小鼠骨髓细胞染色体制备与观察.ppt

实验二 小鼠骨髓细胞染色体制备与观察,实验原理,小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞数量较多。,秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。,实验目的与要求： 1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。 2.了解小鼠染色体核型。 3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。 器材与试剂 内容与方法 （一）小鼠骨髓细胞染色体制备 预处理,取材，收集细胞,低渗,固定、再固定,滴片,染色,取材前23h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。,腹腔内注射秋水仙素23小时后，颈椎脱臼处死小鼠。,小白鼠骨骼标本,取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细胞的流失。,用纱布擦股骨上的肌肉组织，清除干净,注射器抽取生理盐水冲洗骨髓,收集细胞：,暴露骨髓腔， 反复冲洗骨髓腔获得骨髓细胞， 收集到离心管中, 定容至6ml.,滴23滴于玻片上，吹气， 在酒精灯火焰过火8次， 做记号，凉干，染色,滴片：,滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，1015分钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。,作业与思考题,1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相。 2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各起什么作用？ 3、简述实验中应注意那些关键问题？,（二）染色体标本片观察 1.标本片质量评价 （1）细胞密度合适、均匀； （2）背景干净，细胞核和染色体清晰； （3）有较多的分裂相； （4）染色体分散较好。,细胞密度,染色体分散度,2.染色体形态特征观察,3.染色体计数,（10010）,15,16,9,9+16+15=40,10,8,22,22+8+10=40,4.细胞增殖指数统计,细胞增殖指数=,100%,实验三 细胞器的观察,一、中心体 二、高尔基体,一、中心体（410）,马蛔虫子宫横切片全貌,中心体（1010）,中心体（4010）,二、高尔基体（410）,脊神经节切片,高尔基体（1010）,高尔基体（4010）,高尔基体（4010）,