2022年2022年华中农业大学生物化学本科试题库基因工程基础 .pdf

1 第 18 章基因工程基础单元自测题(一)名词解释1.遗传工程 2.生物技术 3.基因工程 4.细胞工程 5.蛋白质工程 6.分子克隆 7.载体 8.转化和转染9.基因文库10.cDNA 文库(二)填空1自然界的常见基因转移方式有、。2不同 DNA 分子间发生的共价连接称为，有、两种方式。3基因工程的载体必须具备的条件有、。4基因工程常用的载体DNA 分子有、和。5一个完整的DNA 克隆过程应包括、。6目的基因获取的途径或来源有、。7基因工程过程中重组体直接筛选法的方式有、。8基因克隆真核生物表达体系常见的有、表达体系。9根据重组体DNA 的性质不同，将重组体DNA 导入受体细胞的方式有、等。10如果 M13的外源基因被插入到lac Z 基因内，则在含有X-gal 的培养基上生长时会出现色菌落，如果在lac Z基因内无外源基因插入，在同样的条件下呈现色菌落。11 当细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，就可以从一个细胞(细菌)转移到另一细胞(细菌)，这种类型的DNA转移称为作用。12重组 DNA 技术中常用的工具酶有、。(三)选择题1下列那种方式保证了免疫球蛋白的多样性?A.转化B.转染C.转位D.转导2微切割技术使目的基因可来源于下列那种物质?A.真核细胞染色体DNA B.人工合成 DNA C.cDNA D.G-文库3重组 DNA 技术中常用的工具酶下列那项不是：A.限制性核酸内切酶B.DNA 连接酶C.DNA 聚合酶 I D.RNA 聚合酶4DNA 致癌病毒感染宿主细胞后，使之发生癌变是因为发生了：A.转化B.转导C.接合D.转座5关于基因工程的叙述，下列哪项是错误的?A.基因工程也称基因克隆B.只有质粒 DNA 可作为载体C.重组体 DNA 转化或转染宿主细胞D.需获得目的基因6有关质粒的叙述，下列哪项是错误的?A.pB R322 含有-半乳糖苷酶的 片段基因B.质粒较易转化C.质粒的遗传表型可作为转化子的筛选依据D.pB R322 的分子中仅有一个E.coR I 内切酶位点7下列哪项不是重组DNA 的连接方式?A.粘性末端与粘性末端的连接B 平端与平端的连接C.粘性末端与平端的连接D.人工接头连接8有关噬菌体的叙述哪项不符合?A.感染大肠杆菌时仅把D NA 注入大肠杆菌内B.只有裂解一种生活方式C.溶源和裂解两种生活方式可以相互转变D.噬菌体是由外壳蛋白和D NA 组装而成9D NA 克隆不包括下列哪项步骤?A.选择一个适合的载体B.重组体用融合法导入细胞C.用连接酶连接载体D NA 和目的 D NA，形成重组体D.用载体的相应抗生素抗性筛选含重组体的细菌10下列哪项不能作为表达载体导人真核细胞的方法?A.磷酸钙转染B.电穿孔C.脂质体转染D.氯化钙转染11.下列哪项不能作为基因工程重组体的筛选方法?A.PC R 技术B.宿主菌的营养缺陷标志补救名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 1 页，共 5 页 -2 C.抗药性标志选择D.Southern 印迹12关于转化错误的是：A.受体细胞获得新的遗传表型B.外源 D NA 一定整合进受体细胞基因组C.自然界中较大的外源D NA 转化几率较低D.自然界中较大的外源DNA 转化几率较高13下列哪种酶是重组DNA 技术中最重要的?A.反转录酶B.碱性磷酸酶C.DNA 连接酶D.DNA 聚合酶 I 14在分子生物学中，基因克隆主要指：A.DNA 的复制B.DNA 的转录C.DNA 的剪切D.RNA 的转录15在分子生物学中，重组DNA 又称为：A.酶工程B.蛋白质工程C.细胞工程D.基因工程16cDNA 是指：A.在体外经反转录合成的与RNA 互补的 DNA B.在体外经反转录合成的与DNA 互补的 DNA C.在体外经反转录合成的与RNA 互补的 RNA D.在体内经反转录合成的与RNA 互补的 RNA 17聚合酶链式反应常常缩写为：A.PRC B.PER C.PC R D.B C R 18在已知 DNA 序列的情况下，获取目的基因的最方便的方法是：A.人工化学合成B.基因组文库法C.cDNA 文库法D.PCR 法19用于 PC R 反应的酶是：A.DNA 连接酶B.TaqDNA 聚合酶C.逆转录酶D.碱性磷酸酶20在 cDNA技术中，所形成的发夹环可用 A.限制性内切核酸酶切除 B.用 3外切核酸酶切除 C.用 S1 核酸酶切除 D.用 5外切核酸酶切除21，cDNA文库包括该种生物的 A.某些蛋白质的结构基因 B.所有蛋白质的结构基因 C.所有结构基因 D.内含子和调控区22关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确?A.具有可诱导性 B.具有可转移性 C.细菌生长的任何时期都可以出现 D.不同细菌出现感受态的比例是不同的23在简并引物的3端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是因为 A.Taq酶具有一定的不精确性 B.便于排除错误碱基的掺人 C.易于退火 D.易于重组连接24变色的酚中含有氧化物，这种酚不能用于DNA分离，原因主要是 A.氧化物会改变pH值 B.氧化物可使 DNA的磷酸二酯键断裂 C.氧化物同 DNA形成复合物 D.氧化物在 DNA分离后不易除去(四)是非题1.基因表达的最终产物都是蛋白质。2因为密码子是不重叠的，所以基因也是不重叠。3基因有两条链，与 mRNA 碱基序列相同(仅 T 代替了 U)的链称为正链。4RNA 是基因表达的第一产物。5.在细菌中，一些酶的合成有赖于这些酶的基因的连续表达。6原核生物中tRNA 基因的转录是由RNA 聚合酶完成。7毫无例外，从结构基因中的DNA 序列可以推出相应的蛋白质序列。8蛋白质的氨基酸序列是由基因的编码区核苷酸序列决定的，只要将基因的编码序列转入细胞，就能合成相应的蛋白质。9利用基因工程的手段，包括基因的定点突变等改造蛋白质分子，使之具有更完善，更符合人类要求的功能，这种技术和学科被称之为蛋白质工程。10基因工程的特点是在分子水平上操作，在细胞水平上表达。11DNA 连接酶常用来连接载体DNA 和外源性 DNA。12质粒不能在宿主细胞中独立自主地进行复制。（五）问答题1 什么叫基因克隆?简述基因克隆的步骤。2、基因克隆是如何使含有单个基因的DNA片段得到纯化的？3简述重组DNA 技术中目的基因的获取来源和途径。4简述互补筛选重组体质粒细菌的原理。5基因工程中重组体筛选的方法有哪些?名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 2 页，共 5 页 -3 6基因工程E.coli 表达体系的表达载体必须符合哪些标准?7常用的真核表达体系有哪些？常用于细胞转染的方法有哪些？8已知有一mRNA 分子，你怎样才能使它翻译出相应的蛋白质？简述其过程。9.作为基因工程的载体必须具备哪些条件?10简并引物设计的一般原则是什么?11什么是蓝白斑筛选法？12.什么是基因组文库(genomic library)?构建基因组文库，涉及哪些基本过程?它同遗传学上的基因库有什么不同?13什么是 cDNA文库(complementDNAlibrary)?同基因组文库有何差别?14自然界中具备理想条件的质粒载体为数不多，通常需要进行改造，请问质粒改造包括哪些基本内容?15YAC 克隆载体常出现哪些问题?六、参考答案(一)名词解释1遗传工程是遗传学和工程学相结合的一门技术科学。借用工程技术上的设计思想，在离体条件下，对生物细胞、细胞器、染色体或 DNA分子进行按图施工的遗传操作，以求定向地改造生物的遗传性。遗传工程的概念有广义和狭义之分。2生物技术又称生物工艺学，生物工程学。是根据生物学、化学和工程学的原理进行工业规模的经营和开发微生物、动植物细胞及其亚细胞组分，进而利用生物体所具有的功能元件(如基因、蛋白质)等来提供商品或社会服务的一门综合性科学技术。它包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程等。3基因工程(gene engineering)又称基因操作(gere emanipulation)、重组 DNA(recombinant DNA)。基因工程是以分子遗传学理论为基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因(DNA 分子)，按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导人活细胞，以改变生物原有的遗传特性，获得新品种，生产新产品，或是研究基因的结构和功能。4细胞工程(cell engineering)应用细胞生物学的原理和方法，结合工程学的技术手段，按照人们预先的设计，有计划地改变或创造细胞遗传性的技术，以及在体外大量培养和繁殖细胞，或获得细胞产品，或利用细胞体本身的技术领域。主要内容包括细胞融合、细胞拆合、染色体转移、基因转移、细胞或组织培养等。由于所用细胞的来源不同，细胞工程又分为微生物细胞工程、植物细胞工程、动物细胞工程等。5蛋白质工程(protein engineering)是更广义上的包括酶工程在内的蛋白质修饰操作，通过对蛋白质及酶的化学修饰及基因改造获得具有特殊功能的非天然蛋白质的技术。主要是根据蛋白质的结构和功能间的相互关系，利用基因工程技术，或用化学方法合成基因、改造基因，以便合成新的蛋白质，或改变蛋白质的活性、功能以及溶解性等。6.克隆(clone)意为无性繁殖系。DNA 克隆即将DNA 的限制酶切片段插入克隆载体，导入宿主细胞，经无性繁殖，以获得相同的 DNA 扩增分子。故DNA 克隆为分子克隆。7.将外源 DNA 带入宿主细胞并进行复制的运载工具，称为载体（vector）。克隆载体通常是由质粒、病毒或一段染色体DNA改造而成。8.转化和转染将外源 DNA 导入宿主细胞，从而改变细胞遗传性状，称为转化；将病毒DNA 直接导入细跑，称为转染。9.基因文库基因文库是指整套基因组DNA 片段分子克隆的总体。基因文库的构建包括基因组DNA 的随机片段化、载体DNA 的制备、重组体DNA 的体外包装、重组噬菌体感染大肠杆菌、基因文库的鉴定和扩增等步骤。10.cDNA 文库细胞全部 mRNA 的 cDNA 克隆之总体，称为cDNA 文库。(二)填空1接合作用转化作用转导作用转座2基因重组位点特异的重组同源重组3.能独立复制便于检测可导入宿主细胞4质粒 DNA 噬菌体 DNA 病毒 DNA 5.目的基因的获取基因载体的选择与构建目的基因与载体的拼接重组体导入受体细胞筛选与鉴定出阳性克隆6化学合成法基因组 DNA cDNA 聚合酶链式反应7抗药性标志选择标志补救分子杂交8酵母昆虫哺乳动物细胞9转化转染感染10白蓝11质粒 DNA 接合作用12限制性核酸内切酶DNA 连接酶DNA 聚合酶 I 反转录酶(三)选择题1.D 2.A 3.D 4.A 5.B 6.A 7.C 8.B 9.B 10.D 11.A 12.D 13.C 14.A 15.D 16.A 17.C 18.D 19.B 20.C 21.C 22.C 23.B 24.B(四)是非题：名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 3 页，共 5 页 -4 1错2错3对4对5对6错7错8错9对10对11对12错(五)问答题1.基因克隆(gene cloning)是指含有单一DNA 重组体的无性系或指将DNA 重组体引进受体细胞中，建立无性系的过程。一个完整的基因克隆过程包括：a目的基因和载体的选择。b.限制性内切酶处理的基因和载体。c目的基因与载体的连接。d重组体导入受体细胞。e筛选转化细胞。2大分子量的DNA会含有许多特殊限制性内切核酸酶的限制位点，因此用一种限制酶处理一完整染色体或整个基因组会产生许多不同的DNA片段，每一个片段带有基因组的一个不同的基因或一个不同的小片段。当全部片段与用同种限制酶处理过的载体分子混合时(图 A141)，每个片段将插入一个不同的载体分子(比如一个质粒)，同样地，当用这些质粒转化宿主细胞时，每个宿主细胞将只接收一个质粒DNA分子而筛选出的含重组质粒的每个菌落实际上会含有某一特异的供体DNA片段的多个拷贝。一旦带有待研究的特定基因的克隆被确认了，此重组 DNA分子可从宿主细胞中提取出来进行纯化。3.目的基因的获取主要有以下几种途径：化学合成法：已知某种基因的核苷酸序列或根据某种基因产物的aa序列推导出该多肽链编码的核苷酸序列，再利用DNA 合成法合成。基因组DNA：一个细胞或病毒所携带的全部遗传信息，或整套基因的全部DNA片段。从基因组DNA文库中获得。cDNA文库。聚合酶链式反应PCR(polymerase chain reaction)。4.M13噬菌体的基因间隔区插入E.coli 的调节基因及Lac Z-半乳糖苷酶基因的N-端 146 个 aa残基编码基因，其产物为-半乳糖苷酶的-片段。而突变型Lac-E.coli可表达-半乳糖苷酶的-片段(酶的 C-端)，单独的-片段及-片段均无-半乳糖苷酶的活性，当含有Lac Z 的 M13 噬菌体转化Lac-E.coli 细菌时，-片段及-片段共同表达，宿主Lac-E.coli 细菌才有-半乳糖苷酶活性，使特异的作用物变为兰色化合物，(生长的细菌为兰色)这就是-互补。可用于重组体的筛选。如果目的基因插入Lac Z 基因内，则Lac Z 不表达，为白色菌落。5重组体的筛选方法有：直接法(direct selection)：针对载体携带的某种或某些标志基因和目的基因而设计的筛选方法称直接法。其特点是：直接测定基因或基因表型。A抗药性标志筛选：如克隆载体携带有某个(些)抗药基因，如：ampr、tetr 等。只有被转化的细菌才能在含有该抗生素的培养基上生长，并形成菌落，使转化菌与非转化菌区别开。如重组体中的外源性基因插入到标志性基因内，标志性基因则失活，通过有或无抗菌素培养基对比培养，即可区分单纯载体转化菌和重组体(含目的基因的载体)转化菌。如：将目的基因插入tetr 基因中，该载体就失去tetr 抗药性，但仍有apmr 抗药性，被转化的细菌(含重组体)可在含有 apmr 培养基生长，而不能在 tetr 培养基生长。也叫插入灭活法。B 补救标志(rescue marker)筛选：如克隆基因能够在宿主菌表达，且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补，那么就可以利用营养突变菌株进行筛选，这就是标志补救。如：酵母咪唑甘油磷酸脱水酶基因表达产物与细菌组氨酸合成有关。当酵母DNA 与噬菌体载体结合后，在转染或感染组氨酸缺陷型大肠杆菌，在无组氨酸的培养基中培养，只有含重组体的细菌能生长(因有咪唑甘油磷酸脱水酶)。再如：-互补也是一种标志补救。C.杂交法：利用32P 标记的探针与转移到硝酸纤维素膜上的转化子DNA 或克隆的 DNA 片段进行分子杂交，直接选择鉴定目的基因。如：原位杂交Southern blotting(DNA-DNA杂交)。免疫学方法(非直接法)：是利用特异抗体与目的基因的表达产物相互作用进行的筛选。分为：免疫化学法和酶免疫检测分析。免疫化学法：原理为将培养的转化子菌落，经氯仿蒸汽裂解，释放抗原，再将固定有抗血清(目的基因编码蛋白特异的免疫血清)的聚乙烯膜覆盖在裂解菌落上，在膜上形成抗原抗体复合物，再与125I-IgG 反应，最后放射自显影，检出阳性菌落。6含有大肠杆菌适宜的选择标志，具有强的启动子，含有适当的翻译控制序列，含有合理设计的多接头克隆位点。7.真核表达体系常见的有：酵母，昆虫，哺乳类动物细胞等。重要的是将重组体导人细胞。即转染(将表达载体导人真核细胞的过程)。常见的转染方法有：磷酸钙转染、DEAE 葡聚糖介导转染、电穿孔、脂质体转染、显微注射等。8已知有一mRNA 分子，你怎样才能使它翻译出相应的蛋白质呢?其过程如下：首先以mRNA 分子为模板，进行反转录，合成cDNA，再合成双链cDNA，扩增后与载体连接形成重组体，转染表达载体，筛选出克隆，进行基因表达即可。9作为基因工程的载体必须具备的条件是：能独立自主复制、易转化、易检测(含有抗药性基因等)。10(1)选择保守区设计简并引物；(2)选择简并性低的氨基酸密码区设计引物；(3)注意密码的偏爱性；(4)使用尽可能短的引物，以降低简并性，最短可用1520 个碱基。(5)由于 TaqDNA 聚合酶在 PCR扩增时容易掺人错误碱基，所以设计的引物，其3端尽量使用具有简并密码的氨基酸。11这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在 载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌半乳糖苷酶的基因片段，携带有lac基因片段的 载体转入lac的宿主菌后，在含有5-溴 4氯 3引哚 D半乳糖苷(X-gal)平板上形成浅蓝色的噬菌斑。外源基因插入lac(或lac基因部分被取代)后，重组的噬菌体将丧失分解X-gal 的能力，转入lac 的宿主菌后，在含有 5溴 4氯 3引哚 D半乳糖苷(X-gal)平板上形成白色的噬菌斑，非重组的噬菌体则为蓝色噬菌斑。12基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基因组DNA的各种片段的克隆群。一般以改造的噬菌体DNA或黏粒作为载体，包括下列过程：(1)高分子量染色体DNA的制备；(2)体外重组连接；(3)包装蛋白的制备；(4)重组体的体外包装；(5)将重组 DNA导人寄主细胞；(6)筛选。基因组文库同遗传学上所讲的基因库是完全不同的概念。基因库(gene p001)是指在进行有性生殖的某一群体中，能进行生殖的个体所含总的遗传信息。在基因组文库的构建中，由于使用的载体不同，分为噬菌体载体和黏粒载体构建的基因名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 4 页，共 5 页 -5 组文库、YAC文库、BAC文库等。13同 mRNA 互补的 DNA称为 cDNA。cDNA文库是以某一生物的总mRNA 为模板，在无细胞系统中，在反转录酶的作用下，首先合成一互补的DNA,IIp第一链，破坏RNA模板后，再以第一链为模板合成第二链，得到的双链DNA称为 cDNA。选用适合的载体，将合成的 cDNA重组导人寄主细胞，经筛选得到的cDNA克隆群称为cDNA文库。由于 cDNA技术合成的是不含内含子的功能基因，因此是克隆真核生物基因的一种通用方法。由于细胞内的基因在表达的时间上并非是统一的，具有发育的阶段性和时间性，有些则需要特殊的环境条件。所以，cDNA文库是不可能构建得十分全，也就是说任何一个cDNA文库都不可能包含某一生物全部编码基因。cDNA文库与基因组文库的主要差别是：(1)基因组文库克隆的是任何基因，包括未知功能的DNA序列，cDNA文库克隆的是具有蛋白质产物的结构基因，包括调节基因；(2)基因组文库克隆的是全部遗传信息，不受时空影响；cDNA文库克隆的是不完全的编码DNA序列，因它受发育和调控因子的影响；(3)基因组文库中的编码基因是真实基因，含有内含子和外显子；而cDNA克隆的是不含内含子的基因。14.基本内容包括：(1)删除一些非必要的区段及对宿主有不良影响的区段，削减载体的分子量，使载体具有更大的容纳外源片段的能力。(2)加上易于选择或检测的标记。(3)限制性内切核酸酶的酶切位点的改造，便于外源基因插入到载体中的特定位置。(4)加上一些调控元件，有利于克隆基因的表达。(5)安全性改造，限定载体的宿主范围。15(1)YAC 有嵌合现象，一个YAC中克隆的 DNA片段可能来自两个或多个不同的染色体。在基因组文库中，嵌合体占克隆总数的 5 50。由特定的染色体构建的文库，嵌合体占克隆总数的5 15。(2)YAC内部有重组现象，插人的DNA较大，序列发生重排，导致和原来染色体的序列不一致，重组很难检出。(3)YAC还有缺失现象，影响YAC文库的代表性。(4)YAC结构和酵母天然染色体结构相似，使用常规方法不易将YAC和酵母天然染色体分开。(5)构建好的 YAC转化原生质化的酵母菌，转化效率低。(6)建好库后保存方便，但要筛选某个基因时工作量大。名师资料总结-精品资料欢迎下载-名师精心整理-第 5 页，共 5 页 -