菠菜色素的提取与分离.ppt

关于菠菜色素的提取与分离现在学习的是第1页，共24页实验目的实验目的1、学习从植物中提取色素的方法。、学习从植物中提取色素的方法。2、学习薄层色谱和柱色谱的原理及其操、学习薄层色谱和柱色谱的原理及其操作方法。作方法。现在学习的是第2页，共24页实验原理实验原理 绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素(绿色绿色)、胡、胡萝卜素萝卜素(橙黄色橙黄色)和叶黄素和叶黄素(黄色黄色)等多种天然色等多种天然色素。素。通过柱色谱和薄层色谱对菠菜叶中的上述几种通过柱色谱和薄层色谱对菠菜叶中的上述几种色素进行分离。色素进行分离。现在学习的是第3页，共24页实验原理实验原理 薄层色谱，常用薄层色谱，常用TLCTLC表示，属于固液吸附色表示，属于固液吸附色谱。化合物在薄层板上的吸附剂（谱。化合物在薄层板上的吸附剂（固定相固定相）和）和溶剂展开剂（溶剂展开剂（流动相流动相）之间进行分离，由于各种化合）之间进行分离，由于各种化合物的吸附能力各不相同，在展开剂上移时，它们进行物的吸附能力各不相同，在展开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到分离的目的。也就是在反不同程度的解吸，从而达到分离的目的。也就是在反复的吸附解析吸附过程中，吸附能力较弱的溶质，首复的吸附解析吸附过程中，吸附能力较弱的溶质，首先被展开剂解析下来，随展开剂推向前去；而吸附能先被展开剂解析下来，随展开剂推向前去；而吸附能力强的溶质解析较慢，被展开剂推移不愿，从而达到力强的溶质解析较慢，被展开剂推移不愿，从而达到分离的目的。分离的目的。现在学习的是第4页，共24页实验原理实验原理展开前展开前展开后展开后吸附吸附解析解析吸附吸附解析解析现在学习的是第5页，共24页实验原理实验原理ab溶剂前沿在色谱法中，展开剂移动的速率与溶质移动的速在色谱法中，展开剂移动的速率与溶质移动的速率的比值，常用比移值率的比值，常用比移值Rf来来表示表示:现在学习的是第6页，共24页溶剂的洗脱能力按下列次序递增：溶剂的洗脱能力按下列次序递增：石油醚、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、石油醚、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、甲醇、水、吡啶、乙酸。甲醇、水、吡啶、乙酸。吸附剂吸附剂 常用吸附剂有氧化铝、硅胶等。吸附剂对化合物常用吸附剂有氧化铝、硅胶等。吸附剂对化合物的吸附能力与分子的极性有关，极性越强，吸附能力的吸附能力与分子的极性有关，极性越强，吸附能力越大，分子中含有极性较大的基团，其吸附能力也越越大，分子中含有极性较大的基团，其吸附能力也越强。强。实验原理实验原理现在学习的是第7页，共24页实验原理实验原理前沿线色斑起始线现在学习的是第8页，共24页实验原理实验原理薄层色谱的用途：薄层色谱的用途：1 1、化合物的定性检验、化合物的定性检验2 2、快速分离少量物质、快速分离少量物质3 3、跟踪反应进程、跟踪反应进程4 4、化合物纯度的检验、化合物纯度的检验现在学习的是第9页，共24页实验原理实验原理 柱色谱是通过色谱柱来实现分离的。在色谱柱柱色谱是通过色谱柱来实现分离的。在色谱柱内装有固体吸附剂内装有固体吸附剂(固定相固定相)如氧化铝或硅胶。液体样如氧化铝或硅胶。液体样品从柱顶加入，当液体流经吸附剂时，由于吸附剂表品从柱顶加入，当液体流经吸附剂时，由于吸附剂表面对液体中各组分吸附能力不同而按一定的顺序吸附。面对液体中各组分吸附能力不同而按一定的顺序吸附。然后从柱顶加入洗脱剂然后从柱顶加入洗脱剂(流动相流动相)，样品中的各组分，样品中的各组分随洗脱剂按一定的顺序从色谱柱下端流出，根据随洗脱剂按一定的顺序从色谱柱下端流出，根据不同颜色分段收集。不同颜色分段收集。现在学习的是第10页，共24页实验原理实验原理现在学习的是第11页，共24页实验装置实验装置现在学习的是第12页，共24页实验步骤实验步骤1、菠菜色素的提取、菠菜色素的提取 2、薄层层析、薄层层析 3、柱层析、柱层析 现在学习的是第13页，共24页菠菜色素的提取菠菜色素的提取1、研磨、研磨 在研钵中放入在研钵中放入10 g新鲜并剪碎新鲜并剪碎的菠菜叶，加入的菠菜叶，加入15 mL3：2(体积体积比比)石油醚一乙醇混合液，适当石油醚一乙醇混合液，适当研磨研磨(不要研成糊状，否则会给分不要研成糊状，否则会给分离造成困难离造成困难)，将提取液用滴管转，将提取液用滴管转移到分液漏斗中。反复三次，合移到分液漏斗中。反复三次，合并提取液。并提取液。现在学习的是第14页，共24页2、洗涤和干燥、洗涤和干燥 向提取液中加入向提取液中加入l0 mL饱和饱和NaC1溶液，弃去水层，再用溶液，弃去水层，再用l0 mL蒸馏水洗涤两次。将有机蒸馏水洗涤两次。将有机层转入干燥的小锥形瓶中，层转入干燥的小锥形瓶中，加无水硫酸钠干燥半小时。加无水硫酸钠干燥半小时。菠菜色素的提取菠菜色素的提取现在学习的是第15页，共24页3、蒸馏、蒸馏 将干燥后的液体过滤至圆将干燥后的液体过滤至圆底烧瓶中，进行蒸馏，直至底烧瓶中，进行蒸馏，直至烧瓶中浓缩液烧瓶中浓缩液1mL左右。左右。菠菜色素的提取菠菜色素的提取现在学习的是第16页，共24页薄层层析薄层层析1、点样、点样 先用铅笔在距薄层板一端先用铅笔在距薄层板一端1cm处处轻轻划一横线作为起始线，然后轻轻划一横线作为起始线，然后用毛细管吸取样品，在起始线上用毛细管吸取样品，在起始线上小心点样，斑点直径一般不超过小心点样，斑点直径一般不超过2mm。若在同一板上点几个样，。若在同一板上点几个样，样点间距离应为样点间距离应为1-1.5cm。现在学习的是第17页，共24页2、展开、展开 在层析缸中加入配好的展开剂，使在层析缸中加入配好的展开剂，使其高度不超过其高度不超过1cm。将点好的薄层板。将点好的薄层板小心放入层析缸中，点样一端朝下小心放入层析缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。盖好瓶盖，观察，浸入展开剂中。盖好瓶盖，观察展开剂前沿上升到一定高度时取出展开剂前沿上升到一定高度时取出，尽快在板上标上展开剂前沿位置，尽快在板上标上展开剂前沿位置。薄层层析薄层层析现在学习的是第18页，共24页薄层层析薄层层析色素种类色素种类胡萝卜素胡萝卜素叶黄素叶黄素叶绿素叶绿素a a叶绿素叶绿素b b展展开开剂剂1 1a ab bR Rf f展展开开剂剂2 2a ab bR Rf f薄层层析结果薄层层析结果展开剂：展开剂：（1 1）石油醚）石油醚-丙酮，体积比为丙酮，体积比为4:1 （2 2）石油醚）石油醚-乙酸乙酯，体积比为乙酸乙酯，体积比为3:2ab溶剂前沿现在学习的是第19页，共24页柱层析柱层析1、装柱、装柱 在层析柱中加入在层析柱中加入60mL石油醚，石油醚，称取称取30g中性氧化铝中性氧化铝缓缓缓缓加入层加入层析柱中。打开下端活塞，放出析柱中。打开下端活塞，放出溶剂，直至氧化铝表面剩下溶剂，直至氧化铝表面剩下12mm高，关闭活塞。高，关闭活塞。现在学习的是第20页，共24页柱层析柱层析2、过柱、过柱 将菠菜色素的浓缩液用滴管小心将菠菜色素的浓缩液用滴管小心滴加到层析柱顶部。加完后打开下滴加到层析柱顶部。加完后打开下端活塞，让液面下降到柱面以下端活塞，让液面下降到柱面以下1mm左右，关闭活塞。加数滴石左右，关闭活塞。加数滴石油醚，打开活塞，使液面下降经油醚，打开活塞，使液面下降经过几次反复，使色素全部进入柱过几次反复，使色素全部进入柱体。体。现在学习的是第21页，共24页柱层析柱层析3、洗脱、洗脱 从柱顶加入石油醚从柱顶加入石油醚-丙酮溶液丙酮溶液（9:1），层析即开始进行，用），层析即开始进行，用锥形瓶收集。当第一个有色成锥形瓶收集。当第一个有色成分即将滴出时，取另一锥形瓶分即将滴出时，取另一锥形瓶收集。接收完后用石油醚收集。接收完后用石油醚-丙酮丙酮溶液（溶液（7:3）洗脱，换锥形瓶接收）洗脱，换锥形瓶接收。现在学习的是第22页，共24页注意事项注意事项1、点样不能戳破薄层板面，各样点间距、点样不能戳破薄层板面，各样点间距1-1.5cm，样点直径应不超过样点直径应不超过2mm。2、展开时，不要让展开剂前沿上升至底线。否则，、展开时，不要让展开剂前沿上升至底线。否则，无法确定展开剂上升高度，即无法求得无法确定展开剂上升高度，即无法求得Rf 值和值和准确判断粗产物中各组分在薄层板上的相对位置。准确判断粗产物中各组分在薄层板上的相对位置。3、层析柱中氧化铝表面任何时候都不得露出液面，、层析柱中氧化铝表面任何时候都不得露出液面，以防有空气进入。以防有空气进入。4、待色素全部进入柱体后，方可进行洗脱，以、待色素全部进入柱体后，方可进行洗脱，以防有拖尾影响分离效果。防有拖尾影响分离效果。现在学习的是第23页，共24页感谢大家观看感谢大家观看现在学习的是第24页，共24页