糖类脂肪蛋白质的鉴定.ppt
关于糖类脂肪蛋白质的鉴定现在学习的是第1页，共19页（一）生物组织中可溶性还原糖的鉴定（一）生物组织中可溶性还原糖的鉴定1.1.实验原理实验原理 当质量浓度为当质量浓度为0.1g/mL0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质的氢氧化钠溶液与质量浓度为量浓度为0.05g/mL0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后，立即生的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的成淡蓝色的Cu(OH)Cu(OH)2 2悬浊液。悬浊液。Cu(OH)Cu(OH)2 2与葡萄糖、与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的成砖红色的CuCu2 2O O沉淀。因此，利用该反应，可证沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。明样液中含可溶性还原糖。RRCHOCHO+2Cu(OH)+2Cu(OH)2 2RRCOOHCOOH+CuCu2 2O O+2H+2H2 2O O现在学习的是第2页，共19页2.2.实验材料实验材料 做可溶性还原糖的鉴定实验，还原糖的含做可溶性还原糖的鉴定实验，还原糖的含量、生物组织有无色素是影响实验结果及其观量、生物组织有无色素是影响实验结果及其观察的最重要因素。察的最重要因素。因此要选用可溶性因此要选用可溶性还原糖含量高还原糖含量高、白色白色或近于白色或近于白色的植物组织，其中以的植物组织，其中以苹果、梨苹果、梨最好，也可用白萝卜替代。最好，也可用白萝卜替代。现在学习的是第3页，共19页3.3.试剂配制试剂配制 甲液（甲液（0.1g/mL0.1g/mL的氢氧化钠溶液）的氢氧化钠溶液）斐林试剂斐林试剂 乙液（乙液（0.05g/mL的硫酸铜溶液）的硫酸铜溶液）甲液乙液等量混合，现用现配，甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置后才切不可分开滴加，或者久置后才用。用。现在学习的是第4页，共19页4.4.实验步骤实验步骤（1 1）制备组织样液（教师制备）制备组织样液（教师制备）（2 2）鉴定样液）鉴定样液先在试管中加入2mL组织样液现在学习的是第5页，共19页再加入2mL刚配制的斐林试剂水浴煮沸2分钟注意观察整个注意观察整个实验过程中，实验过程中，溶液颜色的变溶液颜色的变化！化！现在学习的是第6页，共19页现在学习的是第7页，共19页（二）生物组织中脂肪的鉴定（二）生物组织中脂肪的鉴定1.1.实验原理实验原理 苏丹苏丹是可以对脂肪染色的试剂，因此，是可以对脂肪染色的试剂，因此，当含有大量油滴的植物细胞用苏丹当含有大量油滴的植物细胞用苏丹染色后染色后，在显微镜下可以看到细胞内橘黄色的颗，在显微镜下可以看到细胞内橘黄色的颗粒。粒。现在学习的是第8页，共19页2.2.实验材料实验材料 做脂肪的鉴定实验时，所用材料一要脂肪含量高，做脂肪的鉴定实验时，所用材料一要脂肪含量高，二要有一定大小才能做徒手切片，花生种子符合该实二要有一定大小才能做徒手切片，花生种子符合该实验的要求。验的要求。将花生种子经过将花生种子经过3-43-4小时的浸泡使其变软，有利小时的浸泡使其变软，有利于切成薄片；但浸泡时间也不宜过长，否则切片时易碎于切成薄片；但浸泡时间也不宜过长，否则切片时易碎裂，切不成薄片。裂，切不成薄片。3.3.试剂配制试剂配制 苏丹苏丹溶液：将溶液：将0.1g0.1g苏丹苏丹干粉溶于干粉溶于100mL100mL体积体积分数为分数为95%95%的酒精溶液中，待全部溶解后即成。的酒精溶液中，待全部溶解后即成。现在学习的是第9页，共19页4.4.实验步骤实验步骤（1 1）切片制作）切片制作去掉花生种皮去掉花生种皮用左手的三个手指夹住花生的一片子叶用左手的三个手指夹住花生的一片子叶，使花生子叶高于手指之上（，使花生子叶高于手指之上（为什么？为什么？）。右手持刀片，将子叶削去一层，形成平面。右手持刀片，将子叶削去一层，形成平面。刀口向内，与花生断面平行，以均匀的动作，自左前方向右后方快速拉刀，滑行切片（注意要整个臂注意要整个臂部用力，而不要腕部用力。部用力，而不要腕部用力。）如此连续动作，切下一些薄片。现在学习的是第10页，共19页（2 2）染色）染色 用毛笔将最用毛笔将最 薄的几片材料移至洁净的载玻片的中央薄的几片材料移至洁净的载玻片的中央滴苏丹滴苏丹溶液溶液2-32-3滴于花生子叶薄片上滴于花生子叶薄片上2-1min2-1min后，后，吸去染液吸去染液滴滴50%50%的酒精洗去浮色的酒精洗去浮色吸去多余酒精吸去多余酒精再滴再滴1-21-2滴蒸馏水滴蒸馏水盖上盖玻片，制成临时装片。盖上盖玻片，制成临时装片。（3 3）镜检鉴定）镜检鉴定 在低倍镜下观察，找到花生子叶切片的最薄在低倍镜下观察，找到花生子叶切片的最薄处（处（），移至视野的中心），移至视野的中心换换用高倍镜观察，调焦至最清晰。可发现细胞内用高倍镜观察，调焦至最清晰。可发现细胞内橘黄橘黄色色的圆形小颗粒，这就是脂肪滴（油滴）。的圆形小颗粒，这就是脂肪滴（油滴）。若若发现观察物外围也有许多橘黄色小颗粒，则是脂肪发现观察物外围也有许多橘黄色小颗粒，则是脂肪跑了出来跑了出来。现在学习的是第11页，共19页现在学习的是第12页，共19页若用物理方法如何鉴定脂肪的存在若用物理方法如何鉴定脂肪的存在?烘烤种子后烘烤种子后,把子叶放在白纸上用手指挤压把子叶放在白纸上用手指挤压,白白纸上会出现透明的油迹纸上会出现透明的油迹,说明子叶含有脂肪说明子叶含有脂肪。现在学习的是第13页，共19页（三）生物组织中蛋白质的鉴定（三）生物组织中蛋白质的鉴定1 1 实验原理实验原理 在碱性溶液（在碱性溶液（NaOHNaOH）中，双缩脲（）中，双缩脲（H H2 2NOC-NH-CONHNOC-NH-CONH2 2）能与）能与Cu Cu 2+2+作用，形成紫色作用，形成紫色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。缩脲试剂发生颜色反应。现在学习的是第14页，共19页3.3.试剂配制试剂配制 A A液（液（0.1g/mL0.1g/mL的氢氧化钠溶液）的氢氧化钠溶液）双缩脲试剂双缩脲试剂 B B液（液（0.01g/mL0.01g/mL的硫酸铜溶液）的硫酸铜溶液）2.2.实验材料实验材料 做蛋白质的鉴定实验，一般选用蛋白质含量做蛋白质的鉴定实验，一般选用蛋白质含量较高的大豆较高的大豆(可用豆浆替代）或鸡蛋清。可用豆浆替代）或鸡蛋清。现在学习的是第15页，共19页4.4.实验步骤：实验步骤：（1 1）制备生物组织样液（教师制备）制备生物组织样液（教师制备）（2 2）鉴定）鉴定先加2mL组织样液再加2mL双缩脲试剂A液加3-4滴双缩脲试剂B液现在学习的是第16页，共19页现在学习的是第17页，共19页注意：在鉴定蛋白质时要分别滴加两种试剂，注意：在鉴定蛋白质时要分别滴加两种试剂，并且硫酸铜只能加并且硫酸铜只能加3434滴，不能过量如过量，滴，不能过量如过量，CuSOCuSO4 4在碱性溶液中生成大量蓝色在碱性溶液中生成大量蓝色CuCu（OHOH）2 2沉淀沉淀，遮盖了紫色。，遮盖了紫色。鉴定蛋清组织中存在蛋白质时，要充分稀释。鉴定蛋清组织中存在蛋白质时，要充分稀释。如稀如稀释不够，与双缩脲试剂发生反应后，会粘固在试管内壁上，使释不够，与双缩脲试剂发生反应后，会粘固在试管内壁上，使反应不易彻底，并且试管中也不易冲洗干净。反应不易彻底，并且试管中也不易冲洗干净。现在学习的是第18页，共19页感谢大家观看感谢大家观看现在学习的是第19页，共19页
