微生物的实验室培养讲稿.ppt

第一页，讲稿共十五页哦一、培养基一、培养基：1.概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质配制出供其生长繁殖的营养基质培养基培养基 3.营养构成：营养构成：各种培养基一般都含有各种培养基一般都含有水水、碳源碳源、氮源氮源和和无机盐无机盐，此外还要满足微生物生长对，此外还要满足微生物生长对PH、特殊特殊营养物质营养物质以及以及氧气氧气的要求的要求 注：自养微生物的碳源是注：自养微生物的碳源是无机碳无机碳；异氧型微生；异氧型微生物的碳源是物的碳源是有机碳有机碳，培养不同类型的微生物，培，培养不同类型的微生物，培养基的组成成分一般不同。养基的组成成分一般不同。第二页，讲稿共十五页哦 2.分类：分类：(1)按营养成分分类：按营养成分分类：1.天然培养基天然培养基：优点：取材方便、营养丰富、种类多样、优点：取材方便、营养丰富、种类多样、配制方便配制方便 缺点：成分不确定，适用于缺点：成分不确定，适用于大生产中发酵培养基大生产中发酵培养基 2.合成培养基合成培养基：优点：成分精确优点：成分精确 缺点：配制较复杂，价格较贵缺点：配制较复杂，价格较贵 （2）按物理状态分类：）按物理状态分类：1、固体培养固体培养基基：主要应用于微生物的：主要应用于微生物的分离分离与与鉴定鉴定 2、液体培养基液体培养基：工业上微生物的培养工业上微生物的培养 第三页，讲稿共十五页哦（3）按功能分类：）按功能分类：1.选择培养基选择培养基：根据某种微生物的特殊营养需求或其：根据某种微生物的特殊营养需求或其对化学、物理因素的抗性而设计的培养基对化学、物理因素的抗性而设计的培养基2.鉴别培养基鉴别培养基：在培养基中加有能与某一菌的无色代：在培养基中加有能与某一菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而用肉眼就能使谢产物发生显色反应的指示剂，从而用肉眼就能使该菌落与其他外形相似的它种菌落相区分的培养基该菌落与其他外形相似的它种菌落相区分的培养基。主要应用与。主要应用与鉴别菌种鉴别菌种（如：伊红（如：伊红美蓝培养基）美蓝培养基）第四页，讲稿共十五页哦4、配置天然培养基用的几种原材料特性：、配置天然培养基用的几种原材料特性：牛肉膏：牛肉膏：瘦牛肉加热抽提并浓缩成的膏状物。瘦牛肉加热抽提并浓缩成的膏状物。价值价值：富含糖类，有机含氮类，水溶性维生素和无机盐：富含糖类，有机含氮类，水溶性维生素和无机盐等。等。蛋白胨：蛋白胨：由酪素或明胶等蛋白质经酸或酶水解而成。由酪素或明胶等蛋白质经酸或酶水解而成。价值价值：富含有机氮，其中可能还有多种维生素和氮源：富含有机氮，其中可能还有多种维生素和氮源。琼脂：琼脂：从某些海藻中加热提取的复杂糖类。从某些海藻中加热提取的复杂糖类。价值价值：配置固体培养基时常用作：配置固体培养基时常用作凝固剂凝固剂，无营养价值，无营养价值 第五页，讲稿共十五页哦二、无菌技术：二、无菌技术：（一）、区别消毒和灭菌（一）、区别消毒和灭菌：1、消毒是指使用、消毒是指使用较为温和的物理或化学方法较为温和的物理或化学方法仅杀死仅杀死物体物体表面或内部一部分表面或内部一部分对人体有害的微生物（对人体有害的微生物（不包括不包括芽孢和芽孢和孢子孢子）常用方法：常用方法：（1）.煮沸消毒法煮沸消毒法：100摄氏度煮沸摄氏度煮沸56分钟可杀死微分钟可杀死微生物营养细胞及部分芽孢生物营养细胞及部分芽孢 （2）.巴氐消毒法巴氐消毒法：7075摄氏度煮摄氏度煮30分钟或分钟或80摄氏摄氏度煮度煮15分钟分钟 （主要应用于不耐高温的液体如：牛奶、啤（主要应用于不耐高温的液体如：牛奶、啤 酒、果酒、果汁、酱油等）汁、酱油等）（3）.化学药剂消毒化学药剂消毒：（如酒精擦拭双手、喷洒石炭（如酒精擦拭双手、喷洒石炭酸等）酸等）（4）.紫外线消毒紫外线消毒第六页，讲稿共十五页哦2、灭菌灭菌：使用：使用强烈理化因素强烈理化因素杀死物体内外杀死物体内外所有所有的微生物，包的微生物，包括括芽孢和孢子芽孢和孢子常用方法：常用方法：1.灼烧灭菌灼烧灭菌：将各种：将各种金属用具金属用具直接在酒精灯火焰的直接在酒精灯火焰的 充分燃烧层灼烧充分燃烧层灼烧 应用：（应用：（1）接种环、接种针接种环、接种针等金属用具等金属用具 （2）试管口或瓶口试管口或瓶口等容易被污染的部位等容易被污染的部位2.干热灭菌：干热灭菌：干热灭菌箱干热灭菌箱，在，在160170摄氏度加热、摄氏度加热、12小时小时 应用：应用：玻璃器皿玻璃器皿（吸管、培养皿）和（吸管、培养皿）和金属用具金属用具3.高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌：高压灭菌锅高压灭菌锅 注：（注：（1）使用时要待）使用时要待冷空气排尽冷空气排尽，再密封，再密封 （2）灭菌时压力为）灭菌时压力为100KPa，温度，温度121摄氏度摄氏度 应用：应用：培养基灭菌培养基灭菌第七页，讲稿共十五页哦2.在微生物培养时获得纯净培养物的关键在微生物培养时获得纯净培养物的关键 防止外来杂菌入侵防止外来杂菌入侵，无菌技术主要围绕无菌技术主要围绕如何避免杂菌的污染如何避免杂菌的污染展开，包括以展开，包括以下内容：下内容：（1）对实验操作的空间，操作者的衣着和手进行）对实验操作的空间，操作者的衣着和手进行清洁和消毒清洁和消毒 （2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌养基等器具进行灭菌 （3）实验操作应在）实验操作应在酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近进行进行 （4）操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围）操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触物品相接触 注：实验后，所有用过的培养基，培养液等都要统一注：实验后，所有用过的培养基，培养液等都要统一进行进行高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌后再丢弃，否则会造成后再丢弃，否则会造成环境污染环境污染 第八页，讲稿共十五页哦三、关于无菌操作：三、关于无菌操作：（一）平板培养基制备的一般步骤：（一）平板培养基制备的一般步骤：1.计算计算 2.称量：称量：注：牛肉膏较粘稠，可以用注：牛肉膏较粘稠，可以用玻璃棒玻璃棒挑取，放在称量纸上挑取，放在称量纸上称量称量 3.溶化：溶化：注：（注：（1）将牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加少量）将牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加少量的水，加热待牛肉膏与称量纸分离后，取出称量纸的水，加热待牛肉膏与称量纸分离后，取出称量纸 （2）熔化琼脂时要不断用玻璃棒搅拌，防止）熔化琼脂时要不断用玻璃棒搅拌，防止琼琼脂糊底而导致烧杯破裂脂糊底而导致烧杯破裂第九页，讲稿共十五页哦4.灭菌：灭菌：注：（注：（1）制作的棉塞要求即能）制作的棉塞要求即能防止杂菌感染防止杂菌感染又要又要通通气良好气良好，棉塞的松紧以不留缝隙为标准，棉塞的松紧以不留缝隙为标准 （2）培养基）培养基高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌；培养皿培养皿干热灭菌干热灭菌 （3）检测：灭菌后的培养基要放在恒温箱中保温）检测：灭菌后的培养基要放在恒温箱中保温12天，天，表面无菌落生成表面无菌落生成 5、倒平板：、倒平板：注：（注：（1）培养基灭菌后，需冷却至）培养基灭菌后，需冷却至50OC才能倒平板。原因才能倒平板。原因：温度过高，太烫，不易操作；过低，培养基易凝固。温度过高，太烫，不易操作；过低，培养基易凝固。估测方法：可以用手触摸装有培养基的锥形瓶，感觉温度估测方法：可以用手触摸装有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚烫手时，就可以到平板了。下降到刚刚烫手时，就可以到平板了。第十页，讲稿共十五页哦（2）倒平板时锥形瓶口要通过）倒平板时锥形瓶口要通过火焰火焰。原因：原因：防止瓶口沾染的微生物污染培养基。防止瓶口沾染的微生物污染培养基。(3)平板冷凝后要将平板冷凝后要将平板倒置平板倒置.原因原因:平板冷凝后平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠皿盖上会凝结水珠.,将培养基倒置将培养基倒置,既可既可以使培养基表面的水分更好地的挥发以使培养基表面的水分更好地的挥发,又可以防止皿盖上的又可以防止皿盖上的水珠落入培养基水珠落入培养基,造成污染造成污染.(4)实验后实验后,用过的培养基用过的培养基,培养也都要统一进行培养也都要统一进行高压蒸高压蒸汽灭菌汽灭菌后再丢弃后再丢弃.否则会造成环境污染否则会造成环境污染 第十一页，讲稿共十五页哦(二二)接种方法接种方法:微生物的接种方法中最常用的是微生物的接种方法中最常用的是平板划线法平板划线法和和稀稀释涂布法释涂布法，另外还有，另外还有斜面接种斜面接种和和穿刺接种穿刺接种等，各等，各种方法虽然各有不同，但其核心均是种方法虽然各有不同，但其核心均是防止杂菌污防止杂菌污染，保证培养物纯度染，保证培养物纯度。1、平板划线法：、平板划线法：（）、概念：通过接种环在琼脂固体培养基（）、概念：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。分散到培养基的表面。第十二页，讲稿共十五页哦（）、平板划线操作：（）、平板划线操作：、接种前接种前将接种环放在火焰上将接种环放在火焰上灼烧灼烧，直到烧红。目的：，直到烧红。目的：避免接种环可能存在的微生物污染培养物避免接种环可能存在的微生物污染培养物。、一次划线结束一次划线结束后，要后，要再次灼烧再次灼烧接种环。原因接种环。原因：杀死划线结束后接种环上残留的菌种杀死划线结束后接种环上残留的菌种。、方法：从第一区域的末端开始往第二区域内划线，、方法：从第一区域的末端开始往第二区域内划线，切不要将最后一曲的划线与第一区相连切不要将最后一曲的划线与第一区相连。原因：原因：下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，是次划线的末端，从而通过划线次数的增加，是每次划线每次划线时菌种数目逐渐减少，以便获得单纯的菌落。时菌种数目逐渐减少，以便获得单纯的菌落。、平板制备完成后，要做好标记（、平板制备完成后，要做好标记（时间、日期、时间、日期、菌种菌种等），倒置放入培养箱中培养。等），倒置放入培养箱中培养。第十三页，讲稿共十五页哦2、释涂布平板法、释涂布平板法：概念：将菌液进行一系列的概念：将菌液进行一系列的梯度稀释梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面。琼脂固体培养基的表面。注：如果在接种的培养基上生长的注：如果在接种的培养基上生长的菌落颜菌落颜色、形状、大小基本一致色、形状、大小基本一致，说明接种操作，说明接种操作是是符合要求的符合要求的；如果培养基上出现了如果培养基上出现了其他特征的菌其他特征的菌落落说明接种中的无菌操作还没有达到标说明接种中的无菌操作还没有达到标准。准。第十四页，讲稿共十五页哦感谢大家观看感谢大家观看第十五页，讲稿共十五页哦