实验二.蛋白质的两性反应与等电点测定.ppt

实 验 二蛋白质的两性反应与等电点测定,了解蛋白质的两性解离性质 掌握测定蛋白质等电点的方法,实验目的,P,COOH,NH2,P,COO-,NH3+,P,COO-,NH2,P,COOH,NH3+,pH=pI,pHpI,pH<pI,兼性离子,阳离子,阴离子,实验原理,在等电点时蛋白质颗粒上的净电荷为零，缺乏同电相斥的因素，蛋白质溶解度最小，最容易析出沉淀,维持蛋白质胶体稳定的因素：,表面电荷、水化膜,本实验配制了各种不同pH值的缓冲液，沉淀出现最多的缓冲液pH值即为酪蛋白的等电点,实验器材与试剂,大试管、滴管、刻度吸量管,0.5酪蛋白醋酸钠溶液,0.01溴甲酚绿指示剂(指示范围: pH3.8-5.4),0.02M HCL溶液、 0.02M NaOH溶液,0.01M醋酸溶液、0.10M醋酸溶液、 1.00M醋酸溶液,蛋白质的两性反应（1）,实验步骤,取一干净试管,酪蛋白液10滴,溴甲酚绿指示剂3滴,观察溶液颜色 并解释现象,蛋白质的两性反应（2）,滴加0.02M HCL溶液,边滴加边混匀,有最大沉淀产生，观察溶液颜色变化,至沉淀消失，观察溶液颜色并解释现象,继续滴加0.02M HCL溶液,边滴加边混匀,蛋白质的两性反应（3）,继续滴加0.02M NaOH溶液,边滴加边混匀,有最大沉淀产生，观察溶液颜色变化,至沉淀消失，观察溶液颜色并解释现象,继续滴加0.02M NaOH溶液,边滴加边混匀,溶液呈蓝色,蛋白质的两性反应(1),实验结果,酪蛋白溶液呈碱性 (pH5.4)，使溴甲酚绿指示剂显蓝色,H+ ，沉淀,蛋白质的两性反应(2),出现最大量沉淀时,说明到达了酪蛋白的等电点,溶液由蓝色变成浅绿色（3.8pH5.4）,继续加酸，H+继续增大，pHpI。酪蛋白所带正电荷不断增加，同电相斥，沉淀溶解,沉淀完全溶解时，溶液显黄色(pH3.8),OH- ，沉淀,蛋白质的两性反应(3),出现最大量沉淀时,说明到达了酪蛋白的等电点,溶液由黄色变成浅绿色（3.8pH5.4）,继续加碱，OH-继续增大，pHpI。酪蛋白所带负电荷不断增加，同电相斥，沉淀溶解,沉淀完全溶解时，溶液显蓝色(pH5.4),结论 1：,酪蛋白的等电点在pH3.8-5.4之间,pH= pI时，蛋白质溶解度最小,蛋白质是两性电解质,取7支同样规格的干燥试管，精确加入各试剂,酪蛋白等电点的测定,注：单位均为mL,向每个试管中各加0.5%酪蛋白溶液20滴， 加一管，立即混匀一管,静置30分钟后，以0、+、+、+、+表示各管的混浊度，并指出哪一种pH是酪蛋白的等电点,酪蛋白等电点的测定,1,2,3,4,5,6,7,实验结果,结论 2：,4号试管沉淀量最多,说明4号管溶液的pH值为酪蛋白的等电点，即pI=4.7,什么是蛋白质的等电点？ 在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀？,思考题,实验项目 实验原理 试剂和器材 操作方法（主要步骤） 结果分析 思考题,请按时交实验报告！,实验三 凝胶过滤分离高铁血红蛋白与高铁氰化钾,预 习,