常用培养基概念及配方(5页).doc

-常用培养基概念及配方-第 5 页LB培养基：是实验中最常用的，用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。用于培养、枯草杆菌等，分为液态培养基和加入制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的。PDA培养基：培养基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。改良MC培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长，用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳酸菌。由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的生长，因此具有分离乳酸菌的功能。当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后会变淡黑色。以此分离乳酸菌。乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。乳酸菌指发酵主要产物为乳酸的一类无、革兰氏染色阳性细菌的总称。常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等自配高浓度污水：葡萄糖5550 mgL+(NH4)2SO4,1170 mgL+KH2PO4，170 mgL+COD为5000 mgL。自配污水：葡萄糖555 mgL+(NH4)2SO4，117mgL+KH2PO4 17 mgL+CaC12 0，08 mgL+MgSO4，1，534 mgL+NaHCO3 5508 mgL+FeC13·6H2O025 mgL+C0D 500 mgL+氨氮为30 mgL一、LB培养基配制 1升LB培养培养基需：蛋白胨10g/L；酵母粉5 g/L、Nacl10 g/L、单/双去离子水、琼脂1520g/L（配制液体培养基不需要加，配制固体培养基时加入）。pH值用5mol/L NaOH溶液调至7.2-7.4（用精密pH试纸测定）。配置完后在高压锅内高压灭菌21min。二、YPD培养基配制（酵母菌培养基）1）溶解酵母膏/酵母粉（yeast extract）10g/L、（peptone）20g/L于单/双去离子水中，如制平板加入20g/L琼脂粉(配制固体培养基)；2）灭菌 121°C 20min；3 加入20g/L (dextrose或glucose，葡糖糖溶液灭菌后加入、防止与蛋白胨反应)；注：葡萄糖、酵母粉、蛋白胨溶液混合后在下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。葡萄糖可以过滤除菌，也可以11515min灭菌。三、MRS培养基配制（乳酸菌培养基）蛋白胨（peptone）10g/L、牛肉膏(beef extract)10g/L、酵母菌粉(yeast extract)5g/L、醋酸钠（乙酸钠）5g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸铵2g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.2g/L、琼脂20g/L、吐温80 1ml/L、葡萄糖20g/L（因葡萄糖与蛋白胨发生反应因此需单独配制）、pH值用冰乙酸调至6.26.6（用pH试纸、仪器均可）250微升/L。四、琼脂糖凝胶配制凝胶板大孔为60ml,两小孔为30ml，梳子有5微升、10微升等琼脂糖粉10g12g/L，TBE0.5×（Tris硼酸，是一种PCR技术中用到的缓冲液。成分及终浓度（5×） 最终pH=8.25或8.3用蒸馏水稀释至0.5×）1）琼脂糖凝胶的制备：称取0.3g琼脂糖，置于三角瓶中，加入30ml TBE或TAE缓液，置于三角瓶中，加入30ml TBE或TAE缓液，置于三角瓶中，加入30ml TBE或TAE缓液，将该三角瓶置于微波炉加热至琼脂糖溶解。将冷却至65左右的琼脂糖凝胶液，加入溴化乙锭（凝胶染料），充分混匀。2）胶板的制备：取有机玻璃内槽，洗净、晾干；将有机玻璃内槽置于一水平位置模具上，安好挡板，放好梳子。吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘，任其凝固，在距离底板0.51.0mm的位置上放置梳子，以便加入琼脂糖后可以形成完好的加样孔。如果梳子距离玻璃板再近，则拔出梳子时孔底将有破裂的危险，破裂后将使样品在凝胶与玻璃板之间渗漏；将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶膜中，使胶液缓慢地展开，直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。凝胶的厚度在35mm之间，检查一下梳子的齿下或齿间是否有气泡；室温下静置30min左右，待凝固完全后，轻轻拔出梳子，在胶板上即形成相互隔开的上样孔。制好胶后将铺胶的有机玻璃内槽放在含有0.51×TAE（Tris-乙酸） 或TBE（Tris-硼酸）工作液的电泳槽中使用，没过胶面1mm以上。五、培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。一种常用的培养基，宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。 配制配方：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂1520克、自来水1000毫升、自然PH。 配制步骤：其做法是称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水煮烂（煮沸2030分钟，能被玻璃棒戳破即可），用四层纱布过滤，再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂，继续加热搅拌混匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装试管，加塞、包扎，灭菌（121）20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 其他事项： 1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。 2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmolLNaOH或lmolLHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。 3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。 4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.1g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性。