医学专题一小鼠颈部异位心脏移植模型制作.docx

小鼠颈部异位心脏移植模型制作目前多采用大鼠心脏移植模型，其缺点在于：1.大鼠的遗传背景资料没有小鼠完善；2.目前的转基因及基因敲除动物多为小鼠；3.针对小鼠的诊断试剂种类要比大鼠丰富得多。鉴于此，建立了小鼠的心脏移植模型是目前研究移植免疫最主要的模型。一、 实验动物：供、受者均选用雄性近交系小鼠如Balb/c(H-2d)， 1012周龄,体重25-30g。二、 实验器材： 36倍手术显微镜(Wild M691)，10/0血管缝线（Ethicon公司或上海医用缝合针厂），一次性电凝器(John Weiss Son Ltd.公司)，三、 麻醉剂：Hypnorm与Hypnovel（Janssen 公司）。麻醉剂Hypnorm与Hypnovel均用蒸馏水按1：4稀释，等体积混合后，小鼠腹腔注射0.150.2ml/只。四、 供心切取术小鼠四肢固定，剃毛,75酒精消毒,正中开腹，暴露下腔静脉，注射20u/ml肝素生理盐水1ml,横断下腔静脉及主动脉放血,横断膈肌，从双侧锁骨中线由下至上直至锁骨剪开，离断前胸壁，04生理盐水停搏心脏，去除周围脂肪组织及胸腺，10倍手术显微镜视野下用6-0丝线近心房处分离结扎右上腔静脉并右心房及下腔静脉，远端剪断；游离升主动脉及主动脉弓，在无名动脉分支处远心端结扎主动脉，远端横断。在无名动脉分支处远心端横断。游离肺动脉主干并在分支处剪断，左上腔静脉、左心房与肺静脉用6-0丝线结扎，远端游离。全心修剪后保存于04生理盐水中。五、受者手术（一）移植部位的准备 小鼠四肢用纸胶布固定于手术板上，置一橡皮筋于上下切齿之间以固定头部，头朝术者，剃毛，消毒。自下颌中点至右锁骨中点处剪一长约cm斜切口，游离皮下组织，灼断颌下腺体及部分脂肪组织，仔细游离右侧颈外静脉，在远心端分支处用丝线结扎，其间小分支用电凝器灼断，微血管夹近心端阻断静脉，并在远心端横断之；灼断右侧胸锁乳突肌，暴露颈动脉鞘，充分游离颈动脉，远心端结扎，微血管夹阻断近心端，横断颈动脉。（二）供心植入术用一小片吸水纸包裹供心置于受者右颈部，冰盐水降温，注意调整好供心位置以利吻合。在36倍手术视野下，供心无名动脉与受者颈总动脉作间用100 Ethicon血管缝线作端-端吻合，具体为先在3点（时钟定位法，下同）处吻合一针，然后在对侧点处吻合第二针，前壁11点及点处各吻合一针，顺时针翻转微血管夹及供心180°，暴露后壁，在后壁7点及5点处各吻合一针，然后还原至原来位置,共6针。注意尽可能使边距及针距均匀对称。接着用100国产血管缝线做供心肺动脉与受者颈外静脉连续端-端吻合，具体为先在3点处吻合一针打结，在原位由外向内向肺动脉内进一针，然后由右向左腔内连续缝合直至对侧9点处，再由左向右腔外连续缝合回3点处，不打结，留线头约0.5，共缝约78针。吻合完毕后先开放静脉，若吻合口有渗血，可用小棉球轻压片刻即可，一般不需补针。随后开放动脉，若吻合口有出血，可间断开闭微血管夹，减轻吻合口压力，一般在35分钟内间断开放23次可以止血，如仍出血可考虑补针。开放后12分钟供心即可由纤颤变为复跳。观察510分钟后，调整移植心于合适位置以防血管扭曲。缝合皮肤。小鼠一般1520分钟后可以自行翻身爬行，饮水进食。手术时间60±5min,平均冷缺血时间40±3min。六、术后观察视诊及触诊：术后易见颈部移植心搏动明显,节律整齐，每日上下午各触诊一次，觉搏动有力，节律整齐，约140160次/min。若术后1天内触诊移植心明显变小，心搏无力或明显增大，质硬，心律变慢，则多有动脉血栓形成或动脉卡压及静脉吻合口狭窄等并发症，应视为手术失败。七、小鼠心脏移植的优点及常见手术并发症和对策小鼠以其完善的遗传背景资料，丰富的种类以及齐全的诊断试剂，在器官移植研究中已成为首选的实验动物，而小鼠心脏移植模型是理想的移植免疫研究模型之一，这一模型早在1973年就为Corry所建立，但由于对显微外科的设备和技术要求比较高，国内目前仅少数中心能利用该模型开展研究工作。与传统的小鼠腹部心脏移植手术相比，小鼠颈部心脏移植手术的优越性在于：不需开腹，无需阻断大血管，对受者血液循环干扰小，整个手术出血仅0.05 ml左右，相对比较合理；而小鼠腹部心脏移植需阻断腹主动脉及下腔静脉等大血管，对受者体循环影响比较大，且极易发生下肢瘫痪等术后并发症 。操作步骤相对简便，初期可能对血管吻合要求比较高，但一旦掌握后，手术迅速而简便。 易于观察及触诊供心搏动情况，无需心电图监测。可在受者腹部接受再次移植（如心、肾移植等）。由于手术不需开腹，仅在颈部作一小切口，在很大程度上降低了感染发生的机会，这一点对用裸鼠作为受者的实验显得尤为重要。小鼠颈部心脏移植手术的常见并发症如下：动脉并发症：主要由于动脉微血栓形成与卡压，扭曲等原因所造成。动脉血栓形成：为早期的常见并发症，主要原因为以下几点：.显微外科操作不熟练，造成吻合针数过多或狭窄，吻合后补针，而颈动脉本身只有0.5-1mm粗细，从而导致血栓形成。 血管对合不佳，或有异物（如血块，毛发等），易致血栓。 吻合时缝线误挂对壁，形成血栓。.开放后漏血，小棉球轻压可止血。但可能形成较大血栓，造成动脉阻塞。颈动脉鞘游离不充分，吻合口在游离的鞘膜边缘处形成一明显卡压，造成血供不佳。扭曲：由于颈部空间相对狭小，若供心无名动脉或受者颈动脉保留过长，缝合皮肤后易致动脉扭曲，血供不佳。静脉并发症：小鼠颈静脉极薄且透明，吻合质量的好坏直接关系到手术的成败。静脉吻合口狭窄：是克服动脉难点后的最常见并发症，动脉开放后可见肺动脉迅速膨大，心脏发紫，极度狭窄时吻合口破裂。小鼠静脉的吻合与一般静脉吻合有一定的区别，主要在于不必缝得太“实”，而是利用缝线的弹性将两侧的血管撑起来，形成一个圆形的支架。因此静脉不必缝太多针，只需将两侧的血管“粘”在一起，相邻两针点间的管壁无缝隙即可。在缝合前一定要找准血管吻合口的最左端，后壁最后一针一定要将最左端的两点对合。开放后发现有狭窄时，可试用血管扩张的办法，具体左法为夹住吻合口3点及9点处的管壁左右牵拉，夹住吻合口12点及6点处的管壁上下牵拉。静脉壁撕裂：多见于后壁，极薄，透明难辨，初学者极易撕裂。其他：如供心心房出血，漏血，多为取心时不慎造成。总之，小鼠颈部心脏移植是进行移植免疫及药理等研究的重要模型，虽然制作较为困难，但是经过多次练习（100次左右），应该可以掌握。 内容总结（1）小鼠颈部异位心脏移植模型制作目前多采用大鼠心脏移植模型，其缺点在于：1.大鼠的遗传背景资料没有小鼠完善（2）鉴于此，建立了小鼠的心脏移植模型是目前研究移植免疫最主要的模型（3）一、 实验动物：供、受者均选用雄性近交系小鼠如Balb/c(H-2d)， 1012周龄,体重25-30g（4）小鼠颈部心脏移植手术的常见并发症如下：动脉并发症：主要由于动脉微血栓形成与卡压，扭曲等原因所造成