法的基本原理是：双脱氧核苷酸（ ddNTP）在 DNA合成过程中代替相应的脱氧核苷酸（ dNTP）作为底物,不能形成3, 5 - 磷酸二酯键而导致链延长终止.化学降解法：是采纳化学试剂处理末端放射性标记的 DNA单链片段, 造成碱基特异性切割, 由此产生一组具有不同长度的 DNA链的反应混合可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_物,经凝胶电泳按分子大小分别和放射自显影,直接读出待测DNA的核苷酸次序. DNA芯片技术： DNA芯片技术是一种大规模集成的固相核酸分子杂交,以大量已知碱基序列的寡核苷酸片段为探针,检测样品中哪些核酸序列与其互补,然后通过定性、 定量分析得出待测样品的基因序列及表达的信息.DNA芯片的主要技术流程包括：芯片的设计与制 备、靶基因的标记（常用荧光色素. 生物素或放射性核素标记dNTP）、芯片杂交与杂交信号检测.特点：高通量 . 鉴别诊断.酶： DNA聚合酶.所需探针：合成的寡核苷酸片段,cDNA, 已克隆的基因片段,双链或单链DNA或 RNA,肽核酸.基因克隆技术 （重组 DNA技术）： 基因克隆是指某种目的基因的扩增与分别过程,具体是从基因组或 DNA大片段中分别并获得某一特定的基因或DNA片段,再通过 DNA序列扩增形成由众多拷贝组成的DNA拷贝群体的过程. 其基本过程为： A- 目的基因的制备. 栽体的挑选与制备. B-DNA分子的体外连接. C-将外源 DNA导入宿主细胞. D-目的基因的挑选与鉴定. E-DNA重组体的扩增与表达39 、原核生物与真核生物转录调控的特点比较：两者均涉及 RNA聚合酶和转录调控序列 （启动子等） 的相互作用. 真核需要多种转录因子帮助、原核不需要.真核以正调控为主,原核以负调控为主.真核 3 种 RNA聚合酶负责不同种类基因的转录,原核只有1 种 RNA聚合酶.40、原核生物和真核生基因表达调控特点的比较.相同点：转录起始是基因表达调控的关键环节不同点：A、原核基因表达调控主要包括转录和翻译水平.真核基因表达调控主要包括染色质活化、转录、转录后加工、翻译、翻译后加工多个层次. B、原核基因表达调控主要为负调剂,真核主要为正调剂.C、原核转录起始不需要转录因子,RNA聚合酶直接结合启动子,由因子打算基因表达的特异性.真核转录起始需要基础、特异两类转录因子,依靠DNA-蛋白质、蛋白质 - 蛋白质相互作用,调控转录激活. D、原核基因表达调控主要采纳操纵子模型,转录出多顺反子RNA,实现和谐调剂.真核基因转录产物为单顺反子RNA,功能相关蛋白质的和谐表达机制更为复杂.41、质粒的特点：原核细胞中染色体外的共价闭合的环状DNA分子.能独立于细胞的染色体而进行 复制, 并依靠于宿主细胞. 在同一宿主中具有不相容性,即具有相同复制起始位点和安排 区的两种质粒不能共存于一个宿主菌.具有严格的遗传掌握系统（复制调控系统, 安排系统,细胞分裂掌握系统,位点特异重组系统）.其所携带的遗传信息能给予宿主细胞特定的遗传性状.是DNA重组技术中所使用的主要载体.作为克隆载体的质粒具有的特点：分子量较小,能在细菌内稳固存在,有较高的拷贝数.具有一个以上的遗传标志.具有多个限制酶的单一切点,称为多克隆位点,便于外源基因的插入.42、真核生物基因组结构与功能的特点.每一种真核生物都有肯定的染色体数目,体细胞一般为双倍体.真核基因组远远大于原核生物的基因组, 具有很多复制起点. 真核基因组由一个结构基因与相关的调控区组成,转录产物为单顺反子,即一分子mRNA只能翻译一种蛋白质.真核生物分子含有大量重复次序.真核生物基因组内非编码的次序占90%以上.真核基因是断裂基因.功可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_能相关的基因构成各种基因家族.真核生物基因组中也存在一些可移动的遗传因素.43、蛋白质生物合成后的靶向输送过程及特点：蛋白质合成后, 定向的被输送到最终发挥生物学功能的部位称为靶向输送.靶向输送的蛋白质的 N端往往有一些特异的氨基酸序列,称为信号序列, 是打算蛋白质靶向输送特性的重要元件, 通过信号序列引导蛋白质从胞浆进入内质网. 线粒体 . 叶绿体和核内, 靶向不同的蛋白质各有特异的信号序列.分泌型蛋白合成后进入内质网,经加工, 包装成分泌小泡,再转移 . 融合到靶部位或分泌出细胞,其靶向输送主要靠信号肽与胞浆中的信号肽识别粒子（SRP）识别并特异结合,然后再通过SRP与膜上的对接蛋白（ DP）识别并结合后,将所携带的蛋白质送出细胞. 线粒体蛋白的靶向输送靠导肽与多种蛋白复合体介导进入基质和膜间腔,然后自发的或在分子伴侣HSP70帮忙下折叠形成有功能的蛋白质.而细胞核蛋白的靶向输送就通过核定位信号与核输入受体结合形成核蛋白- 受体复合物,被导出核孔,再与核孔复合体结合后进入细胞核.44、核酸分子杂交的基本方法包括： Southern印迹杂交（鉴别DNA靶分子的杂交、待测核酸是 DNA片段） 、Northern印迹杂交 （鉴别 RNA靶分子、 待测核酸是 RNA）、斑点杂交、原位杂交和液相杂交.45、基因诊断的技术和方法：1）基因诊断中常用的分子生物学技术有：核酸分子杂交法 .PCR 法.DNA 序列分析 . 等位基因特异性寡核苷酸分子杂交法.DNA 芯片技术. 2）基因突变诊断的方法：直接诊断和连锁分析.直接诊断是目前诊断遗传病的主要方法,包括（1） 基因缺失或插入的诊断