实验四血凝和血凝抑制试验课件.ppt

关于实验四血凝和血凝抑制试验现在学习的是第1页，共17页一、实验目的一、实验目的 掌握血凝和血凝抑制试验的原理，以及掌握血凝和血凝抑制试验的原理，以及使用该试验测定血清抗体水平的操作步骤和使用该试验测定血清抗体水平的操作步骤和结果判定方法。结果判定方法。现在学习的是第2页，共17页二、实验原理二、实验原理（一）血凝试验（一）血凝试验（HA）有些病毒能够促使某些动物（如鸡、鹅、豚鼠、绵羊）有些病毒能够促使某些动物（如鸡、鹅、豚鼠、绵羊）和人的红细胞发生凝集，这就是红细胞凝集和人的红细胞发生凝集，这就是红细胞凝集现象，称现象，称做做血凝试验血凝试验。病毒凝集红细胞病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现象，可以作是一种较为普遍的现象，可以作为病毒鉴定的一个指标。为病毒鉴定的一个指标。现在学习的是第3页，共17页HA试验的原理图试验的原理图 现在学习的是第4页，共17页病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒结合较病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒结合较密切，不经特殊化学方法处理不能分开。密切，不经特殊化学方法处理不能分开。例如流感、腮腺炎、新城疫等病毒，病毒例如流感、腮腺炎、新城疫等病毒，病毒游离下来后，红细胞不能再次被凝集。游离下来后，红细胞不能再次被凝集。病毒凝集红细胞病毒凝集红细胞可以分为可以分为3 3种类型种类型现在学习的是第5页，共17页病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分开，血凝素呈游离状态，例如天花、牛痘、开，血凝素呈游离状态，例如天花、牛痘、鼠痘等病毒，它们的凝集现象是可逆的。鼠痘等病毒，它们的凝集现象是可逆的。象各种脑炎病毒、口蹄疫病毒等，凝集红象各种脑炎病毒、口蹄疫病毒等，凝集红细胞的条件很严格，对红细胞的种类有很细胞的条件很严格，对红细胞的种类有很严格的选择，同时还要掌握反应的严格的选择，同时还要掌握反应的pHpH和温和温度等。度等。现在学习的是第6页，共17页（二）血凝抑制试验（二）血凝抑制试验（HI）当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞凝集的现象就被抑制，称做红细红细胞凝集的现象就被抑制，称做红细胞凝集抑制试验，也叫胞凝集抑制试验，也叫血凝抑制试验血凝抑制试验。现在学习的是第7页，共17页HI试验的原理图试验的原理图 现在学习的是第8页，共17页三、试验材料三、试验材料n鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota）接种鸡）接种鸡胚、收获尿囊液制备。胚、收获尿囊液制备。n鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，以生鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，以生理盐水洗涤理盐水洗涤35次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成理盐水配置成1%红细胞悬液使用。红细胞悬液使用。n0.85%生理盐水。生理盐水。n被检血清，采自被检鸡的血清。被检血清，采自被检鸡的血清。现在学习的是第9页，共17页四、操作步骤四、操作步骤（一）血凝试验（一）血凝试验（HA）n在血凝板第一排的在血凝板第一排的112孔加入孔加入50l生理盐水。生理盐水。n在第在第1孔中加入孔中加入50l病毒抗原，反复吸取混匀后吸病毒抗原，反复吸取混匀后吸50l到第到第2孔，如此孔，如此倍比稀释倍比稀释直到第直到第10孔，混匀后孔，混匀后弃弃50l；最后两孔（；最后两孔（11、12）为细胞对照。）为细胞对照。现在学习的是第10页，共17页n将将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在的红细胞轻轻摇动混匀，在112孔中每孔孔中每孔加入加入50l。n手工震荡，手工震荡，37静置静置30min后观察结果。后观察结果。n结果观察（结果观察（血凝价是血凝价是1：？：？）。）。孔孔 号号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11（C）12（C）生生 理理 盐盐 水水（l）50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 病病 毒毒 悬悬 液液（l）50 50 50 50 50 50 50 50 50 50/1%红红 细细 胞胞（l）50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃50l 现在学习的是第11页，共17页1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210 C C 以以50%的红细胞发生凝集的病毒悬液的最高稀释度作为的红细胞发生凝集的病毒悬液的最高稀释度作为血凝价的终点，即血凝价的终点，即一个血凝单位一个血凝单位。现在学习的是第12页，共17页（二）血凝抑制试验（二）血凝抑制试验（HI）n在血凝板的在血凝板的112孔加入孔加入50l生理盐水，最后一孔加生理盐水，最后一孔加100l。n第第1孔加入待检血清孔加入待检血清50l，混匀后吸，混匀后吸50l至第至第2孔，孔，倍比稀倍比稀释释直至第直至第10孔，混匀后弃孔，混匀后弃50l。n从从111孔，每孔加稀释好的孔，每孔加稀释好的50l 4 4个血凝单位个血凝单位的病毒悬液的病毒悬液。如果血凝价为如果血凝价为1:21:28 8，那么，那么4 4个血凝单位就是个血凝单位就是1:21:26 6现在学习的是第13页，共17页n将将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在的红细胞轻轻摇动混匀，在112孔中每孔孔中每孔加入加入50l。n手工震荡，在手工震荡，在37静置静置30min后观察结果。后观察结果。n结果判定（血凝抑制价是结果判定（血凝抑制价是1：？，被检血清为阴：？，被检血清为阴/阳阳性）。性）。现在学习的是第14页，共17页HA试验试验HI试验试验现在学习的是第15页，共17页HAHI细胞对照现在学习的是第16页，共17页感谢大家观看感谢大家观看现在学习的是第17页，共17页