磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯.ppt

实验四 磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯 临床生物化学实验室,一、实验目的,掌握：磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯的基本原理。 熟悉：磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯的基本操作。 了解：血清甘油三酯测定对于家族性脂类代谢紊乱等疾病诊断的临床意义。,二、实验原理,血清中甘油三酯(TG)经脂蛋白酶(LPL)作用，可水解为甘油和游离脂肪酸，甘油在ATP和甘油激酶的作用下生成3-磷酸甘油，再经磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羟丙酮和H2O2，H2O2与4-APP和 ESPAS 在过氧化物酶作用下，生成红色醌类化合物，其显色程度与TG的浓度成正比。,甘油三酯,过氧化物酶POD,ATP ADP,甘油激酶GK,LPL,甘油+酯肪酸,3-磷酸甘油,磷酸甘油氧化酶GPO,磷酸二羟丙酮+H2O2,4-氨基安替比林（4-AAP）,对氯酚/ESPAS,醌亚胺染料,三、试剂,1. 酶试剂： GOODs缓冲液（pH7.2） 30mmol/L 甘油激酶 1KU/L 脂蛋白酯酶 3KU/L 甘油磷酸氧化酶 2KU/L 过氧化物酶 2KU/L ATP 0.5mmol/L 4-AAP 0.3mmol/L ESPAS 0.2mmol/L 稳定剂 适量 2. 标准液：甘油三酯 2.26 mmol/L,混匀， 37水浴5min后，在波长546nm处用B管调零，测定各管吸光度值。,四、实验操作,五、结果计算,TG(mmol/L)U/SCs（2.26 mmol/L） 参考范围：血清TG:0.5651.695 mmol/L,六、注意事项,1. 本法使用的酶试剂在4避光保存，至少可稳定3-7天，出现红色时不可再用，试剂空白的吸光度应0.05。 2. 血清要及时测定， 4存放不超过3天，避免TG水解释放出甘油。 3. 本法线性上限为11.3mmol/L，若所测TG超过了11.0mmol/L, 则可用生理盐水稀释后再测。,七、方法学评价,1. 本法是一步终止法，简便、快速、微量且试剂较稳定等优点，适用于手工和自动化测定。 2.不足：所测TG值包括了血清中游离的甘油。于4h内立即检测，若放置过久会使结果偏高。,3.为了除去游离甘油的干扰，常用下面两种方法： 1）外空白法:使用不含LPL的酶试剂测定FG作空白值，但此法需要双份测定，成本加倍。 2）内空白法：将酶试剂分成2部分：LPL和4-AAP组成试剂II，其余试剂为试剂I。血清先加试剂I，37温育后，因无LPL存在，TG不被水解，FG在GK和GPO的作用下反应生成H2O2，但因不含4-AAP，不能完成显色反应，故可除去FG的干扰；再加试剂II，即可测出TG水解生成的甘油。该法增加了操作步骤，但不增加成本。,八、临床意义,TG 增高 常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症 ( 如家族性高胆固醇血症、家族性 ApoB 缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等 ) 、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。 TG 降低 常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。,