动感七方块模板.pptx

动感七方块模板现在学习的是第1页，共31页13实验结果实验结果45项目成果项目成果经费使用经费使用目录目录研究对象研究对象6收获体会收获体会7后期打算后期打算2研究方案研究方案现在学习的是第2页，共31页现在学习的是第3页，共31页 EMA研究研究方案方案实验实验结果结果项目项目成果成果经费经费使用使用收获收获体会体会后期打后期打算算研究研究对象对象 腺病毒现在学习的是第4页，共31页现在学习的是第5页，共31页研究研究方案方案实验实验结果结果项目项目成果成果经费经费使用使用收获收获体会体会后期打后期打算算研究研究对象对象细胞的选择和培养腺病毒培养及其滴度的测定EMA-Real Time PCR检测死活腺病毒预试EMA-PCR检测死活腺病毒方法建立现在学习的是第6页，共31页1、细胞选择和培养Hela细胞使用广泛易于培养对腺病毒敏感培养方法：传代细胞培养法研究方案现在学习的是第7页，共31页研究方案2、腺病毒培养和滴度测定制备密度为80%单层细胞接种腺病毒标准株（购自ViraQuestinc）结果观察细胞病变效应（CPE）收获病毒，于-80冻存50%终点法测定滴度现在学习的是第8页，共31页研究方案3、EMA-Real Time PCR检测死活腺病毒预试l 初步证明EMA能够有效抑制死病毒的扩增。l 在预试结果良好的情况下，对EMA浓度进行了优化。问题：问题：Real Time PCR影响因素较多优化相关条件，影响实验进度Real Time PCR实验耗材较贵，研究经费受限实际检测中，对病毒定量的意义现在学习的是第9页，共31页研究方案4、EMA-PCR检测死活腺病毒方法建立u病毒灭活条件uEMA浓度选择： 抑制死病毒DNA扩增的最低浓度 最低EMA浓度对活病毒PCR扩增的影响uPCR方法评价现在学习的是第10页，共31页研究方案u病毒灭活条件 取200L滴度已知的病毒，于65水浴30min后，接种生长良好的Hela细胞，观察灭活后的病毒能否感染Hela细胞从而出现葡萄串状的CPE。现在学习的是第11页，共31页研究方案uPCR方法评价DNA模板制备引物及 PCR扩增程序PCR扩增产物检测分析方法灵敏度测定 方法特异性检测PCR方法现在学习的是第12页，共31页现在学习的是第13页，共31页研究研究方案方案实验实验结果结果项目项目成果成果经费经费使用使用收获体收获体会会后期打后期打算算研究研究对象对象现在学习的是第14页，共31页实验结果表表1 细胞致病变效应百分率计算法细胞致病变效应百分率计算法稀释度稀释度细胞培养病细胞培养病变孔数变孔数/接种接种孔数孔数累计数（孔）累计数（孔）累计病变细胞孔累计病变细胞孔有病变有病变无病变无病变比例比例%10-44/4909/910010-53/4515/68310-62/4232/54010-70/4070/701、收获106CFU/mL腺病毒现在学习的是第15页，共31页实验结果依据Reed-Muench公式：根据Poisson分布的公式P(0)=e(-m)，因为任何CCID50的P(0)=0.5，因此e(-m)=0.5，m=-0.50.7。所以0.7乘以CCID50的滴度即为预计的PFUs。该病毒预计的PFUs为1.1106PFU/mL现在学习的是第16页，共31页实验结果低倍镜2、病毒灭活条件：65，30min。现在学习的是第17页，共31页实验结果低倍镜低倍镜现在学习的是第18页，共31页实验结果图1 抑制死细胞DNA扩增的EMA浓度选择结果注：孔17分别是：阳性对照、阴性对照、Marker、EMA浓度为0、70、120、150g/mL。3、EMA浓度选择120g/mL现在学习的是第19页，共31页实验结果图2 120g/mL EMA对活菌扩增的影响结果 注：孔18分别是：阳性对照、阴性对照、Marker、活病毒数106、105、104、103、102。120g/mL EMA对活菌扩增无影响对活菌扩增无影响现在学习的是第20页，共31页实验结果图3 PCR检测腺病毒的灵敏度 注：孔1-9分别是：阴性对照、阳性对照，稀释度10-110-4，Marker,稀释度10-4、10-5.4、方法灵敏度103PFU/mL现在学习的是第21页，共31页实验结果图4 PCR检测腺病毒特异性结果1 注：孔18分别是：阳性对照、阴性对照、Marker、3型腺病毒3株、4型腺病毒2株.5、方法特异性现在学习的是第22页，共31页实验结果图5 PCR检测腺病毒特异性结果2 注：孔17分别是：阳性对照、阴性对照、Marker、7型腺病毒3株、新城疫鸡瘟病毒1株.现在学习的是第23页，共31页现在学习的是第24页，共31页研究研究方案方案实验实验结果结果项目项目成果成果经费经费使用使用收获体收获体会会后期打后期打算算研究研究对象对象论文EMA-PCR技术用于快速鉴别死活腺病毒的初探研究证实EMA-PCR方法可快速鉴别死活腺病毒，能有效避免单纯PCR检测腺病毒产生的假阳性结果。现在学习的是第25页，共31页现在学习的是第26页，共31页研究研究方案方案实验实验结果结果项目项目成果成果经费经费使用使用收获收获体会体会后期打后期打算算研究研究对象对象项目支出金额（元） 结余金额（元）腺病毒标准株350012500病毒DNA提取试剂盒2872.49627.6细胞培养6759.42868.2RTQ-PCR/PCR1430.31437.9其余实验室耗材876.7561.2合计15438.8561.2注：项目经费中有20%为教师指导经费，以上经费计算中均已扣除。 现在学习的是第27页，共31页现在学习的是第28页，共31页研究研究方案方案实验实验结果结果项目项目成果成果经费经费使用使用收获体收获体会会后期打后期打算算研究研究对象对象项目的认识加深自身能力的提高思考和学习的重要性意识到自己存在的问题现在学习的是第29页，共31页现在学习的是第30页，共31页研究研究方案方案实验实验结果结果项目项目成果成果经费经费使用使用收获体收获体会会后期打后期打算算研究研究对象对象 项目研究中，我们以腺病毒为例，建立其方法，在此基础之上，推广应用于其它病毒。方法的成功应用还需要解决一系列问题，如死活病毒的比例会不会影响实验结果；滴度相同的不同DNA病毒，所需EMA浓度是否存在差异等。现在学习的是第31页，共31页